目的探讨端粒酶新核心亚单位WD40-encoding RNA antisense to p53(WRAP53β)与头颈鳞癌(squamous cell carcinoma of the head and neck,HNSC)的临床、基因组和免疫浸润特征的关系,寻求HNSC的潜在靶向联合治疗方法。方法采用TIMER在线...目的探讨端粒酶新核心亚单位WD40-encoding RNA antisense to p53(WRAP53β)与头颈鳞癌(squamous cell carcinoma of the head and neck,HNSC)的临床、基因组和免疫浸润特征的关系,寻求HNSC的潜在靶向联合治疗方法。方法采用TIMER在线模块预测WRAP53β表达与TCGA队列中头颈肿瘤的临床特征、癌基因或免疫浸润之间的关系,TISCH网站分析其在单细胞水平的表达,通过CARE软件分析靶向WRAP53β的小分子抑制剂。体外实验验证中,合成sh WRAP53β序列的重组慢病毒颗粒,构建稳定表达sh WRAP53β的口腔鳞癌Cal27细胞(sh WRAP53β组),并设置两个对照组(shNC组:Cal27细胞加入含非特异性对照序列的慢病毒颗粒,Con组:未处理的Cal27细胞);MTT法检测3组细胞的增殖能力,细胞免疫荧光检测进一步定性检测sh WRAP53β组和shNC组细胞中P53蛋白的表达;Western blot检测第18、23、28代sh WRAP53β组和shNC组细胞的WRAP53β和DNA损伤蛋白γ-H2AX的表达。最后,收集口腔鳞癌病例样本13例,口腔黏膜炎性病例样本7例,通过免疫组化验证口腔鳞癌临床标本中WRAP53β和γ-H2AX的表达情况。结果TIMER分析发现WRAP53β表达在HNSC中较正常组织显著高表达。WRAP53β基因水平与p53通路基因如CCNB1、CCNB2及CDK1呈显著正相关,与HPV阳性的头颈肿瘤炎症因子IFN-γ、IL-23A呈正相关,而与IL-1A、IL-6呈负相关,但与浸润免疫细胞无显著相关。TISCH单细胞测序数据集同样显示该基因在恶性细胞中呈高表达,在免疫细胞中表达水平极低或无表达。CARE评分预测对WRAP53β共抑制效果最强的药物为靶向ATM、CDK1和MDM4的抑制剂。体外细胞实验证实,与对照组相比,sh WRAP53β组Cal27细胞的第5天到第7天的增殖能力下降(P<0.05),P53表达降低。Western blot检测示,与对照组相比,sh WRAP53β组WRAP53β的表达水平在第18、23、28代均降低(P<0.05),γ-H2AX表达仅在第18、28代降低(P<0.05)。临床标本显示口腔鳞癌组织中γ-H2AX的阳性表达检出率高(12/13),口腔黏膜炎样本未检出WRAP53β阳性表达(0/7)。结论WRAP53β在HSNC中呈高表达水平,且与p53通路基因显著相关。ATM、CDK1和MDM4抑制剂可能是WRAP53β的潜在共抑制药物。干扰WRAP53β可能导致DNA损伤降低,从而具有对HNSC的治疗潜力。展开更多
目的:探讨抑制p53的反义转录本WRAP53α基因表达对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的影响。方法:不同浓度的CDDP处理U-2OS细胞后,MTT法检测细胞的增殖率;不同浓度CDDP处理36 h和10μmol/L CDDP处理不同时间以及si WRAP5...目的:探讨抑制p53的反义转录本WRAP53α基因表达对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的影响。方法:不同浓度的CDDP处理U-2OS细胞后,MTT法检测细胞的增殖率;不同浓度CDDP处理36 h和10μmol/L CDDP处理不同时间以及si WRAP53转染后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测U-2OS细胞中WARAP53α和p53 m RNA及p53蛋白的表达水平;FCM法检测CDDP单独处理及si WRAP53转染后联合CDDP处理组U-2OS细胞的凋亡率。结果:CDDP处理后,U-2OS细胞的增殖率低于未处理的对照组(P<0.05),且呈浓度依赖性。CDDP处理后,U-2OS细胞中WRAP53αm RNA的表达水平明显高于未处理的空白对照组(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性;p53 m RNA及p53蛋白的表达水平高于空白对照组(P<0.05)。si WRAP53转染后,WRAP53α和p53 m RNA及p53蛋白的表达水平低于空白对照组(P<0.05)。CDDP单独给药组U-2OS细胞凋亡率高于si WRAP53α转染联合CDDP处理组(P<0.05),2组细胞的凋亡率均高于空白对照组(P<0.05)。结论:CDDP可抑制U-2OS细胞的增殖,诱导WRAP53α和p53 m RNA及p53蛋白的表达;干扰WRAP53α基因的表达可下调p53的表达水平,并逆转CDDP诱导的细胞凋亡。展开更多
目的:探讨端粒酶新核心亚单位(WD40-encoding RNA antisense to p53,WRAP53)又名端粒酶卡哈尔体蛋白1(telomerase cajal body protein 1,TCAB1)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达,分析其与患者临床病理特...目的:探讨端粒酶新核心亚单位(WD40-encoding RNA antisense to p53,WRAP53)又名端粒酶卡哈尔体蛋白1(telomerase cajal body protein 1,TCAB1)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达,分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:收集28例PTC患者的癌及癌周正常新鲜组织标本,应用实时荧光定量聚合酶链反应法(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPR-PCR)及免疫组织化学法分别检测WRAP53 mRNA及蛋白在PTC及周围正常组织中的表达,收集117例PTC术后患者的临床数据及对应的癌组织的石蜡切片进行免疫组化检测,分析其蛋白表达水平与甲状腺乳头状癌患者的临床病理特征的相关性,最后应用蛋白质表达图谱(The Human Protein Atlas,HPA)数据库探究WRAP53与PTC预后之间的关系。结果:qPR-PCR及免疫组化结果提示WRAP53在PTC中较正常组织高表达(P<0.05)。与WRAP53低表达的PTC患者相比,WRAP53高表达的PTC患者肿瘤直径更长,更易出现淋巴结转移(P<0.05)。HPA数据库显示WRAP53高表达的PTC患者的生存率差于WRAP53低表达的PTC患者(P=0.041)。结论:通过本次研究表明,WRAP53在PTC组织中表达较周围正常组织升高,且其高表达与PTC增殖、淋巴结转移及不良预后相关。WRAP53可能是治疗PTC新的潜在靶点。展开更多
文摘目的探讨端粒酶新核心亚单位WD40-encoding RNA antisense to p53(WRAP53β)与头颈鳞癌(squamous cell carcinoma of the head and neck,HNSC)的临床、基因组和免疫浸润特征的关系,寻求HNSC的潜在靶向联合治疗方法。方法采用TIMER在线模块预测WRAP53β表达与TCGA队列中头颈肿瘤的临床特征、癌基因或免疫浸润之间的关系,TISCH网站分析其在单细胞水平的表达,通过CARE软件分析靶向WRAP53β的小分子抑制剂。体外实验验证中,合成sh WRAP53β序列的重组慢病毒颗粒,构建稳定表达sh WRAP53β的口腔鳞癌Cal27细胞(sh WRAP53β组),并设置两个对照组(shNC组:Cal27细胞加入含非特异性对照序列的慢病毒颗粒,Con组:未处理的Cal27细胞);MTT法检测3组细胞的增殖能力,细胞免疫荧光检测进一步定性检测sh WRAP53β组和shNC组细胞中P53蛋白的表达;Western blot检测第18、23、28代sh WRAP53β组和shNC组细胞的WRAP53β和DNA损伤蛋白γ-H2AX的表达。最后,收集口腔鳞癌病例样本13例,口腔黏膜炎性病例样本7例,通过免疫组化验证口腔鳞癌临床标本中WRAP53β和γ-H2AX的表达情况。结果TIMER分析发现WRAP53β表达在HNSC中较正常组织显著高表达。WRAP53β基因水平与p53通路基因如CCNB1、CCNB2及CDK1呈显著正相关,与HPV阳性的头颈肿瘤炎症因子IFN-γ、IL-23A呈正相关,而与IL-1A、IL-6呈负相关,但与浸润免疫细胞无显著相关。TISCH单细胞测序数据集同样显示该基因在恶性细胞中呈高表达,在免疫细胞中表达水平极低或无表达。CARE评分预测对WRAP53β共抑制效果最强的药物为靶向ATM、CDK1和MDM4的抑制剂。体外细胞实验证实,与对照组相比,sh WRAP53β组Cal27细胞的第5天到第7天的增殖能力下降(P<0.05),P53表达降低。Western blot检测示,与对照组相比,sh WRAP53β组WRAP53β的表达水平在第18、23、28代均降低(P<0.05),γ-H2AX表达仅在第18、28代降低(P<0.05)。临床标本显示口腔鳞癌组织中γ-H2AX的阳性表达检出率高(12/13),口腔黏膜炎样本未检出WRAP53β阳性表达(0/7)。结论WRAP53β在HSNC中呈高表达水平,且与p53通路基因显著相关。ATM、CDK1和MDM4抑制剂可能是WRAP53β的潜在共抑制药物。干扰WRAP53β可能导致DNA损伤降低,从而具有对HNSC的治疗潜力。
文摘目的:探讨抑制p53的反义转录本WRAP53α基因表达对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的影响。方法:不同浓度的CDDP处理U-2OS细胞后,MTT法检测细胞的增殖率;不同浓度CDDP处理36 h和10μmol/L CDDP处理不同时间以及si WRAP53转染后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测U-2OS细胞中WARAP53α和p53 m RNA及p53蛋白的表达水平;FCM法检测CDDP单独处理及si WRAP53转染后联合CDDP处理组U-2OS细胞的凋亡率。结果:CDDP处理后,U-2OS细胞的增殖率低于未处理的对照组(P<0.05),且呈浓度依赖性。CDDP处理后,U-2OS细胞中WRAP53αm RNA的表达水平明显高于未处理的空白对照组(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性;p53 m RNA及p53蛋白的表达水平高于空白对照组(P<0.05)。si WRAP53转染后,WRAP53α和p53 m RNA及p53蛋白的表达水平低于空白对照组(P<0.05)。CDDP单独给药组U-2OS细胞凋亡率高于si WRAP53α转染联合CDDP处理组(P<0.05),2组细胞的凋亡率均高于空白对照组(P<0.05)。结论:CDDP可抑制U-2OS细胞的增殖,诱导WRAP53α和p53 m RNA及p53蛋白的表达;干扰WRAP53α基因的表达可下调p53的表达水平,并逆转CDDP诱导的细胞凋亡。
文摘目的:探讨端粒酶新核心亚单位(WD40-encoding RNA antisense to p53,WRAP53)又名端粒酶卡哈尔体蛋白1(telomerase cajal body protein 1,TCAB1)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达,分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:收集28例PTC患者的癌及癌周正常新鲜组织标本,应用实时荧光定量聚合酶链反应法(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPR-PCR)及免疫组织化学法分别检测WRAP53 mRNA及蛋白在PTC及周围正常组织中的表达,收集117例PTC术后患者的临床数据及对应的癌组织的石蜡切片进行免疫组化检测,分析其蛋白表达水平与甲状腺乳头状癌患者的临床病理特征的相关性,最后应用蛋白质表达图谱(The Human Protein Atlas,HPA)数据库探究WRAP53与PTC预后之间的关系。结果:qPR-PCR及免疫组化结果提示WRAP53在PTC中较正常组织高表达(P<0.05)。与WRAP53低表达的PTC患者相比,WRAP53高表达的PTC患者肿瘤直径更长,更易出现淋巴结转移(P<0.05)。HPA数据库显示WRAP53高表达的PTC患者的生存率差于WRAP53低表达的PTC患者(P=0.041)。结论:通过本次研究表明,WRAP53在PTC组织中表达较周围正常组织升高,且其高表达与PTC增殖、淋巴结转移及不良预后相关。WRAP53可能是治疗PTC新的潜在靶点。
