鹅细小病毒长春分离株主要结构蛋白(VP2-VP3)基因的原核表达 被引量：2

1

作者 李雪梅 章金刚 +3 位作者 向华 陈晓月 金宁一 费恩阁 《生物技术通讯》 CAS 2002年第5期331-333,共3页

根据国外已发表的鹅细小病毒(GPV)A株基因组核苷酸序列,设计并合成了一对用于GPV主要结构蛋白(VP2-VP3)基因表达的引物。利用合成的引物,扩增并鉴定了GPV中国长春株(GPVCC株)的VP2-VP3基因。将扩增的目的基因插入到原核表达载体pET28(a... 根据国外已发表的鹅细小病毒(GPV)A株基因组核苷酸序列,设计并合成了一对用于GPV主要结构蛋白(VP2-VP3)基因表达的引物。利用合成的引物,扩增并鉴定了GPV中国长春株(GPVCC株)的VP2-VP3基因。将扩增的目的基因插入到原核表达载体pET28(a)的多克隆位点,构建了表达GPVVP2-VP3基因的原核载体pEGVP1。重组表达载体质粒转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测到大小分别为75000和58000的表达蛋白带。Westernblot分析表明,表达产物具有很好的特异性。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 长春分离株 结构蛋白 (vp2-vp3) 原核表达 基因表达

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鱼源植物乳杆菌表达IPNV VP2-VP3重组蛋白及其口服免疫程序 被引量：5

2

作者 刘佳琪 高帅 +7 位作者 段可馨 郭梦婷 杜航 康海燕 张英 唐立杰 李一经 刘敏 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期622-627,共6页

为比较鱼源乳酸菌表达系统口服疫苗在不同免疫程序下诱导鱼免疫应答水平的差异,确定鱼源乳酸菌表达系统口服免疫虹鳟幼鱼的免疫程序。本研究构建了重组表达IPNV VP2-VP3蛋白的鱼源植物乳杆菌L1212,将重组菌pPG612-VP2-VP3/L1212包裹颗... 为比较鱼源乳酸菌表达系统口服疫苗在不同免疫程序下诱导鱼免疫应答水平的差异,确定鱼源乳酸菌表达系统口服免疫虹鳟幼鱼的免疫程序。本研究构建了重组表达IPNV VP2-VP3蛋白的鱼源植物乳杆菌L1212,将重组菌pPG612-VP2-VP3/L1212包裹颗粒饲料,口服免疫虹鳟幼鱼。免疫程序分为连续免疫组、免疫1 d后间隔1 d再免疫1 d组、连续免疫4 d后32 d加强免疫1次组和间隔免疫后32 d加强免疫1次组。免疫后进行尾动脉采血,间接ELISA方法检测各组血清抗体效价,免疫接种66 d后,腹腔注射IPNV,计算各组相对免疫保护率。确定颗粒饲料按照1 mL/g比例与108 CFU/mL重组菌pPG612-VP2-VP3/L1212和2.5%海藻酸钠混合,于20℃烘干制备口服疫苗。间隔免疫组血清抗体效价和攻毒保护率均显著高于其他组,并且免疫2次的间隔免疫组的血清抗体效价和攻毒保护率均显著高于免疫1次间隔免疫组。采用重组菌包被颗粒饲料饲喂虹鳟幼鱼,间隔免疫的免疫程序和免疫保护率优于连续免疫的免疫程序,对IPNV的入侵起到保护作用。 展开更多

关键词 虹鳟 植物乳杆菌 IPNV vp2-vp3 口服疫苗 免疫程序

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大西洋鲑传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的构建及其表达 被引量：1

3

作者 李守湖 秦闯 +1 位作者 李新苍 石建高 《水产科技情报》 2025年第1期26-32,共7页

传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组... 传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组腺病毒载体,利用PCR方法分别扩增出IPNV VP2基因和VP3基因,通过多基因片段同源重组技术将IPNV VP2基因和VP3基因克隆到pAd-Track-CMV载体,经过线性化后与pAd-easy-1载体在BJ5183菌体内进行同源重组,构建出重组腺病毒质粒;通过PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,再经PacⅠ线性化后用于转染293T细胞,获得重组腺病毒;通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达监控重组腺病毒的复制情况,用Western-blotting法分别检测IPNV VP2蛋白和VP3蛋白的表达,并测定重组病毒滴度。结果显示,分别克隆出IPNV VP2和VP3基因,基因总长度为2211 bp,构建出目的基因重组腺病毒载体,该病毒在293T细胞中分别表达出蛋白分子质量约为54 kD和26 kD的产物,滴度为1.0×10^(9)个/mL TCID_(50)。结果表明,已成功获得IPNV VP2基因和VP3基因重组腺病毒,该病毒在293T细胞中滴度较高,能够稳定表达。传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的成功构建可为大西洋鲑传染性胰腺坏死病活载体疫苗的研制提供参考。 展开更多

关键词 大西洋鲑 传染性胰腺坏死病 vp2基因 vp3基因 腺病毒载体

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鹅细小病毒VP2和VP3蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及验证 被引量：2

4

作者 徐浩 孟繁兴 +4 位作者 胡桂学 董浩 张双 齐宇 李勇勇 《经济动物学报》 CAS 2014年第2期77-80,共4页

为筛选与鹅细小病毒VP2和VP3蛋白相互作用的鹅胚成纤维细胞蛋白,构建VP2和VP3蛋白的诱饵载体pGBKT7-VP2和pGBKT7-VP3。从pGEX-4T-VP1质粒中PCR扩增VP2和VP3基因,克隆至pMD-18T载体中,经测序验证鉴定后定向克隆到酵母双杂交载体pGBKT7中... 为筛选与鹅细小病毒VP2和VP3蛋白相互作用的鹅胚成纤维细胞蛋白,构建VP2和VP3蛋白的诱饵载体pGBKT7-VP2和pGBKT7-VP3。从pGEX-4T-VP1质粒中PCR扩增VP2和VP3基因,克隆至pMD-18T载体中,经测序验证鉴定后定向克隆到酵母双杂交载体pGBKT7中。将2个重组诱饵载体经PCR、酶切和测序验证后分别转化酵母菌H2YGold中,检测其在酵母细胞中有无自激活和毒性作用。结果表明:成功构建了pGBKT7-VP2和pGBKT7-VP3诱饵载体,且其对报告基因无自激活作用,对酵母细胞无毒性。由此说明,诱饵载体pGBKT7-VP2和pGBKT7-VP3可用于酵母双杂交系统筛选与VP2和VP3蛋白相互作用的细胞结合蛋白。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 vp2和vp3蛋白 酵母双杂交

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柯萨奇病毒A16型VP1-VP4基因克隆及其表达产物的抗原相关性分析 被引量：4

5

作者 宋远斌 何思杰 +4 位作者 余楠 陈欣欣 王斌 车小燕 曾其毅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1713-1717,共5页

目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16... 目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16型病毒免疫兔血清及肠道病毒71型病毒免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA分析其抗原相关性及交叉反应性。结果成功构建的重组质粒pQE30a/VP1-VP4并经IPTG诱导,重组蛋白VP1-VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1-VP4可以被CVA16免疫兔血清特异识别,部分与肠道病毒71型免疫血清存在交叉反应。结论在大肠杆菌M15中高效表达出柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白,经纯化产物具有较强的抗原反应性。 展开更多

关键词 柯萨奇病毒A16型 vp1蛋白 vp2蛋白 vp3蛋白 vp4蛋白 克隆 原核表达 抗原反应性

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基于单抗的A型塞内卡病毒抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

6

作者 马震原 闫若潜 +6 位作者 柴茂 王淑娟 赵雪丽 杨海波 王东方 刘影 王翠 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第7期1402-1410,共9页

为了建立了一种快速定量检测A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法(chemiluminescent enzymee-linked immunoassay,CLEIA),在聚苯乙烯板中包被灭活SVA抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗SVA VP2、VP3... 为了建立了一种快速定量检测A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法(chemiluminescent enzymee-linked immunoassay,CLEIA),在聚苯乙烯板中包被灭活SVA抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗SVA VP2、VP3蛋白单克隆抗体作为血清样本中抗体的竞争酶标抗体,以阳性血清稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的SVA竞争CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1∶2048的校准品溯源血清,与口蹄疫等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,重复性和稳定性较好;与中和试验分别检测480份临床血清,阳、阴性符合率分别为95.30%、97.57%,总符合率为96.88%,具有高度的一致性。结果表明,建立的SVA竞争CLEIA检测方法可以用于SVA抗体的快速定量检测。 展开更多

关键词 A型塞内卡病毒 vp2 vp3 竞争化学发光酶联免疫 定量

原文传递

肠道病毒EV-D68表面结构蛋白VP2、VP3的原核表达及其特异性分析

7

作者 龙海亭 孔璟 +9 位作者 郑惠文 李冰香 张寒 李恒 刘玉斌 范海涛 于丽 廖国阳 孙明 刘龙丁 《国际免疫学杂志》 CAS 2018年第5期477-485,共9页

目的原核表达肠道病毒68型(enterovirus D68,EV—D68)表面结构蛋白VP2、VP3,分析其亲和力和结合力,得到具备高结合力的、可结合特异性记忆性B细胞的EV-D68病毒表面结构蛋白。方法采用PCR法扩增EV-D68病毒的VP2、VP3蛋白基因,插入原核表... 目的原核表达肠道病毒68型(enterovirus D68,EV—D68)表面结构蛋白VP2、VP3,分析其亲和力和结合力,得到具备高结合力的、可结合特异性记忆性B细胞的EV-D68病毒表面结构蛋白。方法采用PCR法扩增EV-D68病毒的VP2、VP3蛋白基因,插入原核表达载体pGEX-5X-1,构建重组表达质粒pGEX-5X-1-VP2和pGEX-5X-1-VP3,转化到工程菌Rosetta(DE3)pLy中,异丙基硫代半乳糖苷(i-sopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,表达的重组蛋白形成包涵体,经超声洗涤、透析复性;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel immunosorbent,SDS-PAGE)电泳、westem-blot鉴定重组蛋白;竞争性酶联免疫吸附检测(eIlzyme linked immunosorbent assay,EusA)检测蛋白VP2、VP3的蛋白活性和亲和力;藻红蛋白荧光素(phycoeryth面,PE)标记VP2和VP3重组蛋白,结合CD19-APC、CD27-nTc抗体,流式细胞术检测VP2、VP3蛋白结合特异性记忆性B细胞的情况。结果成功构建出重组表达质粒pGEX-5X-1-VP2和pGEX-5X-1-VP3,通过双酶切鉴定及测序分析,确认表达载体构建正确,通过表达纯化,成功获得EV-D68的VP2、VP3蛋白,SDS-PAGE电泳灰度扫描显示,VP2蛋白的纯度可达80%,VP3蛋白的纯度可达75%;经westem-blot和EusA鉴定,均有抗原特异性;通过竞争EusA检测,VP2亲和力常数为2.7×10^7M^-1,为中等亲和力;VP3亲和力常数为3.25×10^6M^-1,为低亲和力;通过流式细胞术可以检测到病毒攻击小鼠后脾脏细胞中的特异性记忆性B细胞。结论成功原核表达,复性纯化得到EV-D68VP2、EV-D68VP3蛋白,两个蛋白均具有较强的抗原特异性,利用流式细胞仪能检测到特异性记忆性B细胞。最终获得了具有较强结合能力,可用于分选抗原特异性记忆性B细胞的EV-D68表面结构蛋白VP2、VP3,为研究VP2、VP3蛋白的中和抗原表位及其广谱中和抗体的分选检测打下了基础。 展开更多

关键词 肠道病毒68型 vp2蛋白 vp3蛋白 原核表达

原文传递

鹅细小病毒和番鸭细小病毒核酸疫苗重组质粒的构建及表达 被引量：9

8

作者 李雪梅 章金刚 +3 位作者 向华 陈晓月 金宁一 费恩阁 《生物技术通讯》 CAS 2002年第6期433-435,共3页

将鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MPV)主要结构蛋白(VP2-VP3)基因克隆到核酸疫苗质粒pIRES1neo载体上,构建了核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP,通过脂质体转染法分别将重组质粒转染到鹅胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞中,核酸疫苗重组质... 将鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MPV)主要结构蛋白(VP2-VP3)基因克隆到核酸疫苗质粒pIRES1neo载体上,构建了核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP,通过脂质体转染法分别将重组质粒转染到鹅胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞中,核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP分别转染鹅胚成纤维细胞和番鸭成纤维细胞中,于转染后72h收取细胞,细胞裂解液裂解后,经Westernblot检测其表达产物可出现特异性反应带,证明表达产物具有很好的反应原性。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 核酸疫苗 重组质粒 构建 表达 vp2-vp3基因

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免疫刺激复合物(ISCOM)介导的传染性法氏囊病病毒多聚蛋白基因免疫的研究 被引量：15

9

作者 李建荣 于涟 +3 位作者 黄耀伟 梁雪芽 孟松树 谢荣辉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期341-348,共8页

将传染性法氏囊病病毒 (IBDV)ZJ2 0 0 0株的多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)基因插入 pCI质粒的CMV启动子下游 ,构建了真核表达质粒pCI VP2 /VP4/VP3,在Lipofectin介导下转染Vero细胞进行了多聚蛋白的瞬时表达。以免疫刺激复合物 (ISCOM)为佐... 将传染性法氏囊病病毒 (IBDV)ZJ2 0 0 0株的多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)基因插入 pCI质粒的CMV启动子下游 ,构建了真核表达质粒pCI VP2 /VP4/VP3,在Lipofectin介导下转染Vero细胞进行了多聚蛋白的瞬时表达。以免疫刺激复合物 (ISCOM)为佐剂制备DNA疫苗 ,进行不同免疫剂量间、不同免疫途径间、一次免疫和二次免疫间的效果对比试验。结果表明 :以肌内和皮内联合免疫法效果最好 ,而口服和点眼等途径未能诱导足够的免疫反应 ;大于 2 0 0 μg的剂量DNA疫苗才能产生良好的免疫力 ;二次免疫的效果明显优于一次免疫。与常规的弱毒疫苗B87和D78相比 ,DNA疫苗产生中和抗体的潜伏期长、效价相对较低 ,对强毒攻击的保护率相当。本试验还证实 ,免疫刺激复合物具有明显提高DNA疫苗免疫效果的作用。DNA疫苗能诱导产生保护性反应 ,为今后IBD疫苗的研究开创了一条新的途径。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 多聚蛋白 DNA疫苗 免疫原性 中和抗体 免疫刺激复合物 ISCOM

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传染性法氏囊病病毒山西株的鉴定及毒力分析 被引量：2

10

作者 刘华栋 陆冰洋 +3 位作者 李婷婷 唐娟 丁树荣 王彩先 《中国家禽》 北大核心 2020年第2期32-36,共5页

研究通过对山西某养鸡场送检疑似鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的病鸡采集病料,设计引物进行PCR鉴定,扩增出831 bp的特异性片段,初步确定病鸡感染IBDV。扩增分离病毒的VP2和VP3片段序列并进行同源性比对和构建系统发育进化树,而后进... 研究通过对山西某养鸡场送检疑似鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的病鸡采集病料,设计引物进行PCR鉴定,扩增出831 bp的特异性片段,初步确定病鸡感染IBDV。扩增分离病毒的VP2和VP3片段序列并进行同源性比对和构建系统发育进化树,而后进行生物学毒力测定试验和动物回归试验。结果显示:VP2和VP3扩增出总长度为474 bp和771 bp的片段;VP2序列中七肽氨基酸顺序为SWSARGS,且在222、253、256、279、284、294、299位点的氨基酸分别为P、H、V、N、T、L、N,均与标准弱毒株相同;分离株VP2序列与B87和Gt株的同源性最高,与B87和Gt株等处于同一个分支;分离株VP3序列与B87和Gt株的同源性最高,且与之位于同一个分支;病毒生物学毒力试验结果显示,分离株的MDT、IVPI、ICPI分别是120 h、0、0.4。确定分离的IBDV为弱毒株;动物回归试验结果显示,发病SPF鸡剖检有典型的传染性法氏囊病病变,表明分离株具有明显的致病性。 展开更多

关键词 IBDV vp2 vp3 ICPI IvpI MDT

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IBDV野毒株主要结构蛋白基因RT─PCR方法的建立 被引量：3

11

作者 姜平 陈溥言 蔡宝祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期8-11,共4页

借助计算机软件，在分析比较了９个传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ａ片段结构蛋白基因的基础上，设计并合成了２对ＶＰ２和ＶＰ３基因ＰＣＲ引物，经ＲＴ－ＰＣＲ反应条件优化选择，成功地建立了ＲＴ－ＰＣＲ方法，用于扩增ＩＢＤＶＶ... 借助计算机软件，在分析比较了９个传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ａ片段结构蛋白基因的基础上，设计并合成了２对ＶＰ２和ＶＰ３基因ＰＣＲ引物，经ＲＴ－ＰＣＲ反应条件优化选择，成功地建立了ＲＴ－ＰＣＲ方法，用于扩增ＩＢＤＶＶＰ２和ＶＰ３基因，经琼脂糖凝胶电泳和分子杂交鉴定，获得４个ＩＢＤＶ野毒株ＶＰ２和ＶＰ３基因。 展开更多

关键词 RT-PCR vp2 结构蛋白 基因 vp3 IBDV 野毒株

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衣原体噬菌体的研究进展 被引量：1

12

作者 马璟玥 刘全忠 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期250-254,共5页

噬菌体是一类细菌依赖性的病毒,又称细菌病毒,能在细菌体内快速增殖。现已发现6种衣原体噬菌体Chp1、Chp2、Chp3、Chp4、CPAR39、PhiCPG1。衣壳蛋白Vp1、Vp2、Vp3是衣原体噬菌体的3种主要结构蛋白。衣原体噬菌体的研究为衣原体感染的治... 噬菌体是一类细菌依赖性的病毒,又称细菌病毒,能在细菌体内快速增殖。现已发现6种衣原体噬菌体Chp1、Chp2、Chp3、Chp4、CPAR39、PhiCPG1。衣壳蛋白Vp1、Vp2、Vp3是衣原体噬菌体的3种主要结构蛋白。衣原体噬菌体的研究为衣原体感染的治疗提供了一条新思路。 展开更多

关键词 衣原体 噬菌体 vp1 vp2 vp3

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传染性法氏囊病病毒结构的分子生物学研究进展

13

作者 裴超信 罗薇 柏黎黎 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2005年第S1期78-82,共5页

传染性法氏囊病是一种严重危害雏鸡的免疫抑制性、高度接触性传染病.传染性法氏囊病病毒为双RNA病毒,有A、B两个片断.A片断编码4种蛋白VP2,VP3,VP4和VP5,B片断编码VP1蛋白.其中的VP2和VP3是主要的宿主保护性抗原,在病毒的结构、变异、... 传染性法氏囊病是一种严重危害雏鸡的免疫抑制性、高度接触性传染病.传染性法氏囊病病毒为双RNA病毒,有A、B两个片断.A片断编码4种蛋白VP2,VP3,VP4和VP5,B片断编码VP1蛋白.其中的VP2和VP3是主要的宿主保护性抗原,在病毒的结构、变异、毒力和免疫原性方面有着重要的作用. 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 传染性法氏囊病病毒变异株 传染性法氏囊病病毒超强毒株(vvIBDV) vp2 vp3

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