对虾白斑杆状病毒(WSBV)定量PCR检测技术研究 被引量：15

1

作者 徐丽美 王玮 杨丰 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第1期14-16,共3页

报道了利用DNA重组技术在一段对虾白斑杆状病毒 (WhiteSpotBacilliformVirus ,,WSBV)的基因组DNA片段中缺失 74bp ,重组得到的内标质粒作为竞争性内标模板 ,并与阳标模板或病虾DNA模板共同扩增 ,建立了定量PCR检测方法。研究表明 ,定量... 报道了利用DNA重组技术在一段对虾白斑杆状病毒 (WhiteSpotBacilliformVirus ,,WSBV)的基因组DNA片段中缺失 74bp ,重组得到的内标质粒作为竞争性内标模板 ,并与阳标模板或病虾DNA模板共同扩增 ,建立了定量PCR检测方法。研究表明 ,定量PCR方法检测灵敏度达 10病毒分子DNA/ μl,样品DNA模板制备回收率约 50 % 。 展开更多

关键词 定量PCR 对虾白斑杆状病毒 wsbv 内标模板 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用WSBV的引物扩增中国对虾的杆状病毒DNA

2

作者 汪岷 苏冬梅 +2 位作者 包振民 邵济钧 戴继勋 《青岛海洋大学学报（自然科学版）》 CSCD 1998年第4期599-602,共4页

利用台湾报道的ＷＳＢＶ的ＰＣＲ引物，成功地扩增出了１４００ｂｐ左右的中国对虾的杆状病毒的ＤＮＡ片段，与预计的产物长度吻合。该引物对经初步离心处理的病虾组织也能扩增出特异性ＤＮＡ条带，而对正常虾组织ＤＮＡ、昆虫杆状病毒... 利用台湾报道的ＷＳＢＶ的ＰＣＲ引物，成功地扩增出了１４００ｂｐ左右的中国对虾的杆状病毒的ＤＮＡ片段，与预计的产物长度吻合。该引物对经初步离心处理的病虾组织也能扩增出特异性ＤＮＡ条带，而对正常虾组织ＤＮＡ、昆虫杆状病毒（ＡｃＭＮＰＶ）ＤＮＡ进行扩增，均获得阴性结果。说明该引物的特异性较高，对中国对虾的杆状病毒的检测具有一定的实际应用价值。实验结果同时说明ＷＳＢＶ与中国对虾的杆状病毒有同源序列存在，具有一定的保守性；用该引物进行的ＰＣＲ扩增为中国对虾的杆状病毒与其他相关病毒的比较研究提供了一种技术手段。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 中国对虾 杆状病毒 wsbv

原文传递

实验感染白斑杆状病毒(WSBV)的斑节对虾血液病理学研究 被引量：14

3

作者 张吕平 胡超群 吴灶和 《热带海洋》 CSCD 2000年第3期1-7,共7页

:用光镜观察经人工感染白斑杆状病毒 (WhiteSpotBaculovirus,WSBV)后患典型白斑病的斑节对虾Penaeusmonodon的血淋巴涂片 ,研究了WSBV导致的淋巴细胞数量及结构异常 ;通过检测感染WSBV后患病虾与健康虾的血清主要生化指标 ,首次揭示了... :用光镜观察经人工感染白斑杆状病毒 (WhiteSpotBaculovirus,WSBV)后患典型白斑病的斑节对虾Penaeusmonodon的血淋巴涂片 ,研究了WSBV导致的淋巴细胞数量及结构异常 ;通过检测感染WSBV后患病虾与健康虾的血清主要生化指标 ,首次揭示了两者的主要差异及WSBV在宿主体内增殖的时间过程。结果表明 :患病虾淋巴细胞明显减少 ,无颗粒细胞难以找到 ,颗粒细胞和小颗粒细胞分别为健康虾的 1 1 .7%和 4% ;颗粒细胞内出现深染区、空白区或异样突起。血涂片上偶尔发现有大型固定性吞噬细胞。在患病虾血清主要生化指标中 ,Ca2 +含量比健康虾显著升高 ,患病虾为 1 5.93mmol·L- 1 ,健康虾为 1 0 .71mmol·L- 1 ;相反 ,患病虾血清中总蛋白 (Tp)、总磷 (PB)及乳酸脱氢酶 (LDH)均比健康虾个体低 ,3者含量依次为 :52 .0 7g·L- 1 ,0 .34mmol·L- 1 和 35.2 7IU·L- 1 ,在健康虾个体血清中为 :66.2 9g·L- 1 ,0 66mmol·L- 1 及 82 .36IU·L- 1 ;而K+,Mg2 +含量无显著差异。血清中Ca2 +,PB及TP的含量可以作为斑节对虾感染WSBV后出现白斑病的血清生化特征。斑节对虾感染WSBV后不同时间内血清主要生化指标显示其增殖的时间顺序可能为 :2 4h内主要进行核酸复制 ,2 4—48h主要进行囊膜蛋白质的合成 ,病毒从入侵宿主细胞到从细? 展开更多

关键词 白斑杆状病毒 斑节对虾 血液病理 血清 LDH

在线阅读 下载PDF 职称材料

对虾白斑杆状病毒(WSBV)对斑节对虾的实验感染与病理学研究 被引量：4

4

作者 张吕平 胡超群 任春华 《热带海洋》 CSCD 2000年第2期69-73,T002,共6页

用取自发病虾塘患典型白斑病的病虾为毒源 ,对健康斑节对虾Penaeusmonodon进行人工感染 ,按Koch氏法证实了对虾白斑杆状病毒 (WSBV)是白斑病的病原。对人工感染WSBV后患典型白斑病的斑节对虾的胃、肠及皮下结缔组织进行石蜡切片和超薄切... 用取自发病虾塘患典型白斑病的病虾为毒源 ,对健康斑节对虾Penaeusmonodon进行人工感染 ,按Koch氏法证实了对虾白斑杆状病毒 (WSBV)是白斑病的病原。对人工感染WSBV后患典型白斑病的斑节对虾的胃、肠及皮下结缔组织进行石蜡切片和超薄切片 ,研究WSBV引起的组织病理变化和宿主细胞感染WSBV后的超微病变过程。结果表明 :感染WSBV后病虾的不同组织均存在广泛的变性、坏死 ,上皮细胞大量解体、脱落 ;部分细胞核肿大、游离 ;结缔组织糜烂 ,呈现空泡化 ;未发现包涵体。透射电镜照片显示 :感染WSBV后的病虾在感染前期 ,靶细胞核膨胀 ,核仁消失 ,核外膜破损 ,染色质靠边分布 ,内质网断裂 ,核糖体脱落 ,线粒体肿胀 ,高尔基体萎缩 ,溶酶体空泡化 ;感染中期 ,病毒粒子在细胞核内大量复制 ,直至充满整个核 ,细胞核内无结构化 ,核膜及质膜皱缩 ;感染后期 ,核胀破 ,病毒粒子从核内释放 ,细胞核呈空囊状 ,胞质内髓样结构明显 ,细胞器解体 ,细胞功能丧失。 展开更多

关键词 白斑杆状病毒 斑节对虾 组织病理 超微病理

在线阅读 下载PDF 职称材料

对南美白对虾WSBV病毒的定性和定量检测研究

5

作者 曹新志 王柱 谢溢 《四川理工学院学报（自然科学版）》 CAS 2008年第4期58-60,64,共4页

利用PCR定性和定量检测对100尾南美白对虾做了研究,发现致病虾在定性检测中成阳性,健康虾成阴性或者弱阳性;致病虾在定量检测中WSBV含量大于103个病毒粒子/mg,健康虾小于等于103个病毒粒子/mg,由此可以得知白斑病爆发的临界值为103个病... 利用PCR定性和定量检测对100尾南美白对虾做了研究,发现致病虾在定性检测中成阳性,健康虾成阴性或者弱阳性;致病虾在定量检测中WSBV含量大于103个病毒粒子/mg,健康虾小于等于103个病毒粒子/mg,由此可以得知白斑病爆发的临界值为103个病毒粒子/mg。 展开更多

关键词 南美白对虾 wsbv PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

白斑综合症杆状病毒的感染途径和宿主种类 被引量：90

6

作者 何建国 周化民 +2 位作者 姚伯 杨晓明 邓敏 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期65-69,共5页

利用生物检测、ＰＣＲ、组织病理和电镜技术，通过投喂和浸泡感染方式，结果表明口和消化道是斑节对虾感染白斑综合症杆状病毒（ＷＳＢＶ）的主要途径；宿主经口摄食携带ＷＳＢＶ媒介生物是ＷＳＢＶ传播的主要途径；确定了２１种较大型... 利用生物检测、ＰＣＲ、组织病理和电镜技术，通过投喂和浸泡感染方式，结果表明口和消化道是斑节对虾感染白斑综合症杆状病毒（ＷＳＢＶ）的主要途径；宿主经口摄食携带ＷＳＢＶ媒介生物是ＷＳＢＶ传播的主要途径；确定了２１种较大型的ＷＳＢＶ宿主种类，其中以虾蟹为主； 展开更多

关键词 白斑综合症 杆状病毒 感染 宿主 对虾 wsbv 养殖

在线阅读 下载PDF 职称材料

检测中国对虾非包涵体型杆状病毒的PCR方法的建立 被引量：5

7

作者 徐洪涛 朴春爱 +6 位作者 王雷 朱俊萍 董杰 王长安 相建海 金奇 侯云德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期354-359,共6页

中国对虾非包涵体型杆状病毒（ＰｃＮＯＢＶ） 是中国大陆养殖的中国对虾（ Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ） 暴发性流行病———白斑综合征的主要病原，与台湾流行的Ｐｍ ＮＯＢⅢ、泰国的Ｐｍ ＮＯＢⅡ及日本的ＲＶ－ ＰＪ（ ＝ ... 中国对虾非包涵体型杆状病毒（ＰｃＮＯＢＶ） 是中国大陆养殖的中国对虾（ Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ） 暴发性流行病———白斑综合征的主要病原，与台湾流行的Ｐｍ ＮＯＢⅢ、泰国的Ｐｍ ＮＯＢⅡ及日本的ＲＶ－ ＰＪ（ ＝ ＰＲＤＶ） 有相似的致病特征、形态学及组织病理学特征。为了解ＰｃＮＯＢＶ 与Ｐｍ ＮＯＢⅢ两种地域分布邻近的毒株基因水平的关系，并建立早期、敏感、特异的检测技术，利用氯化铯密度梯度超速离心技术分离纯化了ＰｃＮＯＢＶ 核衣壳，根据台湾地区分离的Ｐｍ ＮＯＢⅢ的基因序列设计一对引物，从纯化的ＰｃＮＯＢＶ ＤＮＡ 及自然发病的中国对虾、日本对虾和斑节对虾组织ＤＮＡ中成功地扩增出长为３５５ｂｐ 的目的片段，可检测出３ ．４ｐｇ 的ＰｃＮＯＢＶ ＤＮＡ。从健康对虾组织提取的ＤＮＡ未能扩增出目的片段。扩增片段序列与Ｐｍ ＮＯＢⅢ相应的基因序列相同。该结果从分子水平证实ＰｃＮＯＢＶ 与Ｐｍ ＮＯＢⅢ存在基因同源性，同时表明聚合酶链式反应（ＰＣＲ） 可以作为检测ＰｃＮＯＢＶ 的一种敏感、特异、早期、快速的诊断手段。 展开更多

关键词 中国对虾 诊断 PCR PcNOBV wsbv

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用定量PCR方法研究对虾白斑杆状病毒感染与发病的关系 被引量：18

8

作者 徐丽美 杨丰 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第12期9-11,共3页

收集了 6批共 134尾不同感染程度的对虾样品 ,测定其WSBV含量。检测结果表明 ,无病症的对虾样品每毫克组织所携带的病毒量低于 10 3 个病毒粒子 ,有病灶的对虾样品每毫克组织所携带的病毒量均高于 10 3 个病毒粒子 ,根据这一结果 ,初步... 收集了 6批共 134尾不同感染程度的对虾样品 ,测定其WSBV含量。检测结果表明 ,无病症的对虾样品每毫克组织所携带的病毒量低于 10 3 个病毒粒子 ,有病灶的对虾样品每毫克组织所携带的病毒量均高于 10 3 个病毒粒子 ,根据这一结果 ,初步确定了疾病爆发的危险临界值为每毫克组织含 10 3 个病毒粒子。 展开更多

关键词 对虾斑杆状病毒 wsbv 定量PCR 临界值 感染程度 发病学

在线阅读 下载PDF 职称材料

对虾白斑杆状病毒对螯虾血淋巴原代细胞的感染 被引量：8

9

作者 李钫 杨丰 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第12期74-77,共4页

应用螯虾血淋巴细胞的原代培养系统 ,作为对虾白斑杆状病毒 (whitespotbacilliformvirus ,WSBV )的替代宿主 ,进行体外感染实验。通过PCR及RNA点杂交的方法监测WSBV的DNA复制、转录情况。结果显示 ,来源于对虾的WSBV可以感染体外培养的... 应用螯虾血淋巴细胞的原代培养系统 ,作为对虾白斑杆状病毒 (whitespotbacilliformvirus ,WSBV )的替代宿主 ,进行体外感染实验。通过PCR及RNA点杂交的方法监测WSBV的DNA复制、转录情况。结果显示 ,来源于对虾的WSBV可以感染体外培养的螯虾原代血淋巴细胞 ,并在其中增殖 ;WSBV感染螯虾原代血淋巴细胞后 6h左右病毒开始大量复制 ,感染后的细胞可以存活数日。在目前虾细胞系尚未建立之前 ,螯虾血淋巴原代细胞可以作为研究WSBV感染、转录和复制等机理的替代系统。 展开更多

关键词 对虾白斑杆状病毒 wsbv 螯虾血淋巴细胞 原代培养 病毒感染

在线阅读 下载PDF 职称材料

1996年中国对虾暴发性流行病病毒病原研究 被引量：14

10

作者 徐洪涛 王运涛 +5 位作者 朴春爱 朱俊萍 谢佳林 相建海 屈建国 张宝云 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期158-163,共6页

１９９６年６月至８月，青岛地区养殖的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）大面积暴发流行病，死亡率达９０％以上。发病对虾典型表征为甲壳白斑。病虾鳃组织匀浆滤液经微孔滤膜过滤除菌后，注射给健康对虾进行人工感染试验... １９９６年６月至８月，青岛地区养殖的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）大面积暴发流行病，死亡率达９０％以上。发病对虾典型表征为甲壳白斑。病虾鳃组织匀浆滤液经微孔滤膜过滤除菌后，注射给健康对虾进行人工感染试验，９天内累计死亡率达１００％，发病症状及体征与自然发病对虾相似。电镜下自然发病对虾鳃、胃、头胸甲下表皮、淋巴样器官、触角腺等组织细胞核内发现大量杆状病毒，未见包涵体；人工感染对虾相同组织中可见大量同样病毒。切片中病毒粒子有包膜，完整毒粒大小为１２５±７６×３４５±１６ｎｍ，核衣壳为８５±６５×２９５ｎｍ。核质内可见不同成熟阶段的病毒形态，部分毒粒一端有突出的乳头状结构。经氯化铯密度梯度纯化后，包膜全部丢失。负染标本显示，核衣壳呈杆状，螺旋对称，大小为８０±１３×３８０±２４３ｎｍ，衣壳由１３～１６条螺旋带构成。研究结果表明，该病毒致病及形态特征与已报道的白斑征杆状病毒（Ｗｈｉｔｅｓｐｏｔｓｙｎｄｒｏｍｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ，ＷＳＢＶ）相似，是１９９６年中国对虾暴发性流行病的主要病原。本文称之为“中国对虾非包涵体型杆状病毒（Ｐｅｎｅａｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｎｏｎ－ｏｃｌｕｄｅｄｂａｃｕｌｏ? 展开更多

关键词 中国对虾 流行病 白斑征杆状病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

对虾白斑病毒感染的电子显微镜观察及DNA杂交证据 被引量：6

11

作者 徐洪涛 朴春爱 +3 位作者 王雷 王文兴 相建海 王运涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期252-256,共5页

中国大陆养殖的中国对虾从 1 993年开始至今连年爆发病毒性流行病 ,俗称“白斑病”(WSBV) ,死亡率近 1 0 0 % ,造成巨大经济损失。为进一步明确虾病暴发原因 ,利用电子显微镜技术 ,对 1 993年至 1 998年收集的发病中国对虾组织进行观察 ... 中国大陆养殖的中国对虾从 1 993年开始至今连年爆发病毒性流行病 ,俗称“白斑病”(WSBV) ,死亡率近 1 0 0 % ,造成巨大经济损失。为进一步明确虾病暴发原因 ,利用电子显微镜技术 ,对 1 993年至 1 998年收集的发病中国对虾组织进行观察 ,发现病原体为直径 ( 1 2 5±7 6)nm、长约 ( 345± 1 6)nm大小的带包膜的非包涵体型杆状病毒。经氯化铯密度梯度超速离心技术获得了纯化的病毒核衣壳 ,大小为 ( 80± 1 3)nm× ( 380± 2 4 )nm。形态学特征与台湾地区发现的白斑杆状病毒 (WSBV)相似。利用地高辛标记的WSBVDNA探针对病虾标本及纯化病毒DNA进行斑点杂交检测 ,均呈阳性反应 ,而与正常对虾组织无杂交反应。从形态学及分子生物学角度证明WSBV感染是造成中国大陆养殖对虾连年暴发流行病的重要原因。 展开更多

关键词 中国对虾 白斑杆状病毒 电子显微镜 DNA探针

在线阅读 下载PDF 职称材料

中国对虾杆状病毒PCR扩增产物的DNA序列测定及分析 被引量：3

12

作者 汪岷 马洪明 +3 位作者 戴继勋 包振民 苏冬梅 邵济钧 《海洋水产研究》 CSCD 1998年第2期5-9,共5页

采用台湾报道的白点综合征相关杆状病毒（WSBV）的一对特异引物；对中国对虾的杆状病毒进行PCR扩增，获得了预期的1447bp的扩增产物，将PCR产物用QIAEXII（玻璃奶）纯化；直接进行序列测定。部分序列测定及分析结果表明，中国对虾的杆... 采用台湾报道的白点综合征相关杆状病毒（WSBV）的一对特异引物；对中国对虾的杆状病毒进行PCR扩增，获得了预期的1447bp的扩增产物，将PCR产物用QIAEXII（玻璃奶）纯化；直接进行序列测定。部分序列测定及分析结果表明，中国对虾的杆状病毒的部分DNA序列与台湾WSBV的相关序列的同源性为98．7％，经计算机分析该段基因序列有6个ORF（开放读框）。该PCR引物可以用于中国对虾杆状病毒及其相关病毒的检测与比较研究。 展开更多

关键词 中国对虾 杆状病毒 DNA序列 PCR扩增产物 测定

在线阅读 下载PDF 职称材料

白斑综合症杆状病毒对对虾和罗氏沼虾致病性的研究 被引量：7

13

作者 姚泊 何建国 莫福 《广州大学学报（自然科学版）》 CAS 2002年第1期35-38,共4页

对比研究白斑综合症杆状病毒对斑节对虾、日本对虾、南美白对虾和罗氏沼虾的致病性 ,其生产养殖结果表明 :第一次在廉江龙营围虾场养殖的南美白对虾 ,在养殖了 2 7天以后开始爆发白斑综合症病毒病 ,患病的南美白对虾、斑节对虾、日本对... 对比研究白斑综合症杆状病毒对斑节对虾、日本对虾、南美白对虾和罗氏沼虾的致病性 ,其生产养殖结果表明 :第一次在廉江龙营围虾场养殖的南美白对虾 ,在养殖了 2 7天以后开始爆发白斑综合症病毒病 ,患病的南美白对虾、斑节对虾、日本对虾病症相同 ,其甲壳特别是头胸壳具有白色斑点 .养殖的罗氏沼虾没有出现病症 .人工感染实验结果表明 :白斑综合症杆状病毒能引起南美白对虾 90 %左右的死亡率 ,引起罗氏沼虾大约 5 0 %的死亡率 .电镜观察结果表明 :这三种对虾感染的病毒都是白斑综合症杆状病毒 . 展开更多

关键词 白斑综合症杆状病毒 斑节对虾 日本对虾 南美白对虾 罗氏沼虾 致病性 人工感染实验

在线阅读 下载PDF 职称材料

卤虫体外转录模型及其转录活性检测

14

作者 李钦 林雄晖 杨丰 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第6期5-8,共4页

通过改进的细胞核提取方法 ,获取了纯度较高的细胞核并建立了卤虫体外转录系统模型。将待检测基因与含转录起始位点的报告基因的编码序列相连 ,制备成体外转录模板。由于体外转录所产生的RNA量极少 ,需要一种灵敏的方法检测生成的RNA。... 通过改进的细胞核提取方法 ,获取了纯度较高的细胞核并建立了卤虫体外转录系统模型。将待检测基因与含转录起始位点的报告基因的编码序列相连 ,制备成体外转录模板。由于体外转录所产生的RNA量极少 ,需要一种灵敏的方法检测生成的RNA。应用了RT PCR技术鉴定体外转录产物的方法能有效解决这一问题。转录后 ,用无RNase的DNaseI将DNA模板完全降解 ;生成的RNA经逆转录反应合成cDNA ,再以cD NA为模板 ,用相应的引物进行PCR扩增 ,琼脂糖凝胶电泳检测结果。该法灵敏度高 ,操作简单安全 ,无需同位素。 展开更多

关键词 卤虫 体外转录 RT-PCR 基因转录调控 转录活性 检测 对虾 白斑病

在线阅读 下载PDF 职称材料

对虾养成期疾病的防治

15

作者 王克行 《齐鲁渔业》 2000年第2期41-44,共4页

关键词 对虾养成期疾病 wsbv HPV 支原体病 防治

原文传递