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鹿流行性出血病病毒VP7-ELISA抗体检测方法的建立 被引量:3
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作者 花群义 杨俊兴 +6 位作者 郭莹洁 吕建强 曾少灵 秦智锋 陈兵 阮周曦 董俊 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期527-530,共4页
以原核表达的鹿流行性出血病病毒(epizootic hemorrhagic disease virus of deer,EHDV)VP7蛋白为包被抗原,用HRP标记的兔抗羊IgG作为二抗,建立了检测EHDV群特异性抗体的间接ELISA方法(VP7-ELISA)。用VP7-ELISA方法检测EHDV阳性血清、其... 以原核表达的鹿流行性出血病病毒(epizootic hemorrhagic disease virus of deer,EHDV)VP7蛋白为包被抗原,用HRP标记的兔抗羊IgG作为二抗,建立了检测EHDV群特异性抗体的间接ELISA方法(VP7-ELISA)。用VP7-ELISA方法检测EHDV阳性血清、其他病毒阳性血清及健康羊血清,结果表明,VP7-ELISA方法具有良好的特异性;用VP7-ELISA和琼脂扩散试验(AGID)检测EHDV阳性血清抗体效价,结果表明,VP7-ELISA的敏感性相当于AGID的8~16倍。用VP7-ELISA和AGID同时检测临床样品188份,VP7-ELISA的特异性和敏感性分别为95.9%和100%,两种方法的符合率为96.3%。表明VP7-ELISA可以代替AGID用于EHDV抗体检测。 展开更多
关键词 鹿流行性出血病病毒 重组vp7蛋白 酶联免疫吸附试验
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VP_7-ELISA检测牛、羊血清蓝舌病抗体的研究Ⅱ应用VP_7-ELISA检测蓝舌病抗体
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作者 李晓成 李云岗 +10 位作者 张燕霞 卢伟东 洪军 李同山 魏振英 袁玉田 马红英 曲红丽 洪涛 王健伟 赵同兴 《中国动物检疫》 CAS 2000年第10期23-24,共2页
蓝舌病VP7抗原包被板在-20℃保存期为6个月,4℃保存1个月。抗原批内重复性试验CV<10%,批间重复性试验CV<10%。VP7-ELISA与AGID对420份血清平行检测结果:VP7-ELISA较AGID试验多检... 蓝舌病VP7抗原包被板在-20℃保存期为6个月,4℃保存1个月。抗原批内重复性试验CV<10%,批间重复性试验CV<10%。VP7-ELISA与AGID对420份血清平行检测结果:VP7-ELISA较AGID试验多检出了 13份阳性样品, VP,-ELISA检出的阳性样品对AGID阳性样品的覆盖率为97.4%,对采自陕西等省1816份牛、羊血清样品进行检测,检出阳性样品数为257份阳性检出率为14.2%。 展开更多
关键词 蓝舌病 vp7-elisa 抗体检测
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蓝舌病病毒vp7基因的表达及其产物在c-ELISA中的应用 被引量:2
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作者 花群义 肖荣海 +4 位作者 徐自忠 杨云庆 董俊 杨晶焰 贾建军 《中国病毒学》 CSCD 2004年第3期237-241,共5页
获得稳定、高效的具有良好抗原性的蓝舌病毒(Bluetonguevirus,BTV)vp7基因重组抗原。将BTV编码群特异性抗原VP7的S7基因片段克隆至pMD18-T质粒载体中,构建S7克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。与已报道的多株BTV编码VP7的基因比较后发现... 获得稳定、高效的具有良好抗原性的蓝舌病毒(Bluetonguevirus,BTV)vp7基因重组抗原。将BTV编码群特异性抗原VP7的S7基因片段克隆至pMD18-T质粒载体中,构建S7克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。与已报道的多株BTV编码VP7的基因比较后发现,所测定毒株的核苷酸序列与BTV10型的S7基因同源性高达98.7%,推测的氨基酸同源性为99.3%,证实为BTV的S7基因。然后亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体,转化LGM194细胞,经抗性培养、PCR、限制性内切酶分析、测序鉴定,筛选获得BTVS7基因片段正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了BTV群特异性抗原VP7的重组表达载体。经L-araboinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP7蛋白抗原。SDS-PAGE、ELISA试验表明,表达蛋白为融合蛋白,具有反应原性,分子量约54.5kD,重组蛋白的获得率为1.52mg/g湿菌,其表达产量约占菌体总蛋白的12%左右,相当于93.5mg/L菌液。融合蛋白中含有BTVVP7特异性蛋白抗原,可作为c-ELISA包被抗原,为蓝舌病的免疫血清学诊断试剂的制备和分子生物学研究打下了坚实基础。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 vp7 克隆与表达 C-elisa
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用VP_(7)-ELISA检测牛、羊血清蓝舌病抗体的研究I:VP_(7)-ELISA检测蓝舌病抗体方法的建立
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作者 李晓成 李云岗 +10 位作者 张燕霞 卢伟东 洪军 李同山 魏振英 袁玉田 马红英 曲红丽 洪涛 王健伟 赵同兴 《中国动物检疫》 CAS 2000年第9期24-25,共2页
将表达有蓝舌病毒 VP7蛋白的 Sf21细胞超声波处理制备 VP7抗原,建立了 VP7— ELISA检测蓝舌病抗体的方法,确定阴阳性判定临界值及最佳反应条件:待检牛血清阳性下限为3.0,羊血清阳性下限为2.4,VP7抗原... 将表达有蓝舌病毒 VP7蛋白的 Sf21细胞超声波处理制备 VP7抗原,建立了 VP7— ELISA检测蓝舌病抗体的方法,确定阴阳性判定临界值及最佳反应条件:待检牛血清阳性下限为3.0,羊血清阳性下限为2.4,VP7抗原包被浓度为 1: 800,用含5%健康鸡血清的磷酸盐缓冲液作封闭液,待检血清 1:100稀释,豚鼠抗牛羊IgG-HRP结合物1:500稀释,37℃避光显色4 min~6 min。试验结果表明:VP7可与23个不同血清型BTV抗体反应,具有较高的群特异性和敏感性。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒(BIV) 酶联免疫吸附试验(ELISA) 抗体检测
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猪A群轮状病毒VP7蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
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作者 李东艳 朱梦梦 +2 位作者 姜智文 陈杰 粟硕 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第9期81-86,共6页
旨在建立猪A群轮状病毒(rotavirus A,RVA)抗体的间接ELISA检测方法,以提供一种快速、灵敏且高效的猪RVA抗体检测手段。本研究以原核表达的猪RVA VP7蛋白作为包被抗原,通过对反应条件的系统优化,成功建立针对猪RVA抗体的间接ELISA检测方... 旨在建立猪A群轮状病毒(rotavirus A,RVA)抗体的间接ELISA检测方法,以提供一种快速、灵敏且高效的猪RVA抗体检测手段。本研究以原核表达的猪RVA VP7蛋白作为包被抗原,通过对反应条件的系统优化,成功建立针对猪RVA抗体的间接ELISA检测方法。结果:VP7蛋白以包涵体的形式表达,主要形成2种大小的蛋白条带,分别为37 kDa和35.3 kDa。通过优化,确定间接ELISA反应条件为:蛋白包被量为0.25μg/孔,4℃过夜;封闭液为5%脱脂乳,37℃2 h;一抗(待检血清样本)为1∶100稀释,37℃1 h;二抗(HRP标记羊抗猪IgG)为1∶10000稀释,37℃1 h;显色为15 min。通过检测40份猪阴性血清样本,确定本研究建立的间接ELISA检测方法阳性临界值OD_(450nm)值为0.2747,批内和批间重复变异系数均在10%的范围内,具有较高的特异性和灵敏性。对20份临床血清样本的间接ELISA结果与中和试验结果进行比对,二者的符合率为95%。通过检测其他基因型毒株灭活疫苗免疫后的血清表明,VP7蛋白基因型的差异对ELISA阴阳性判定结果没有显著影响。综上,本研究建立的间接ELISA方法可用于监测猪群轮状病毒感染情况及其疫苗的免疫反应。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 vp7蛋白 原核表达 间接ELISA
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非洲马瘟病毒VP7蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立 被引量:7
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作者 潘佳亮 高利 +2 位作者 相文华 戚亭 郭巍 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期256-260,共5页
为了建立可特异性地检测血清中非洲马瘟病毒抗体的方法,优化并合成非洲马瘟病毒VP7蛋白基因,将其插入原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,目的蛋白获得了高效表达,且有... 为了建立可特异性地检测血清中非洲马瘟病毒抗体的方法,优化并合成非洲马瘟病毒VP7蛋白基因,将其插入原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,目的蛋白获得了高效表达,且有特异的免疫学活性。用纯化的重组蛋白作为检测抗原,建立了检测血清中非洲马瘟病毒抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA的抗原包被量、血清稀释度、封闭液的选择等反应条件进行了优化。所建立的间接ELISA方法可以鉴别血清中的非洲马瘟病毒抗体,具有良好的特异性和灵敏性,与标准竞争ELISA试剂盒的符合率达100%。表明本研究建立的检测血清中非洲马瘟病毒抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性和灵敏性。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 vp7蛋白 间接酶联免疫吸附试验
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猪轮状病毒重组VP7蛋白抗原间接ELISA诊断方法的建立 被引量:6
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作者 时洪艳 冯力 +3 位作者 陈建飞 孙东波 崔晓臣 王承宝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期233-237,共5页
本研究以纯化的原核表达的猪轮状病毒VP7抗原表位区域为抗原,建立了检测猪轮状病毒抗体的间接ELISA诊断方法。特异性试验表明,该抗原与其他7种常见猪病病毒(TGEV、PEDV、CSFV、PCV2、PRRSV、PPV、PrV)的阳性血清不发生交叉反应,批内和... 本研究以纯化的原核表达的猪轮状病毒VP7抗原表位区域为抗原,建立了检测猪轮状病毒抗体的间接ELISA诊断方法。特异性试验表明,该抗原与其他7种常见猪病病毒(TGEV、PEDV、CSFV、PCV2、PRRSV、PPV、PrV)的阳性血清不发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%;对来自不同猪场的血清的检测结果表明,该ELISA方法与中和试验检测结果符合率达94.8%。本试验建立的ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PRV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和轮状病毒流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 重组vp7蛋白 间接ELISA 诊断
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牛轮状病毒重组VP7蛋白抗原间接ELISA诊断方法的建立 被引量:3
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作者 侯美如 高俊峰 +1 位作者 周庆民 侯喜林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第12期17-19,共3页
以纯化的原核表达的牛轮状病毒VP7蛋白为包被抗原,建立了检测牛轮状病毒抗体的间接ELISA诊断方法。特异性试验表明,该抗原与其他5种常见牛病病毒(IBRV、BCV、BRSV、ETEC、Cj)的阳性血清无交叉反应,板内和板间重复性试验的变异系数均小于... 以纯化的原核表达的牛轮状病毒VP7蛋白为包被抗原,建立了检测牛轮状病毒抗体的间接ELISA诊断方法。特异性试验表明,该抗原与其他5种常见牛病病毒(IBRV、BCV、BRSV、ETEC、Cj)的阳性血清无交叉反应,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%;对来自不同牛场的血清样本检测结果显示,该检测方法与病毒中和试验检测结果符合率达87.2%。本试验建立的ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为BRV的快速诊断、免疫牛群血清抗体监测及轮状病毒流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 重组vp7蛋白 间接ELISA 诊断
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非洲马瘟VP7蛋白多克隆抗体的制备及IgM捕获ELISA检测方法的建立 被引量:9
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作者 郑小龙 朱来华 +6 位作者 王群 艾军 邓明俊 肖西志 梁成珠 姜帆 于业锋 《中国动物检疫》 CAS 2014年第5期70-73,共4页
为建立早期快速检测非洲马瘟抗体的IgM捕获ELISA(MAC-ELISA)方法,本试验利用大肠杆菌表达出具有良好抗原性的VP7蛋白,并制备该蛋白的多克隆抗体,通过优化抗原浓度、血清稀释度及酶标抗体稀释度等,建立了检测非洲马瘟的MAC-ELISA方法,并... 为建立早期快速检测非洲马瘟抗体的IgM捕获ELISA(MAC-ELISA)方法,本试验利用大肠杆菌表达出具有良好抗原性的VP7蛋白,并制备该蛋白的多克隆抗体,通过优化抗原浓度、血清稀释度及酶标抗体稀释度等,建立了检测非洲马瘟的MAC-ELISA方法,并进行了初步应用。结果表明,利用重组表达的VP7蛋白成功建立了检测非洲马瘟的MAC-ELISA方法。 展开更多
关键词 非洲马瘟 IgM捕获ELISA(MAC—ELISA) vp7蛋白
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蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立 被引量:9
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作者 耿宏伟 秦永丽 +11 位作者 李俊平 杨涛 孙恩成 刘霓红 白安斌 徐青元 王凌凤 赵晶 覃绍敏 林俊 郭怡璠 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期388-392,共5页
为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与... 为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法,本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)血清型12型VP7纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备2株单克隆抗体(MAb),分别命名为BTV-2D10和BTV-4H7。IFA试验表明,2株MAb均能与BTV 24个血清型发生特异性反应,而与茨城病病毒(IBAV)、中山病病毒(CV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛肠道病毒(BEV)、牛呼肠孤病毒(RV)及口蹄疫病毒(FMDV)无交叉反应,表明2株MAb均为BTV群特异性抗体。采用重组表达的VP7蛋白作为包被抗原建立的竞争ELISA方法证明,BTV-4H7 MAb对不同血清型BTV阳性血清具有良好的阻断效果,而对AKAV、IBAV、BRV和FMDV阳性血清无阻断作用。本研究建立的竞争ELISA方法与IDEXX公司的试剂盒检测包括65份已知背景血清和322份采自广西省的山羊血清样品,检测结果符合率分别达100%和98%。该竞争ELISA方法的建立为BTV抗体的监测提供了安全、快速、准确的技术手段。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 重组vp7蛋白 群特异性单克隆抗体 竞争ELISA
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14型蓝舌病病毒VP7蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:4
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作者 孙雯 张莹辉 +7 位作者 曹雨 朱真 杜吉革 李启红 陈小云 姚文生 钱莺娟 印春生 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期42-48,共7页
为建立蓝舌病(bluetongue,BT)的血清学诊断方法,本研究通过得到14型蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)的s7基因,并在大肠杆菌表达系统中进行表达,原核表达得到VP7蛋白,并对表达的包涵体VP7蛋白进行纯化,Western blot分析表明,纯化的VP7... 为建立蓝舌病(bluetongue,BT)的血清学诊断方法,本研究通过得到14型蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)的s7基因,并在大肠杆菌表达系统中进行表达,原核表达得到VP7蛋白,并对表达的包涵体VP7蛋白进行纯化,Western blot分析表明,纯化的VP7蛋白具有良好的抗原性。以纯化的VP7蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。该方法与羊痘阳性血清,羊口蹄疫阳性血清和羊的小反刍兽疫阳性血清均无交叉反应,与中和试验比较,两者符合率为90%,ELISA批内和批间重复性试验显示,D值的变异系数小于10%。说明本方法具有良好的特异性和重复性。本研究在国内首次建立了14型BTV抗体间接ELISA方法,可用于BTV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测,为以后相关BTV ELISA检测试剂盒研发提供技术平台。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 vp7蛋白 原核表达 间接ELISA
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非洲马瘟病毒VP7蛋白的可溶性表达及抗体阻断ELISA方法的初步建立
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作者 徐婧 户鑫兵 +7 位作者 宋昱庆 张鸿歌 田占成 关贵全 罗建勋 殷宏 魏衍全 独军政 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1318-1326,共9页
为了实现非洲马瘟病毒(AHSV)VP7蛋白的可溶性表达,制备其特异性单克隆抗体,建立AHSV VP7阻断ELISA抗体检测方法,通过对编码AHSV VP7蛋白的基因序列进行突变设计与密码子优化,以大肠杆菌表达系统表达可溶性VP7蛋白并进行纯化,免疫BALB/c... 为了实现非洲马瘟病毒(AHSV)VP7蛋白的可溶性表达,制备其特异性单克隆抗体,建立AHSV VP7阻断ELISA抗体检测方法,通过对编码AHSV VP7蛋白的基因序列进行突变设计与密码子优化,以大肠杆菌表达系统表达可溶性VP7蛋白并进行纯化,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得VP7蛋白单克隆抗体。通过细胞免疫荧光和Western-blot鉴定单克隆抗体的特异性,并建立AHSV VP7阻断ELISA方法。结果显示,利用大肠杆菌表达系统成功表达了可溶性重组AHSV VP7蛋白,将纯化的VP7蛋白免疫小鼠筛选制备了2株稳定分泌VP7蛋白单克隆抗体的细胞株,分别为3F7和7H8。经鉴定证明这2株VP7单克隆抗体不仅能与大肠杆菌重组表达的VP7蛋白反应,而且也与BHK-21细胞表达的具有天然构象的重组VP7蛋白反应,具有良好的特异性和反应性。以重组VP7蛋白和单克隆抗体7H8分别为包被抗原和阻断抗体建立了AHSV VP7阻断ELISA方法,检测了277份马血清样本,结果与商品化进口AHSV抗体检测试剂盒测定结果一致。本研究在大肠杆菌表达系统中实现了AHSV VP7蛋白的可溶性表达,制备获得了VP7特异性单克隆抗体,并建立了AHSV VP7阻断ELISA方法,为我国有效防控非洲马瘟的传入提供了技术储备。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 vp7蛋白 可溶性表达 单克隆抗体 阻断ELISA
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茨城病病毒S7基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立
13
作者 张文龙 殷喆 +1 位作者 吴东来 王君伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期537-541,共5页
为建立以茨城病病毒(IBAV)VP7蛋白为诊断抗原的茨城病(IBAD)血清学检测方法,本研究克隆了VP7蛋白抗原性、亲水性较强部分的编码基因,并在原核表达系统中表达了可溶性截短VP7蛋白。用截短VP7蛋白建立了IBAV间接ELISA检测方法。确定的阳... 为建立以茨城病病毒(IBAV)VP7蛋白为诊断抗原的茨城病(IBAD)血清学检测方法,本研究克隆了VP7蛋白抗原性、亲水性较强部分的编码基因,并在原核表达系统中表达了可溶性截短VP7蛋白。用截短VP7蛋白建立了IBAV间接ELISA检测方法。确定的阳性血清的判定标准为不低于0.32。特异性试验表明建立的ELISA方法可以特异性检测IBAV阳性血清。建立的ELISA方法与中和试验结果比较,符合率为77%。用建立的ELISA方法检测70份来自云南的牛血清样品进行检测,IBAV血清阳性率为45.7%。该方法的建立为IBAD的诊断提供了一种简单快速的辅助手段。 展开更多
关键词 茨城病 截短vp7蛋白 间接ELISA
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人A组G4型轮状病毒VP7蛋白表达及单克隆抗体制备
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作者 张璐琦 赵颖 +7 位作者 刘晓钰 何潆 彭杨 李金松 李丹地 李利利 孙晓曼 段招军 《国际病毒学杂志》 北大核心 2025年第4期272-277,共6页
目的表达和纯化人A组G4型轮状病毒VP7蛋白,制备G4 VP7单克隆抗体并进行抗体功能鉴定。方法通过杆状病毒系统表达G4 VP7蛋白,运用亲和层析和凝胶过滤层析法进行蛋白纯化。将纯化的G4 VP7蛋白免疫动物,利用杂交瘤细胞法制备单克隆抗体;再... 目的表达和纯化人A组G4型轮状病毒VP7蛋白,制备G4 VP7单克隆抗体并进行抗体功能鉴定。方法通过杆状病毒系统表达G4 VP7蛋白,运用亲和层析和凝胶过滤层析法进行蛋白纯化。将纯化的G4 VP7蛋白免疫动物,利用杂交瘤细胞法制备单克隆抗体;再通过免疫印迹(western blot,WB)、酶联免疫吸附(ELISA)等实验进行抗体功能验证。结果获得可溶性G4 VP7蛋白;制备得到3株单克隆抗体;ELISA和WB结果显示抗体与G4 VP7蛋白具有很好的结合;并且单克隆抗体能够与G4型轮状病毒结合。结论本研究成功表达了人A组轮状病毒G4 VP7蛋白,制备的单克隆抗体可以结合G4 VP7蛋白和G4型轮状病毒,能够用于G4型轮状病毒的检测,为不同G型轮状病毒检测方法的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人A组轮状病毒 vp7蛋白 G4型轮状病毒 单克隆抗体 酶联免疫吸附法
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荧光素酶免疫吸附法高灵敏检测蓝舌病病毒抗体方法的建立
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作者 张鸿歌 田占成 +6 位作者 独军政 王琼洁 康棣 户鑫兵 张忠辉 关贵全 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期881-887,共7页
为了建立一种高效检测动物血清中蓝舌病病毒(BTV)抗体的检测方法,以BTV血清群特异性VP7抗原与荧光素酶蛋白相融合表达的标记蛋白(VP7-NLuc)为检测抗原建立了荧光素酶免疫吸附(VP7-NLuc-LISA)方法,用于检测BTV抗体。结果表明:BTV阳性血... 为了建立一种高效检测动物血清中蓝舌病病毒(BTV)抗体的检测方法,以BTV血清群特异性VP7抗原与荧光素酶蛋白相融合表达的标记蛋白(VP7-NLuc)为检测抗原建立了荧光素酶免疫吸附(VP7-NLuc-LISA)方法,用于检测BTV抗体。结果表明:BTV阳性血清能特异性识别VP7-NLuc融合蛋白;监测BTV-1灭活疫苗免疫绵羊血清中BTV抗体动态结果表明,VP7-NLucLISA方法与商品化竞争性ELISA(c-ELISA)试剂盒的检测结果呈高度相关性(R=0.76,P<0.001);对264份田间血清样本的调查结果表明,建立的VP7-NLuc LISA方法与商品化c-ELISA试剂盒的符合率为98.86%,其相对特异性为99.52%,相对敏感性为96.49%。结论:所建立的VP7-NLuc-LISA方法可作为大规模动物BTV流行病学调查和监测的新方法。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 vp7蛋白 荧光素酶免疫吸附试验 C-elisa 血清学检测
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Production and Characterization of Monoclonal Antibodies to Bluetongue Virus 被引量:1
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作者 Veerakyathappa Bhanuprakash Madhusudhan Hosamani +3 位作者 Vinayagamurthy Balamurugan Pradeep Narayan Gandhale Gnanavel Venkatesan Raj Kumar Singh 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2011年第1期8-18,共11页
In the present study,a total of 24 MAbs were produced against bluetongue virus (BTV) by polyethyleneglycol (PEG) mediated fusion method using sensitized lymphocytes and myeloma cells. All these clones were characteriz... In the present study,a total of 24 MAbs were produced against bluetongue virus (BTV) by polyethyleneglycol (PEG) mediated fusion method using sensitized lymphocytes and myeloma cells. All these clones were characterized for their reactivity to whole virus and recombinant BTV-VP7 protein,titres,isotypes and their reactivity with 24 BTV-serotype specific sera in cELISA. Out of 24 clones,a majority of them (n = 18) belong to various IgG subclasses and the remaining (n = 6) to the IgM class. A panel of eight clones reactive to both whole BTV and purified rVP7 protein were identified based on their reactivity in iELISA. For competitive ELISA,the clone designated as 4A10 showed better inhibition to hyperimmune serum of BTV serotype 23. However,this clone showed a variable percent of inhibition ranging from16.6% with BTV 12 serotype to 78.9% with BTV16 serotype using 24 serotype specific sera of BTV originating from guinea pig at their lowest dilutions. From the available panel of clones,only 4A10 was found to have a possible diagnostic application. 展开更多
关键词 Bluetongue virus Competitive ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay Monoclonal antibody India.
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