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RNA干扰沉默人乳腺癌细胞VPAC1受体抑制VIP跨位激活EGFR/HER2和VEGF的分泌在乳腺癌治疗中的意义 被引量:2
1
作者 金响国 金香兰 +4 位作者 孙向东 李兴江 许景伟 崔立然 刘璐 《中国妇幼保健》 CAS 2015年第27期4712-4714,共3页
目的研究RNA干扰沉默人乳腺癌细胞VPAC1受体对VIP跨位激活EGFR/HER2和VEGF的分泌的影响。方法使用小干扰RNA(siRNA)探讨血管活性肠肽(VIP)对人乳腺癌细胞的作用机制。向雌激素依赖的(T47D)和雌激素非依赖的(MDA-MB-468)乳腺癌细胞转染VP... 目的研究RNA干扰沉默人乳腺癌细胞VPAC1受体对VIP跨位激活EGFR/HER2和VEGF的分泌的影响。方法使用小干扰RNA(siRNA)探讨血管活性肠肽(VIP)对人乳腺癌细胞的作用机制。向雌激素依赖的(T47D)和雌激素非依赖的(MDA-MB-468)乳腺癌细胞转染VPAC1受体的siRNA完全消除VIP刺激分泌促进的血管生成因子(血管内皮生长因子,VEGF)的作用,以及跨位激活表皮生长因子受体(EGFR/HER2)。结果 VPAC1受体阻断导致T47D细胞增殖率下降至10%,MDA-MB-468细胞增殖下降至25%;采用ELISA试剂盒测定VPAC1受体沉默对乳腺癌细胞胞外血管内皮生长因子VEGF165分泌的影响,无论有无VIP诱导时,VEGF165分泌均被完全抑制(P<0.05);VIP可以导致HER2/EGFR的跨位激活造成磷酸化,沉默VPAC1受体后,其磷酸化消失(P<0.001);采用酪氨酸激酶抑制剂AG-825和AG-1478(10μmol/L)可以抑制VIP诱导的VEGF分泌活性,敲除VPAC1受体也完全阻断了VIP诱导的VEGF165分泌。结论实验结果阐明了人乳腺癌细胞中VIP-VPAC1受体信号通路机制,同时揭示了采用VPAC1受体拮抗剂联合靶向治疗乳腺癌的潜在用途及采用RNA干扰VPAC1受体分子疗法的潜在意义。 展开更多
关键词 RNA干扰 人乳腺癌细胞 vpac1 VIP跨位激活 EGFR/HER2 VEGF
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噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽 被引量:1
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作者 唐波 黄定德 +2 位作者 郑磊 任浩 李前伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期10-14,共5页
目的通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定。方法建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确... 目的通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定。方法建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确外源十二肽序列,固相合成该十二肽;利用体外竞争结合ELISA及流式细胞分析,鉴定目标多肽与VPAC1受体结合的特异性及亲和力。结果成功构建稳定表达VPAC1细胞系;经过4轮差减筛选,回收噬菌体逐轮得到富集,随机挑取40个克隆测序,共得到15条序列不同的多肽,经ELISA鉴定有7个克隆与细胞有特异性高结合能力;阳性噬菌体克隆与细胞结合通过多肽VP1介导;VP1能特异高亲和地与VPAC1受体结合。结论通过噬菌体展示肽库技术成功筛选得到与VPAC1高亲和力特异结合十二肽。 展开更多
关键词 vpac1 稳定转染 噬菌体展示肽库 十二肽 分子探针
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VPAC2在CHO细胞的表达及鉴定 被引量:1
3
作者 余榕捷 高媛 +4 位作者 戴云 谭毅力 曾志宏 周天鸿 洪岸 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期996-1001,共6页
PAC2是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的共同受体,介导多种重要生物学功能。为获得稳定特异表达VPAC2的中国仓鼠卵巢(Chinese... PAC2是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的共同受体,介导多种重要生物学功能。为获得稳定特异表达VPAC2的中国仓鼠卵巢(Chinesehamsterovary,CHO)细胞,将pcDNA-VPAC2表达载体转染CHO细胞,G418筛选转染阳性克隆,PACAP38标准品诱导阳性克隆细胞的胞内cAMP生成,筛选出对PACAP38最为敏感的阳性单克隆细胞株(VPAC2-CHO),运用RT-PCR、Westernblot和免疫荧光法检测VPAC2受体表达情况,利用VPAC2受体特异激动剂通过竞争性结合试验和促进胞内第二信使cAMP生成的活性检测实验证实,VPAC2-CHO特异表达有功能的VPAC2。Scatchard作图分析显示VPAC2-CHO的VPAC2受体密度为(1.1±0.2)pmol/mg膜蛋白,PACAP38与VPAC2的解离常数Kd值为(0.55±0.10)nmol/L。特异表达VPAC2受体细胞系的构建为深入研究该受体理化性质、生物学功能以及筛选、开发VPAC2受体新型特异激动剂和拮抗剂等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 vpac2 中国仓鼠卵巢细胞 表达
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VPAC1激动剂的抗肥胖作用(英文) 被引量:1
4
作者 余榕捷 张玲 +2 位作者 易天红 谢珊珊 戴云 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期751-758,共8页
VPAC1是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal polypeptide,VIP)的共同受体。VPAC1介导PACAP和VIP抑制食欲和抗炎的生物学功能。本研究体外实验表... VPAC1是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal polypeptide,VIP)的共同受体。VPAC1介导PACAP和VIP抑制食欲和抗炎的生物学功能。本研究体外实验表明,VPAC1在分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中表达增高,并且VPAC1激动剂(10~1000nmol/L每1×106cells)可诱导脂肪细胞脂解,因此我们预计VPAC1激动剂具有抗肥胖及肥胖综合征的作用。为研究VAPC1激动剂[Lys15,Arg16,Leu27]-VIP(1-7)GRF(8-27)对营养性肥胖及肥胖综合征的干预作用,本研究又设计了两组体内实验:(1)高脂喂养NIH雄性小鼠4周,同时腹腔注射VPAC1激动剂;以注射生理盐水作为对照;(2)高脂喂养NIH雄性小鼠5周,构建肥胖模型后,再腹腔注射VPAC1激动剂4周,同样以注射生理盐水作为对照。采集摄食、体重、体脂、血糖及血脂等指标。结果显示,VPAC1激动剂显著抑制摄食、抑制高脂饮食诱导的体重及体脂(附睾及背部)重量的增长,并有效改善高脂饮食诱导的高血糖及高血脂,提高机体的糖耐受。高剂量(每天50nmol/kg体重)VPAC1激动剂比低剂量(每天5nmol/kg体重)有更显著的抗肥胖作用,提示VPAC1激动剂的抗肥胖作用具有剂量依赖性。以上结果表明,VPAC1激动剂不仅能抑制高脂诱导的肥胖的发展,而且可有效改善肥胖相关疾病;其抗肥胖作用的机制是复杂整合的,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 vpac1激动剂 脂肪细胞 肥胖
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新型重组VPAC2激动剂RD的制备及促进胰岛素功能的分子机制
5
作者 马义 罗天杰 洪岸 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期60-66,共7页
利用DNA重组、原核表达、Chitin-Beads柱和HPLC纯化、质谱鉴定等技术,制备了一种新型具有抗2型糖尿病功能的VPAC2受体激动剂RD,并初步研究和揭示了其在Ⅱ型糖尿病治疗中有效促进胰岛素信号传导的分子机制。实验结果表明:利用基因重组技... 利用DNA重组、原核表达、Chitin-Beads柱和HPLC纯化、质谱鉴定等技术,制备了一种新型具有抗2型糖尿病功能的VPAC2受体激动剂RD,并初步研究和揭示了其在Ⅱ型糖尿病治疗中有效促进胰岛素信号传导的分子机制。实验结果表明:利用基因重组技术制备的VPAC2受体激动剂RD的分子量为3 785.0 Da,纯度为96%;将重组肽作用于正常或胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞(IR模型细胞),1和5μmol/L重组肽RD可促进正常3T3-L1脂肪细胞IRS-1蛋白的表达(分别增加36%和42%),而促进IR模型细胞IRS-1蛋白的表达增加更为明显(分别增加55%和63%)。IR模型细胞经1,5和10μmol/L重组肽RD处理后,p IRS1(ser307)的表达水平分别比降低了5.9%,10.7%和32.7%。在IR模型细胞中,5和10μmol/L RD处理组,IRS-2蛋白的表达水平分别降低12.8%和40.6%;而1,5和10μmol/L RD各处理组p IRS2蛋白的表达水平分别降低35.1%,40.8%和48.5%。5 and 10μmol/L RD处理的IR模型细胞中Akt蛋白的表达显著增强,表达量分别增加74%和77%。1,5和10μmol/L的重组肽RD处理的IR模型细胞中,Akt Ser473磷酸化水平分别降低33.9%,64.0%和71.1%;Akt Thr308磷酸化水平分别升高13.5%,78.6%和83.3%。建立了重组VPAC2受体激动剂RD的制备技术,并在体外细胞水平检测了其效果(显著促进正常3T3-L1脂肪细胞及IR模型细胞IRS-1蛋白的表达;降低IR模型细胞p IRS1(ser307),IRS-2,p IRS2蛋白的表达;促进IR模型细胞Akt蛋白的表达及Akt Thr308磷酸化水平等),为阐明其在2型糖尿病治疗中的分子作用机制及药用研发提供了实验基础。 展开更多
关键词 基因重组 vpac2受体激动剂 糖尿病 胰岛素
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电针对功能性消化不良肝郁脾虚型大鼠中枢及外周VIP及其受体VPAC-1的影响 被引量:20
6
作者 徐派的 杨云 +2 位作者 辛玉 周利 张红星 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期3020-3024,共5页
目的:观察电针功能性消化不良(FD)肝郁脾虚模型大鼠中枢及外周血管活性肠肽(VIP)及其受体(VPAC1)的影响。方法:48只SD大鼠随机分为空白组、模型组和电针组。除空白组外均采用多因素干预法造模,造模成功后对电针组大鼠进行电针治疗28d,... 目的:观察电针功能性消化不良(FD)肝郁脾虚模型大鼠中枢及外周血管活性肠肽(VIP)及其受体(VPAC1)的影响。方法:48只SD大鼠随机分为空白组、模型组和电针组。除空白组外均采用多因素干预法造模,造模成功后对电针组大鼠进行电针治疗28d,结束后对3组大鼠进行灌胃及解剖取材,测定胃内残留率及小肠推进率;Western blot法测定大鼠下丘脑、胃窦、空肠的VIP、VPAC1表达。结果:与空白组相比,模型组大鼠VIP、VPAC1的表达及胃内残留率均明显升高(P<0.05,P<0.01),小肠推进率显著降低(P<0.01);与模型组相比,电针组大鼠VIP、VPAC1的表达及胃内残留率均明显降低(P<0.05,P<0.01),小肠推进率显著升高(P<0.01)。结论:电针能够显著地降低外周,特别是中枢VIP、VPAC1的水平,有效改善胃肠动力障碍,提示电针是作用于脑肠轴调节脑肠肽的分泌,从而调节胃肠道活动,这可能是电针治疗FD的作用机制。 展开更多
关键词 功能性消化不良 电针 血管活性肠肽 血管活性肠肽1受体 中枢 外周
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糖尿病相关VPAC、PAC受体及其药物研发的进展 被引量:1
7
作者 袁飞 魏云林 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期2914-2920,共7页
VPAC、PAC受体是近年发现的开发2型糖尿病药物的重要靶标,垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)、血管活性肠肽(VIP)则是它们的天然配体,与受体结合激活后能促进葡萄糖依赖性胰岛素分泌,既能保护细胞又不引起胰高血糖素分泌和糖原分解,因此... VPAC、PAC受体是近年发现的开发2型糖尿病药物的重要靶标,垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)、血管活性肠肽(VIP)则是它们的天然配体,与受体结合激活后能促进葡萄糖依赖性胰岛素分泌,既能保护细胞又不引起胰高血糖素分泌和糖原分解,因此其配体相关化合物的开发研究成为开发2型糖尿病药物的重要方向。目前针对VPAC、PAC受体开发的配体类似物主要包括了肽类和非肽类小分子两大类,但它们仍然存在诸多不足,至今仅有一个药物进入到临床研究阶段。本综述系统总结了目前针对VPAC、PAC受体为靶标的肽类和非肽小分子药物的开发研究现状,可为将来此类药物的研发提供参考。 展开更多
关键词 PACAP VIP 2型糖尿病 vpac受体 PAC受体
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BP/Amoco公司推出VPAC/5131阀门泄漏检测仪
8
《安全、健康和环境》 2001年第8X期7-7,共1页
关键词 BP/Amoco公司 vpac/5131阀门泄漏检测仪 定量公式 定量泄漏率
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新型抗2-型糖尿病基因重组RMBAY的克隆、表达及生产环节优化 被引量:6
9
作者 马义 余榕捷 +2 位作者 曾乐 谢珊珊 洪岸 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期17-21,共5页
利用基因重组方法构建RMBAY的原核表达载体pKY-BAY,并研究其生产的优化条件。选用大肠杆菌偏爱密码子,用PCR方法合成全长RMBAY多肽基因,并定向插入到高效表达载体pKYB-mcs中,用大肠杆菌ER2566进行表达,融合蛋白经Chitin-Beads柱纯化后,... 利用基因重组方法构建RMBAY的原核表达载体pKY-BAY,并研究其生产的优化条件。选用大肠杆菌偏爱密码子,用PCR方法合成全长RMBAY多肽基因,并定向插入到高效表达载体pKYB-mcs中,用大肠杆菌ER2566进行表达,融合蛋白经Chitin-Beads柱纯化后,结合在柱上的融合蛋白用β-巯基乙醇诱导蛋白内含肽的N端自动切割,释放目的肽,目的肽由质谱鉴定。实验结果表明:利用载体pKY-B在大肠杆菌ER2566中,RMBAY能够实现高效表达;在优化的生产条件下,RMBAY的产量可达到6.7mg/L发酵产物,纯度大于98%,质谱鉴定RMBAY的分子量为3.887kDa.与理论值相符合。 展开更多
关键词 基因重组 vpac2受体激动剂 生产环节优化 2-型糖尿病 电喷雾质谱
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线粒体外膜电压依赖性阴离子通道与心力衰竭 被引量:1
10
作者 谢渡江 陈锐华 江时森 《医学研究生学报》 CAS 2003年第1期48-50,共3页
心力衰竭是各种心血管疾病发展的终末阶段 ,在其发展过程中 ,心功能不断恶化。目前 ,对心力衰竭中与心功能恶化有关的细胞和分子机制仍不十分清楚。多数学者认为心肌细胞能量代谢障碍及凋亡 (即程度性死亡 )是可能的机制 ,也是近年来的... 心力衰竭是各种心血管疾病发展的终末阶段 ,在其发展过程中 ,心功能不断恶化。目前 ,对心力衰竭中与心功能恶化有关的细胞和分子机制仍不十分清楚。多数学者认为心肌细胞能量代谢障碍及凋亡 (即程度性死亡 )是可能的机制 ,也是近年来的研究热点。电压依赖性阴离子通道 (VDAC)是位于心肌线粒体外膜上的一种蛋白 ,其在能量代谢及细胞凋亡过程中的作用已引起广泛重视。 展开更多
关键词 电压依赖性阴离子通道 心力衰竭 线粒体穿孔蛋白 vpac 能量代谢 细胞凋亡
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左归丸联合温和灸调节骨质疏松症模型大鼠OPG/RANKL轴的作用研究 被引量:13
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作者 钱康 范永升 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期881-885,共5页
目的:观察左归丸联合温和灸对骨质疏松症模型大鼠OPG/RANKL轴的影响。方法:雌性SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组,每组12只。除对照组外,其余大鼠采用手术完整摘除双侧卵巢法进行造模,对照组仅开腹后缝合... 目的:观察左归丸联合温和灸对骨质疏松症模型大鼠OPG/RANKL轴的影响。方法:雌性SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组,每组12只。除对照组外,其余大鼠采用手术完整摘除双侧卵巢法进行造模,对照组仅开腹后缝合,饲养3个月后每组大鼠随机取1只作病理组织学观察判断造模成功。左归丸组予左归丸灌胃,左归丸+温和灸组予左归丸灌胃+"长强穴"艾灸治疗,对照组和模型组予0.9%氯化钠溶液灌胃。治疗90d后,骨密度测定观察大鼠股骨近端及第2腰椎骨密度变化,RT-PCR检测大鼠骨组织VPAC2、OPG和RANKL mRNA的表达水平。结果:(1)与对照组比较,各组大鼠平均股骨近端密度、第2腰椎骨密度均显著减少(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,左归丸组、左归丸+温和灸组大鼠平均股骨近端密度、第2腰椎骨密度均显著增加(P<0.05,P<0.01);与左归丸组比较,左归丸+温和灸组大鼠平均股骨近端密度、第2腰椎骨密度均增加(P<0.05)。(2)与对照组比较,模型组大鼠骨组织VPAC2 mRNA、RANKL mRNA表达显著上调,OPG mRNA表达显著下调,OPG/RANKL比值显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,左归丸组、左归丸+温和灸组VPAC2 mRNA、RANKL mRNA显著下调,OPG mRNA表达显著上调,OPG/RANKL比值显著升高(P<0.05,P<0.01);与左归丸组比较,左归丸+温和灸组大鼠骨组织OPG mRNA表达显著上调,RANKL mRNA表达显著下调,OPG/RANKL比值显著升高(P<0.05)。结论:左归丸联合温和灸对骨质疏松症模型大鼠的骨密度下降具有一定的改善作用,能通过上调OPG mRNA,下调大鼠骨组织VPAC2、RANKL mRNA的表达,达到治疗骨质疏松症的目标。 展开更多
关键词 左归丸 温和灸 vpac2 骨保护素 核因子ΚB受体活化因子配体
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Vasoactive Intestinal Peptide (VIP) and VIP Receptors-Elucidation of Structure and Function for Therapeutic Applications 被引量:2
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作者 Hisato Igarashi Nao Fujimori +6 位作者 Tetsuhide Ito Taichi Nakamura Takamasa Oono Kazuhiko Nakamura Koichi Suzuki Robert T Jensen Ryoichi Takayanagi 《International Journal of Clinical Medicine》 2011年第4期500-508,共9页
Vasoactive intestinal peptide (VIP) is a 28-amino acid polypeptide first isolated from swine duodenum. VIP is a neurotransmitter that is extensively distributed in tissues. According to published reports, VPAC1 and VP... Vasoactive intestinal peptide (VIP) is a 28-amino acid polypeptide first isolated from swine duodenum. VIP is a neurotransmitter that is extensively distributed in tissues. According to published reports, VPAC1 and VPAC2 act as VIP receptors and are widely present in the central nervous system and peripheral tissues. VIP exerts diverse actions on the cardiovascular system, pancreas, digestive tract, respiratory system, and urological system. Recent reports indicated that VIP has immunological and neuroprotective effects and also affects cell growth. While primary investigations for developing therapeutic applications for various pathological conditions and diseases are underway, the structure and function of VIP should be analyzed in more detail. 展开更多
关键词 Vasoactive INTESTINAL PEPTIDE VIP vpac
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肿瘤血管活性肠肽受体显像
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作者 王雪鹃 张梅颖 林保和 《国外医学(放射医学核医学分册)》 2001年第2期65-69,共5页
血管活性肠肽 (VIP)是一种由 2 8个氨基酸组成具有多种功能的神经递质 ,能通过其受体调节正常及肿瘤细胞的增殖和分化。VPAC(VIP受体 )广泛存在于各种正常和肿瘤组织中 ,但其在肿瘤组织中的表达密度远大于正常组织 ,这为放射性核素标记... 血管活性肠肽 (VIP)是一种由 2 8个氨基酸组成具有多种功能的神经递质 ,能通过其受体调节正常及肿瘤细胞的增殖和分化。VPAC(VIP受体 )广泛存在于各种正常和肿瘤组织中 ,但其在肿瘤组织中的表达密度远大于正常组织 ,这为放射性核素标记的血管活性肠肽受体显像奠定基础。此种显像已应用于多种肿瘤的诊断、分期、治疗方案选择与预后评价。 展开更多
关键词 肿瘤 血管活性肠肽 受体显像 VIP vpac
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