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WIPI2基因过表达慢病毒载体的构建及表达
1
作者 罗焱 洪琪 +4 位作者 梁乐怡 余诗玥 陈琼霞 韩晓芳 镇鸿燕 《生物技术进展》 2025年第1期135-141,共7页
WD重复结构域磷酸肌醇相互作用蛋白2(WD repeat domain,phosphoinositide interacting 2,WIPI2)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中过度表达,提示WIPI2可能与CRC进展密切相关,但确切作用机制尚不清楚,因此,构建稳定过表达WIPI2的CRC... WD重复结构域磷酸肌醇相互作用蛋白2(WD repeat domain,phosphoinositide interacting 2,WIPI2)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中过度表达,提示WIPI2可能与CRC进展密切相关,但确切作用机制尚不清楚,因此,构建稳定过表达WIPI2的CRC细胞模型,可为深入研究WIPI2在CRC中的效应机制及发现CRC潜在治疗靶点提供有力的实验工具。根据人类WIPI2基因序列设计,构建过表达WIPI2基因的慢病毒载体,并感染CRC细胞,评价重组慢病毒载体提高WIPI2蛋白表达的效果。经基因测序证实重组慢病毒载体的序列与WIPI2目标序列一致,利用293T进行病毒包装后测定重组慢病毒的病毒滴度,GL190-WIPI2的滴度为2.16×10^(8)TU·mL^(-1);过表达WIPI2稳转细胞株中WIPI2蛋白的表达水平明显上调,成功构建了WIPI2过表达慢病毒载体,并建立了过表达WIPI2基因的稳转CRC细胞株,为研究WIPI2在CRC中的作用提供了细胞模型。 展开更多
关键词 结直肠癌 wipi2 慢病毒载体
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自噬基因WIPI2在人肝细胞癌索拉非尼耐药细胞株Huh7-SR中的表达及意义 被引量：1
2
作者 陈灿金 叶在秉 +3 位作者 阮煜 童洪飞 倪仲琳 赵亚新 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2020年第3期164-168,174,共6页
目的探讨自噬基因WIPI2在人肝细胞癌索拉非尼耐药细胞株Huh7-SR中的表达及意义。方法以人肝细胞癌Huh7细胞为亲本细胞,采用药物浓度梯度法建立人肝细胞癌索拉非尼耐药细胞株Huh7-SR;用蛋白质印迹法(Western blotting)检测WIPI2蛋白在Huh... 目的探讨自噬基因WIPI2在人肝细胞癌索拉非尼耐药细胞株Huh7-SR中的表达及意义。方法以人肝细胞癌Huh7细胞为亲本细胞,采用药物浓度梯度法建立人肝细胞癌索拉非尼耐药细胞株Huh7-SR;用蛋白质印迹法(Western blotting)检测WIPI2蛋白在Huh7细胞与Huh7-SR细胞中的表达情况;用siRNA转染法敲低Huh7-SR细胞中的WIPI2基因表达,用平板克隆实验检测Huh7-SR细胞对索拉非尼的敏感性改变。结果 WIPI2蛋白在耐药株Huh7-SR细胞中为高表达[蛋白相对表达值为(2.18±0.23)],明显高于其在Huh7细胞中的表达水平(1.02±0.07),二者差异具有统计学意义(P<0.05);在si-WIPI2转染后的Huh7-SR细胞中WIPI2蛋白表达水平降低(0.44±0.03),而si-NC转染后的Huh7-SR细胞中WIPI2蛋白仍为高表达(1.21±0.08);在索拉非尼的作用下,Huh7-SR的si-WIPI2转染组的细胞克隆数为(60±4)个,较si-NC转染组的细胞克隆数[(102±3)个]明显减少(P<0.05)。结论自噬基因WIPI2在人肝细胞癌耐药株Huh7-SR中的高表达对其耐药形成具有重要作用,敲低自噬基因WIPI2可恢复Huh7-SR细胞对索拉非尼的敏感性,这表明WIPI2有望成为肝细胞癌治疗的新的分子靶点。 展开更多
关键词 肝肿瘤 索拉非尼耐药性 wipi2基因 自噬
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WIPI2在经典自噬和非经典自噬中的作用 被引量：1
3
作者 许银丰 万伟 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第27期3698-3706,共9页
细胞自噬是真核生物特有的依赖溶酶体的细胞内降解途径,通过清除蛋白聚集体、受损细胞器和入侵病原体等细胞内容物,维持细胞内环境稳定.WIPI蛋白是在哺乳动物细胞中鉴定的与细胞自噬密切相关的一类蛋白家族.其中,WIPI2主要调控自噬前体... 细胞自噬是真核生物特有的依赖溶酶体的细胞内降解途径,通过清除蛋白聚集体、受损细胞器和入侵病原体等细胞内容物,维持细胞内环境稳定.WIPI蛋白是在哺乳动物细胞中鉴定的与细胞自噬密切相关的一类蛋白家族.其中,WIPI2主要调控自噬前体的延伸过程,是直接参与自噬小体形成的少数必需蛋白之一.WIPI2可通过多种不同的作用方式行使功能.近年来的研究发现,除了营养剥夺诱导的经典自噬,WIPI2对于病毒感染诱导的非经典自噬同样必不可少.而且,在不同类型的自噬途径中,不同的细胞内外刺激信号可通过调控WIPI2的蛋白稳定性或者WIPI2与自噬前体的亲和力,影响细胞内的自噬水平,帮助细胞更好地应对内外环境的改变.值得一提的是,WIPI2的功能缺失突变与一类引起发育障碍的人类遗传病相关.本文主要围绕WIPI2在经典自噬和非经典自噬中的作用方式与调控机制,综述近年来的研究进展. 展开更多
关键词 wipi2 经典自噬 非经典自噬 自噬小体 自噬前体
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