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转运必需内体分选复合物螺旋纤丝Vps24⁃Vps2的冷冻电镜结构研究
1
作者 刘德生 李耀旺 孙珊 《电子显微学报》 北大核心 2025年第1期28-35,共8页
转运必需内体分选复合物-Ⅲ(endosomal sorting complex required for transport-Ⅲ,ESCRT-Ⅲ)介导了一系列细胞膜重塑事件,包括多囊体的形成、细胞分裂和病毒释放等。这些过程的关键步骤之一是将ESCRT-Ⅲ蛋白亚基组装成纤丝状结构。在... 转运必需内体分选复合物-Ⅲ(endosomal sorting complex required for transport-Ⅲ,ESCRT-Ⅲ)介导了一系列细胞膜重塑事件,包括多囊体的形成、细胞分裂和病毒释放等。这些过程的关键步骤之一是将ESCRT-Ⅲ蛋白亚基组装成纤丝状结构。在本研究中,作者利用冷冻电镜技术解析了由Vps24和Vps2融合蛋白(Vps24-Vps2)形成的双链螺旋纤丝的结构,分辨率为4.07A。在该结构中,呈伸展构象的Vps24-Vps2单体首先形成反向结合的二聚体,二聚体之间再错位结合形成一股螺旋,两股螺旋互相缠绕最终形成纤丝。该结构为理解ESCRT-Ⅲ丝状结构组装以及解聚过程提供了结构基础。 展开更多
关键词 转运必需内体分选复合物 ESCRT vps24 vps2 冷冻电镜结构
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基于单抗的A型塞内卡病毒抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立
2
作者 马震原 闫若潜 +6 位作者 柴茂 王淑娟 赵雪丽 杨海波 王东方 刘影 王翠 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第7期1402-1410,共9页
为了建立了一种快速定量检测A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法(chemiluminescent enzymee-linked immunoassay,CLEIA),在聚苯乙烯板中包被灭活SVA抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗SVA VP2、VP3... 为了建立了一种快速定量检测A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法(chemiluminescent enzymee-linked immunoassay,CLEIA),在聚苯乙烯板中包被灭活SVA抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗SVA VP2、VP3蛋白单克隆抗体作为血清样本中抗体的竞争酶标抗体,以阳性血清稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的SVA竞争CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1∶2048的校准品溯源血清,与口蹄疫等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,重复性和稳定性较好;与中和试验分别检测480份临床血清,阳、阴性符合率分别为95.30%、97.57%,总符合率为96.88%,具有高度的一致性。结果表明,建立的SVA竞争CLEIA检测方法可以用于SVA抗体的快速定量检测。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 VP2 VP3 竞争化学发光酶联免疫 定量
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携带FPV VP2基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗免疫原性研究
3
作者 陈慧敏 王文婕 +7 位作者 韩新雨 贾钰航 余祖华 贾艳艳 廖成水 丁轲 尚珂 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期947-952,共6页
本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2... 本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2特异性Ig G抗体、中和抗体、IL-4和IFN-γ水平的变化。同时口服免疫8周龄健康田园猫,检测疫苗的攻毒保护效果。结果显示,与对照组相比,重组菌免疫后对小鼠体重无明显影响(P>0.05);重组菌免疫小鼠后能够显著诱导血清中针对VP2特异性抗体和中和抗体水平(P<0.05);IL-4和IFN-γ细胞因子水平显著升高(P<0.05),且在免疫后第28天达到峰值;重组菌免疫猫后对FPV感染具有一定程度的免疫保护效果,可明显降低实验猫致死率并且延缓发病时间和发病程度。以上结果表明,构建的FPV VP2重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗能够有效刺激机体产生免疫应答且具有较好的免疫保护效力,为进一步研发FPV新型疫苗奠定了良好基础。 展开更多
关键词 泛猫白细胞减少综合症病毒 VP2 SL1344ΔcrpΔasd 口服疫苗 免疫原性
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犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
4
作者 龚婷 马辉 郑鸣 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第7期81-84,118,共5页
为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000... 为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000、1∶2048000,染色体数目分别为106、105、103,重链分别为IgG1、IgG2b和IgG1,轻链均为κ链,均能与VP2蛋白和CPV感染的F81细胞发生特异性反应,均与4种常见病毒不发生交叉反应。该研究获得了3株抗体效价高、特异性强、免疫学活性好的VP2蛋白单克隆抗体,可为CPV基础性研究和免疫学诊断试剂盒开发奠定基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 VP2蛋白 单克隆抗体 制备与鉴定
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共表达IBDV VP2蛋白和AIV HA蛋白的重组NDV的构建 被引量：2
5
作者 王晓晓 司凯新 +7 位作者 尚珂 陈松彪 余祖华 丁轲 陈建 李日顺 郁川 何雷 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期748-756,共9页
为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯... 为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯救出共表达VP2蛋白和HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2并鉴定。RT-PCR鉴定表明目的基因成功插入至重组NDV的P、M基因之间;IFA检测结果表明,重组病毒r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2感染细胞可稳定表达VP2蛋白和HA蛋白,而重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA感染细胞后仅检测到VP2蛋白表达。生物学特性检测表明2株重组病毒均具有亲本毒株的高增殖效价、低毒力和良好耐热性特点。综上所述,本研究成功地构建了共表达nVarIBDV VP2蛋白和H9N2 AIV HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2,为n VarIBDV、H9N2 AIV及基因Ⅶ型NDV的综合防控提供了一种新的策略。 展开更多
关键词 新城疫病毒 传染性法氏囊病毒 VP2蛋白 禽流感病毒 HA蛋白
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口蹄疫病毒通用型结构蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：1
6
作者 张慧艳 李坤 +6 位作者 孙梦阳 邢向川 付元芳 李平花 李冬 卢曾军 曹轶梅 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第8期1011-1017,共7页
为建立口蹄疫病毒(FMDV)O型、A型、Asia 1型通用结构蛋白抗体检测方法,本研究用FMDV各血清型间高度保守的结构蛋白VP2氨基端短肽为抗原,经过条件优化,建立了可检测牛血清中FMDV不同血清型结构蛋白抗体的间接ELISA方法,并分析了该方法的... 为建立口蹄疫病毒(FMDV)O型、A型、Asia 1型通用结构蛋白抗体检测方法,本研究用FMDV各血清型间高度保守的结构蛋白VP2氨基端短肽为抗原,经过条件优化,建立了可检测牛血清中FMDV不同血清型结构蛋白抗体的间接ELISA方法,并分析了该方法的敏感性、特异性、重复性以及与液相阻断ELISA(LPB-ELISA)的符合性。结果显示,该短肽最佳包被浓度为2μg/m L,最适封闭液为1%BSA+5%蔗糖,血清最佳稀释度为1∶4,酶标二抗稀释比例为1∶5000。以约登指数最大作为临界值,测定其敏感性为87.5%,特异性为93%,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的阳性血清均未出现交叉反应,且批间与批内变异系数均≤10%。与LPB-ELISA的符合率为92.59%。该方法耗时短、操作简捷,可检测牛血清中FMDV不同血清型结构蛋白抗体,为FMDV感染的诊断和群体免疫状况的评估提供了一种通用方法。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 结构蛋白VP2 通用型 间接ELISA
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鸡传染性贫血病毒实时荧光RPA快速检测方法的建立 被引量：2
7
作者 王冷眉 万培伟 +3 位作者 韩旭 易松强 闫莹莹 林翠 《中国家禽》 北大核心 2025年第3期78-84,共7页
为建立一种简便、快速的鸡传染性贫血病毒(CIAV)检测方法,试验针对CIAV VP2基因序列设计了多组引物和探针,经过引物筛选及反应温度和时间的优化,建立了CIAV的实时荧光重组酶聚合酶扩增方法(RPA),并对该方法的特异性、敏感性及重复性进... 为建立一种简便、快速的鸡传染性贫血病毒(CIAV)检测方法,试验针对CIAV VP2基因序列设计了多组引物和探针,经过引物筛选及反应温度和时间的优化,建立了CIAV的实时荧光重组酶聚合酶扩增方法(RPA),并对该方法的特异性、敏感性及重复性进行评估,应用该方法与荧光定量PCR(q PCR)同时对50份临床样品进行检测,比较两种方法的符合率。结果显示:该方法可在39℃恒温条件下20 min内快速、准确地检出CIAV,与其他6种常见的禽类病原体如传染性法氏囊病病毒(IBDV)、马立克病病毒(MDV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、新城疫病毒(NDV)、禽传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)不存在交叉反应;该方法对质粒DNA的检测限为1×10~2 copies/μL;该方法检测50份临床样品中有9份阳性,与q PCR的检测结果一致。研究表明:建立的检测CIAV的RPA操作简单、反应灵敏、特异性高、检测结果可靠,可用于鸡传染性贫血的快速检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 VP2基因 重组酶聚合酶等温扩增技术 快速检测
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脑心肌炎病毒VP22A基因真核表达载体的构建 被引量：2
8
作者 邵帅 纪晓岚 +1 位作者 刘明启 李琼毅 《中国动物保健》 2025年第1期240-241,共2页
为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至... 为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性单克隆菌落,对阳性单克隆提取重组质粒并双酶切进行验证,对阳性重组质粒进行测序。重组质粒双酶切和测序结果表明,pc DNA3.1-Flag-VP2和pc DNA3.1-Flag-2A真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 VP2基因 2A基因 真核表达载体
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大西洋鲑传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的构建及其表达 被引量：1
9
作者 李守湖 秦闯 +1 位作者 李新苍 石建高 《水产科技情报》 2025年第1期26-32,共7页
传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组... 传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组腺病毒载体,利用PCR方法分别扩增出IPNV VP2基因和VP3基因,通过多基因片段同源重组技术将IPNV VP2基因和VP3基因克隆到pAd-Track-CMV载体,经过线性化后与pAd-easy-1载体在BJ5183菌体内进行同源重组,构建出重组腺病毒质粒;通过PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,再经PacⅠ线性化后用于转染293T细胞,获得重组腺病毒;通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达监控重组腺病毒的复制情况,用Western-blotting法分别检测IPNV VP2蛋白和VP3蛋白的表达,并测定重组病毒滴度。结果显示,分别克隆出IPNV VP2和VP3基因,基因总长度为2211 bp,构建出目的基因重组腺病毒载体,该病毒在293T细胞中分别表达出蛋白分子质量约为54 kD和26 kD的产物,滴度为1.0×10^(9)个/mL TCID_(50)。结果表明,已成功获得IPNV VP2基因和VP3基因重组腺病毒,该病毒在293T细胞中滴度较高,能够稳定表达。传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的成功构建可为大西洋鲑传染性胰腺坏死病活载体疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 大西洋鲑 传染性胰腺坏死病 VP2基因 VP3基因 腺病毒载体
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牛细小病毒2型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用
10
作者 杨澳飞 刘飞飞 +10 位作者 陈慧敏 余祖华 韩新雨 贾东鹭 贾钰航 陈建 魏颖 何雷 马雪连 陈松彪 丁轲 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期362-368,共7页
本试验旨在建立一种牛细小病毒2型(bovine parvovirus,BPV-2)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。首先参考数据库中不同BPV-2序列,设计VP2基因保守区域特异性引物,优化反应体系,初步建立一种BPV-2特异性SYBRGreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)... 本试验旨在建立一种牛细小病毒2型(bovine parvovirus,BPV-2)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。首先参考数据库中不同BPV-2序列,设计VP2基因保守区域特异性引物,优化反应体系,初步建立一种BPV-2特异性SYBRGreenⅠ荧光定量PCR(qPCR)方法。结果显示,扩增VP2基因片段长度约156 bp,符合目的基因片段大小,经鉴定所构建的重组质粒正确。用该质粒测得SYBR GreenⅠ荧光定量PCR的最低检测限为3.32×10^(1)copies/μL,而常规PCR方法检测限为3.32×10^(3)copies/μL,表明本研究方法敏感性较高。用该方法检测牛细小病毒Ⅰ型、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛疱疹病毒I型时结果均为阴性,表明本方法特异性强。重复性试验结果表明,组内和组间重复变异率均小于1%,表明该方法具有良好的重复性。分别采用本研究所建立的方法和文献中发表的方法对80份腹泻牛粪便进行检测比较。结果显示,两种方法的阳性检出率均为11%(9/80),总符合率达100%。以上结果表明本研究建立基于BPV-2 VP2基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好特异性、灵敏性、重复性,为BPV-2的临床流行病学调查及快速检测提供了新的技术支撑。 展开更多
关键词 牛细小病毒2型 VP2基因 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR 建立 应用
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猪细小病毒2型VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
11
作者 帅文娜 李佳乐 +8 位作者 郭子强 罗梦 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 李兆龙 高飞 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第8期78-84,共7页
旨在制备猪细小病毒(PPV)VP2的多克隆抗体,并进行其检测能力验证。将PPV VP2克隆至原核表达载体pCold-TF,由1 mmol/L IPTG诱导得到VP2蛋白;纯化后VP2蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(I... 旨在制备猪细小病毒(PPV)VP2的多克隆抗体,并进行其检测能力验证。将PPV VP2克隆至原核表达载体pCold-TF,由1 mmol/L IPTG诱导得到VP2蛋白;纯化后VP2蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证其反应性。ELISA检测结果显示,多克隆抗体效价达1∶128000;Western blot和IFA分析表明,其能特异性识别和结合PPV,说明重组VP2蛋白具有较好的免疫原性和反应原性。本研究为VP2血清学检测方法的建立及其蛋白的功能研究提供了材料。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2蛋白 多克隆抗体 原核表达
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大口黑鲈双RNA病毒VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备
12
作者 张秋爽 马宝福 +6 位作者 郑果 林强 梁红茹 牛银杰 罗霞 李宁求 付小哲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第7期18-25,共8页
【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重... 【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重组VP2蛋白为抗原,皮下多点注射免疫新西兰大白兔,耳中央动脉采血并分离血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体,用BCA法测定纯化后抗体的浓度。通过Western blot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性;采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价。【结果】PCR扩增获得了1266 bp的VP2基因片段。PCR和测序鉴定结果表明,重组质粒pET-VP2构建成功。VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了64 ku的重组蛋白,符合预期大小。成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体,其质量浓度为10 mg/mL,效价为1∶1024000,可特异性识别LBBV VP2蛋白;血清中和试验结果显示,VP2多抗中和抗体效价为1∶64。【结论】成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白,制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体,该多抗对LBBV具有中和作用。 展开更多
关键词 大口黑鲈 大口黑鲈双RNA病毒 VP2蛋白 多克隆抗体
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A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体制备与竞争ELISA方法的建立
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作者 何启杰 农作荣 +7 位作者 王豪 牛晨霞 莫勇芳 欧阳康 陈樱 黄伟坚 黄稳妃 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期23-29,共7页
依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其... 依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其特异性。随后建立竞争ELISA方法,并对实验室收集的2016-2019年广西11个地区64个规模猪场592份猪血清进行SVA抗体检测。结果显示,诱导表达出的重组VP2蛋白主要以可溶性形式表达,血清中VP2抗体效价大于1∶64000,且制备的VP2抗体能特异结合SVA感染细胞中的VP2蛋白。竞争ELISA检测结果显示广西地区猪场SVA血清阳性率高达76.6%,血清样品阳性率高达55.9%,研究结果为SVA的检测和研究奠定了基础。 展开更多
关键词 A型塞内卡 VP2蛋白 原核表达 多克隆抗体 竞争ELISA
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辽宁省沈阳市猫泛白细胞减少症病毒VP2、NS1基因的遗传进化分析
14
作者 刘琪 刘正伟 +6 位作者 张利 王超 郝春晖 高锋 姜仁礼 梁琳 田长永 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期81-87,共7页
为了解辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)VP2和NS1基因的遗传变异情况,试验从辽宁省沈阳市3个动物医院和1个猫繁育场收集疑似FPV感染的猫粪便拭子样本13份(编号为FPV-8~FPV-20),利用胶体金试纸条进行FP... 为了解辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)VP2和NS1基因的遗传变异情况,试验从辽宁省沈阳市3个动物医院和1个猫繁育场收集疑似FPV感染的猫粪便拭子样本13份(编号为FPV-8~FPV-20),利用胶体金试纸条进行FPV检测,提取阳性样本中的病毒DNA后进行VP2和NS1基因的PCR扩增、测序、同源性分析、编码蛋白的氨基酸突变位点分析及遗传进化树构建。结果表明:13份样本均呈FPV阳性,经PCR扩增均得到大小为1755 bp的VP2基因和大小为2007 bp的NS1基因。13份样本中的FPV VP2基因之间的核苷酸相似性为98.7%~100%,与GenBank中FPV参考毒株的核苷酸相似性为98.6%~100%,其中FPV-LN15、FPV-LN18、FPV-LN19与BJ540(MT270553.1)、FPV ZJFPV15(MW495840.1)和FPV-SH2003(MW811187.1)的核苷酸相似性为100%;13份样本中的FPV NS1基因之间的核苷酸相似性为99.0~100%,与GenBank中FPV参考毒株的核苷酸相似性为99.1%~99.9%,其中FPV-LN8、FPV-LN10和PPV-LN13的核苷酸相似性为100%,FPV-LN9、FPV-LN18和FPV-LN19的核苷酸相似性为100%,PPV-LN15和FPV-LN17的核苷酸相似性为100%。13份样本中的FPV VP2蛋白共存在5个氨基酸突变位点(第91,301,302,305,307位),FPV NS1蛋白共存在6个氨基酸突变位点(第17,23,60,247,443,596位)。基于VP2基因构建的遗传进化树中共分为2个大分支,FPV和水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)毒株聚为一支,犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)毒株处于一个独立分支。样本FPV-LN11、FPV-LN13、FPV-LN8、FPV-LN16、FPV-LN10、FPV-LN20处于一个较小分支,样本FPV-LN14处于独立小分支,且与FPV HNZZ2株(MZ005633.1,郑州)、FPV Barut株(MZ391096.1,土耳其)、FPV 17D01株(OP153925.1,韩国)、FPV DLC02株(MN418998.1,大连)处于不同小分支;样本FPV-LN9、FPV-LN12、FPV-LN15、FPV-LN18、FPV-LN19与FPV JSNJ-21G5株(OP796709.1,扬州)、FPV BJ540株(MT270553.1,北京)、FPV-SH2003株(MW811187.1,上海)、FPV ZJFPV15株(MW495840.1,扬州)处于一个较小分支,样本FPV-LN17处于独立小分支,且与FPV_ARG08(FJ440714.1)株(阿根廷)处于不同小分支。基于NS1基因构建的遗传进化树共分为两个大分支,FPV毒株和CPV毒株分别为两个独立的分支,FPV-LN9、FPV-LN12、FPV-LN15、FPV-LN17、FPV-LN14、FPV-LN18、FPV-LN19与FPV-SH2003株(MW811187.1,上海)和FPV-SH2001株(MW650831.1,上海)处于一个较小分支,FPV-LN8、FPV-LN11、FPV-LN13、FPV-LN10、FPV-LN16、FPV-LN20株与FPV HNZZ2株(MZ005633.1,郑州)处于一个较小分支,均与FPV_IZSSI_42807_15株(KX434462.1,意大利)、FPV株(X55115.1,澳大利亚)处于不同小分支。说明各样本两种基因的亲缘关系基本一致(除样本FPV-LN14外),FPV毒株在同一地理范围内具有较高的遗传相似性。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 VP2基因 NS1基因 基因突变 遗传进化分析
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A型塞内卡病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸条的制备及初步应用
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作者 李帅鹏 石正旺 +9 位作者 陈婕 罗俊聪 朱昱茜 石鑫泰 席韬 张帆 何印娣 郑海学 张小丽 田宏 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期4086-4094,共9页
本研究拟建立一种快速、准确、简便的A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)抗体胶体金检测方法,用于SVA的感染诊断。通过原核系统表达纯化获得SVA VP2重组蛋白,并制备VP2蛋白多克隆抗体;将VP2蛋白与胶体金偶联形成金标抗原。随后,将VP2蛋白... 本研究拟建立一种快速、准确、简便的A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)抗体胶体金检测方法,用于SVA的感染诊断。通过原核系统表达纯化获得SVA VP2重组蛋白,并制备VP2蛋白多克隆抗体;将VP2蛋白与胶体金偶联形成金标抗原。随后,将VP2蛋白和VP2多克隆抗体分别包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上作为检测线(T线)和质控线(C线),优化反应体系制备试纸条。结果表明,制备的试纸条检测口蹄疫病毒O型、口蹄疫病毒A型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、非洲猪瘟病毒阳性血清及健康猪(SPF)血清时,均无交叉反应,特异性良好;对SVA阳性血清的检测灵敏度达1∶64,通过对150份猪临床血清样品进行试纸条和病毒中和试验的平行检测,两者的Kappa值为0.88,表明两种方法高度一致。综上所述,本研究成功开发了SVA抗体检测试纸条,可在10~15 min内完成检测,具有快速、准确、简便等优点,为临床定性检测及现场快速诊断塞内卡病毒病提供了有效工具。 展开更多
关键词 塞内卡病毒抗体 VP2蛋白 胶体金免疫层析试纸条
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基于真核表达塞内卡病毒A VP2蛋白的间接ELISA检测方法
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作者 裴宗飞 于凯蓝 +2 位作者 安欣娜 陈俊雯 张永宁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2025年第1期65-74,共10页
为建立检测塞内卡病毒A(SVA)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),本试验利用昆虫杆状病毒表达系统表达SVA的主要结构蛋白和保护性抗原VP2,通过间接免疫荧光试验(IFA)验证VP2的免疫反应性,并使用氨基三乙酸镍(NiNTA)树脂亲和纯化重组VP2... 为建立检测塞内卡病毒A(SVA)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),本试验利用昆虫杆状病毒表达系统表达SVA的主要结构蛋白和保护性抗原VP2,通过间接免疫荧光试验(IFA)验证VP2的免疫反应性,并使用氨基三乙酸镍(NiNTA)树脂亲和纯化重组VP2蛋白。以纯化的VP2蛋白为包被抗原,利用棋盘滴定法确定最优的抗原包被浓度和待检血清稀释度,通过优化反应条件和确定临界值,建立了检测SVA抗体的间接ELISA检测方法,并评估了其特异性、敏感性、重复性及与IFA的检测符合率。结果显示,重组VP2蛋白在杆状病毒感染的Sf9细胞内呈现可溶性表达,能够被SVA VP2特异性单克隆抗体2F5识别;经Ni-NTA纯化后,获得了分子量约31 kDa的重组VP2蛋白;间接ELISA的最佳抗原包被浓度为2μg/mL,最佳血清稀释度为1∶100,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.287;与口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型抗血清无交叉反应;批内与批间变异系数均低于10%。利用建立的间接ELISA检测了实验室保存的52份猪血清样本,与IFA的检测符合率为96.15%(50/52)。综上,本试验间接ELISA的成功建立为SVA抗体检测和流行病学调查提供了有力工具。 展开更多
关键词 塞内卡病毒A(SVA) VP2蛋白 昆虫杆状病毒表达系统 间接ELISA 抗体
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福建部分地区犬细小病毒的检测与遗传进化分析
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作者 陆畅 王晓燕 +9 位作者 林炫孜 全锦洋 许宇擎 黄俏 肖晓红 陈囿霖 彭栩东 曾显成 陈叶 翟谧 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第2期16-24,共9页
为了解福建省犬细小病毒主要流行趋势及其分子进化特点,对2019-2022年间采集的福建省部分地区疑似感染犬细小病毒的犬粪便样品进行PCR检测,将阳性样品进行VP2全长基因组测序,并对其进行遗传进化分析。结果表明:收集的217份病料中犬细小... 为了解福建省犬细小病毒主要流行趋势及其分子进化特点,对2019-2022年间采集的福建省部分地区疑似感染犬细小病毒的犬粪便样品进行PCR检测,将阳性样品进行VP2全长基因组测序,并对其进行遗传进化分析。结果表明:收集的217份病料中犬细小病毒阳性样品有147份,感染率为67.74%。对其中41份阳性样品进行VP2全长基因组测序,有31株CPV-2c(占75.61%)、8株New CPV-2a(占19.51%)和2株New CPV-2b(占4.88%),说明2019-2022年间福建部分地区流行的犬细小病毒毒株亚型以CPV-2c为主。遗传进化分析表明,分离毒株有7个氨基酸位点发生突变;与我国2008-2022年间各亚型流行毒株属于同一个分支,各自有较高的亲缘关系,与美国、日本和意大利分离株亲缘关系较远,有明显的地域性。该研究丰富了犬细小病毒的基因组信息数据库,可为监测犬细小病毒的变异、地区流行趋势及疫苗研发提供一定参考。 展开更多
关键词 犬细小病毒 VP2基因 检测 遗传进化
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传染性法氏囊病毒VP2单克隆抗体制备
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作者 段绪来 刘静宜 +4 位作者 郭伟强 陈金南 王致远 何秀苗 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期184-189,共6页
传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白具有良好的免疫源性。本研究用纯化的IBDV NN1172株与弗氏佐剂混合,经腹腔注射途径免疫5周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,对小鼠进行眼眶采血,用ELISA方法鉴定VP2抗体水平,用抗体水平最高小鼠的脾细胞与SP2/0进... 传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白具有良好的免疫源性。本研究用纯化的IBDV NN1172株与弗氏佐剂混合,经腹腔注射途径免疫5周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,对小鼠进行眼眶采血,用ELISA方法鉴定VP2抗体水平,用抗体水平最高小鼠的脾细胞与SP2/0进行融合后,对融合成功的杂交瘤细胞经亚克隆后获得1株传代稳定的单克隆细胞株-2G5(重链IgG2a型,轻链为κ型),经ELISA、IFA及Western blot验证结果表明,该细胞株产生的IBDV VP2蛋白抗体效价高、特异性强。本研究为IBDV VP2蛋白表达检测提供了生物材料。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 VP2蛋白 单克隆抗体
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一例犬细小病毒感染的鉴定与VP2基因遗传进化分析 被引量：1
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作者 贾文亮 杨文迪 +7 位作者 李懿 张馨月 黄文卓 曹晶 朱彦龙 南卫星 李新锋 张晓战 《现代牧业》 2025年第2期6-11,共6页
为了对疑似感染犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的患犬进行确诊并了解感染毒株的遗传变异进化情况,通过临床症状和组织病理变化观察,结合病原核酸检测等方法鉴定病犬的致病原,并对感染CPV毒株的VP2基因进行扩增与测序、Blast比对分... 为了对疑似感染犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的患犬进行确诊并了解感染毒株的遗传变异进化情况,通过临床症状和组织病理变化观察,结合病原核酸检测等方法鉴定病犬的致病原,并对感染CPV毒株的VP2基因进行扩增与测序、Blast比对分析、氨基酸位点分析和遗传演化分析。结果显示,肠内容物样品CPV胶体金试纸检测和CPV特异性PCR均为阳性,确定患犬死于CPV感染,命名该毒株为CPV-HN。随后对该毒株的VP2基因进行扩增,核苷酸序列分析结果显示CPV-HN株与CPV-HN1617株VP2基因相似性达100%,与其他参考毒株的同源性为97.7%到99.9%之间。氨基酸特异性位点分析表明,该毒株的426位点为谷氨酸;遗传演化分析表明,CPV-HN株与CPV-2c基因型毒株属于同一分支,为了解该地区CPV的流行情况提供了参考依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒 VP2基因 序列分析 基因型
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2022—2023年锦州市猫瘟病毒流行规律调查及VP2基因的变异分析 被引量：1
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作者 陈宇山 程安琪 +2 位作者 许大伟 朱琪 李冰 《现代畜牧兽医》 2025年第4期69-73,共5页
试验旨在深入探究锦州地区猫瘟病毒(FPV)的生物学特征,掌握其遗传变异情况,并提升FPV疫苗的免疫效果。试验收集了2022—2023年间锦州地区40份疑似感染FPV的家养猫粪便样本,通过PCR检测选取7份FPV阳性样品进行VP2蛋白的全长测序,并将其与... 试验旨在深入探究锦州地区猫瘟病毒(FPV)的生物学特征,掌握其遗传变异情况,并提升FPV疫苗的免疫效果。试验收集了2022—2023年间锦州地区40份疑似感染FPV的家养猫粪便样本,通过PCR检测选取7份FPV阳性样品进行VP2蛋白的全长测序,并将其与GeneBank公布的国内外FPV VP2蛋白序列进行比对分析。结果显示,40份锦州地区样品中FPV的检出率为65.00%(26/40),其中免疫猫的检出率为33.33%(1/3),而未免疫猫的检出率则高达67.57%(25/37)。VP2基因序列的比对结果显示,锦州地区分离的7株FPV均属于G1群,其中第87、91、133位点发生突变,这些差异可能是导致免疫失败的原因。研究表明,目前锦州地区FPV检出率偏高,亟需对目前市场主流的商品化疫苗的保护效果进行评估。 展开更多
关键词 猫瘟病毒 VP2基因 流行病学调查
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