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绵羊瘤胃上皮细胞VTN基因启动子转录调控特性研究
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作者 钟秉潜 苏比奴尔·艾力 +3 位作者 朱爱文 孙岩 王玉涛 闫伟 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3527-3539,共13页
【目的】探究绵羊瘤胃上皮细胞玻连蛋白(vitronectin,VTN)基因核心启动子的转录活性及转录因子CCCTC-结合因子(CCCTC-bindingfactor,CTCF)基因过表达对VTN等基因表达的影响。【方法】通过在线生物信息学分析软件预测绵羊VTN基因启动子... 【目的】探究绵羊瘤胃上皮细胞玻连蛋白(vitronectin,VTN)基因核心启动子的转录活性及转录因子CCCTC-结合因子(CCCTC-bindingfactor,CTCF)基因过表达对VTN等基因表达的影响。【方法】通过在线生物信息学分析软件预测绵羊VTN基因启动子核心区域并设计6对启动子缺失片段引物,采集湖羊血液提取DNA,克隆VTN基因CDS区上游6个启动子缺失片段区域,构建荧光素酶重组质粒L1-basic、L2-basic、L3-basic、L4-basic、L5-basic及L6-basic,转染绵羊瘤胃上皮细胞,并以荧光素酶报告基因试验验证启动子活性区域位置。通过在线生物信息学分析软件预测转录因子CTCF与VTN基因启动子的结合位点,以绵羊瘤胃上皮细胞为材料,提取RNA后进行反转录,克隆绵羊CTCF基因CDS区,构建CTCF基因的过表达载体,与VTN基因启动子重组质粒L1-basic、L2-basic、L3-basic及L4-basic共转染绵羊瘤胃上皮细胞,以单独转染的重组质粒为对照组,通过荧光素酶报告基因试验验证以确定转录因子CTCF可能结合VTN基因启动子的核心区域;利用实时荧光定量PCR分析CTCF基因过表达转染组CTCF、VTN、C-MYC、GLUT1与SP1基因的表达情况。【结果】试验成功构建绵羊VTN基因启动子区6个重组荧光素酶报告载体。生物信息学网站预测与荧光素酶报告基因试验结果显示,VTN基因核心启动子可能位于―933/―440bp处,且转录因子CTCF可能与VTN基因启动子核心区域存在互作。CTCF基因过表达后,与对照组相比,VTN、C-MYC与GLUT1基因表达量显著降低(P<0.05),而SP1基因表达量则无显著变化(P>0.05)。【结论】绵羊瘤胃上皮细胞中转录因子CTCF可能主要结合VTN基因启动子的区域(―439/+26bp)与核心区域(―933/―440bp)影响VTN基因表达,且CTCF基因过表达影响VTN、C-MYC、GLUT1基因转录,提示CTCF基因潜在影响绵羊瘤胃上皮细胞生长增殖与物质代谢。 展开更多
关键词 绵羊 vtn基因 核心启动子 瘤胃上皮细胞 CTCF基因
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