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对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP19的单克隆抗体制备及其定位 被引量：8
1
作者 姜有声 战文斌 +1 位作者 程顺峰 王世表 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期69-74,共6页
为了更好地研究对虾白斑综合征病毒(WSSV)蛋白VP19在WSSV感染过程中的作用,利用VP19的单克隆抗体直接对VP19进行了定位。从患白斑综合征的中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)鳃丝中提取WSSV,将提纯的WSSV经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰... 为了更好地研究对虾白斑综合征病毒(WSSV)蛋白VP19在WSSV感染过程中的作用,利用VP19的单克隆抗体直接对VP19进行了定位。从患白斑综合征的中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)鳃丝中提取WSSV,将提纯的WSSV经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,然后洗脱提纯其病毒蛋白VP19并免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合,用间接免疫荧光技术(IFAT)和Western-Blot技术筛选出1株阳性杂交瘤细胞,将检测出的阳性杂交瘤细胞经有限稀释法克隆,研制出抗VP19的单抗,再利用免疫胶体金技术对病毒蛋白VP19进行定位,结果显示,胶体金粒子位于WSSV病毒的囊膜上,说明病毒蛋白VP19位于WSSV囊膜上。 展开更多
关键词 对虾白斑综合征病毒 vp19 单克隆抗体 定位
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对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19的融合表达及其抗病毒感染作用 被引量：13
2
作者 贾启军 孟小林 +2 位作者 徐进平 王健 鲁伟 《中国病毒学》 CSCD 2006年第6期585-588,共4页
根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp19的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp19基因并克隆到pGEM‐T载体中,经过BamHⅠ/HindⅢ酶切、连接并将vp19插入到pET32b表达载体中。用重组质粒pET32b-vp19转化大肠杆菌Origam(iDE3)pLysS,在IPTG诱导... 根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp19的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp19基因并克隆到pGEM‐T载体中,经过BamHⅠ/HindⅢ酶切、连接并将vp19插入到pET32b表达载体中。用重组质粒pET32b-vp19转化大肠杆菌Origam(iDE3)pLysS,在IPTG诱导下,融合蛋白Trx-VP19以可溶性的形式得到表达,经SDS-PAGE和Western-blot检测显示其分子量与预期的大小相符合。目的蛋白经Ni2+柱纯化并定量后分别直接注射鳌虾和包被饲料投喂鳌虾。实验结果表明注射Trx-VP19可以提高鳌虾个体抗WSSV感染力的作用。 展开更多
关键词 对虾白斑综合症病毒(WSSV) vp19 抗WSSV感染
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利用宿主范围扩大的杂交病毒HyNPV在家蚕中表达对虾白斑综合症病毒VP19基因 被引量：1
3
作者 许雅香 吴小锋 +2 位作者 朱玉芳 许梓荣 沈卫德 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期837-839,共3页
对虾白斑综合症其病原是对虾白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus,简称WSSV)。VP19是WSSV的一个囊膜蛋白,HyNPV(HybridofAcNPVandBmNPV,简称HyNPV)是BmNPV和AcNPV通过基因重组后得到的一个具有BmNPV和AcNPV双重优点的新型杂交病毒,... 对虾白斑综合症其病原是对虾白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus,简称WSSV)。VP19是WSSV的一个囊膜蛋白,HyNPV(HybridofAcNPVandBmNPV,简称HyNPV)是BmNPV和AcNPV通过基因重组后得到的一个具有BmNPV和AcNPV双重优点的新型杂交病毒,在克隆了VP19基因的基础上,成功构建了重组转移载体pBlueBicHisCvp19和重组杆状病毒HyNPVVP19。用重组病毒注射接种5龄起蚕,经SDSPAGE和Westernblotting分析,结果表明,WSSVVP19基因在家蚕体内得到了表达,特异性条带大小与预计的基本一致,约为21kD。 展开更多
关键词 HyNPV 对虾白斑综合症病毒 vp19基因 家蚕
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抗WSSV囊膜蛋白(VP28和VP19)单抗的体内中和效果研究 被引量：3
4
作者 李青龙 战文斌 绳秀珍 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2009年第6期56-61,共6页
通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定不同稀释度对虾白斑综合征病毒(WSSV)与已制备的WSSV囊膜蛋白单克隆抗体结合的OD值。利用克氏原螯虾Cambarus proclarkii动物模型,将不同稀释度病毒与单抗1∶1混合孵育2h后,肌肉注射克氏原螯虾(50μl/只)... 通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定不同稀释度对虾白斑综合征病毒(WSSV)与已制备的WSSV囊膜蛋白单克隆抗体结合的OD值。利用克氏原螯虾Cambarus proclarkii动物模型,将不同稀释度病毒与单抗1∶1混合孵育2h后,肌肉注射克氏原螯虾(50μl/只),观察记录螯虾的死亡情况。ELISA结果显示,在1×10-3病毒稀释度下两种单抗均足量。在螯虾体内中和实验中,当病毒浓度为1×10-3、1×10-4、1×10-5和1×10-6稀释度时,MAb1D6(VP28)螯虾组最终死亡率分别为100%、90%、16.7%和6.7%,而MAb2E9(VP19)螯虾组最终死亡率分别为100%、100%、100%和93.3%。这表明随病毒浓度的降低,MAb1D6(VP28)的中和效果越明显。而MAb2E9(VP19)并无明显的中和效果。 展开更多
关键词 WSSV 囊膜蛋白 VP28 vp19 单克隆抗体 体内中和
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白斑综合症病毒囊膜蛋白VP19、VP28的融合表达及中和抗体的制备 被引量：1
5
作者 李红霞 孟小林 +3 位作者 徐进平 王健 鲁伟 曹旭 《中国病毒学》 CSCD 2004年第6期587-590,共4页
根据 GenBank 上 WSSV 囊膜蛋白基因 vp19 和 vp28 的序列,设计并合成两对引物,PCR 扩增得到 vp19和vp28两基因,大小分别为370bp和630bp。通过EcoRI位点连接两基因,再按正确的阅读框插入表达载体pET-22b(+)中,构建出重组表达载体 pET-vp... 根据 GenBank 上 WSSV 囊膜蛋白基因 vp19 和 vp28 的序列,设计并合成两对引物,PCR 扩增得到 vp19和vp28两基因,大小分别为370bp和630bp。通过EcoRI位点连接两基因,再按正确的阅读框插入表达载体pET-22b(+)中,构建出重组表达载体 pET-vp(19+28)并转化大肠杆菌 BL21(DE3)。基因工程菌株 35℃IPTG 诱导,表达产物经 SDS-PAGE 检测显示有与预期大小 41kDa 相吻合的融合蛋白带。用 Ni2+-柱纯化的基因工程蛋白免疫新西兰大白兔制备抗血清,进行螯虾活体中和病毒实验,结果表明抗血清对 WSSV 的中和效率达到了 100%。 展开更多
关键词 白斑综合症病毒(WSSV) vp19 VP28 中和抗体
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转基因聚球藻7942的vp19基因表达效率及其光合生理特性研究 被引量：1
6
作者 朱婵 施定基 +1 位作者 何培民 贾睿 《上海农业学报》 2021年第4期36-41,共6页
采用荧光定量PCR方法检测转基因聚球藻7942在不同生长阶段vp19基因的相对表达量,在此基础上,通过氧电极的方法测定转vp19基因聚球藻7942在不同温度、光强、pH和盐度下光合活性的变化,探究其最适生长条件。结果表明:转基因聚球藻7942的... 采用荧光定量PCR方法检测转基因聚球藻7942在不同生长阶段vp19基因的相对表达量,在此基础上,通过氧电极的方法测定转vp19基因聚球藻7942在不同温度、光强、pH和盐度下光合活性的变化,探究其最适生长条件。结果表明:转基因聚球藻7942的最佳采收时间是对数生长后期(约12 d),其vp19基因相对表达率达到9.2%,VP19蛋白的产率达到7.31 mg∕L。转vp19基因型聚球藻的最适生长条件为:温度38℃,光照强度2500 lx,pH 8.0,盐度0 mol∕L NaCl。研究结果可为转vp19基因型聚球藻口服疫苗规模制备提供依据。 展开更多
关键词 转vp19基因聚球藻 光合活性 荧光定量PCR
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对虾白斑综合症病毒(WSSV)蛋白激酶wsv083的初步研究
7
作者 秦崇涛 杨丰 《中国农学通报》 2015年第23期30-35,共6页
为探讨VP19和VP28是否由蛋白激酶wsv083催化发生磷酸化,将wsv083、VP19和VP28分别进行原核表达。将wsv083蛋白、wsv083表达菌株的裂解液上清以及去磷酸化的wsv083蛋白分别和2种膜蛋白相互作用,以及将wsv083、VP19和VP28的表达质粒共转... 为探讨VP19和VP28是否由蛋白激酶wsv083催化发生磷酸化,将wsv083、VP19和VP28分别进行原核表达。将wsv083蛋白、wsv083表达菌株的裂解液上清以及去磷酸化的wsv083蛋白分别和2种膜蛋白相互作用,以及将wsv083、VP19和VP28的表达质粒共转化至同一菌株中进行表达。结果均未能发现VP19和VP28被磷酸化,但发现wsv083蛋白自身具有苏氨酸和酪氨酸磷酸化的现象。改变wsv083表达质粒,wsv083蛋白同样出现了磷酸化现象。而在将wsv083的序列改变使其失去激酶活性后,表达出的wsv083蛋白不再具有磷酸化的现象。因此认为VP19和VP28的磷酸化不是由wsv083催化产生,wsv083能够自我磷酸化。 展开更多
关键词 WSSV 蛋白激酶 自我磷酸化 vp19 VP28
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Development of Lateral-flow Immunoassay for WSSV with Polyclonal Antibodies Raised against Recombinant VP (19+28) Fusion Protein 被引量：7
8
作者 Qing-yu CHENG Xiao-lin MENG Jin-ping XU Wei LU Jian WANG 《中国病毒学》 CSCD 2007年第1期61-67,共7页
我们为 WSSV 开发了敏感、快速的侧面流动的免疫分析(LFIA ) ，用象指示物的胶体的黄金。熔化蛋白质， VP (19+28 ) ，在 E 被表示。coli，净化并且过去常准备 polyclonal 抗体。净化的 anti-VP (19+28 ) IgG 与胶体的黄金被结合。Uncon... 我们为 WSSV 开发了敏感、快速的侧面流动的免疫分析(LFIA ) ，用象指示物的胶体的黄金。熔化蛋白质， VP (19+28 ) ，在 E 被表示。coli，净化并且过去常准备 polyclonal 抗体。净化的 anti-VP (19+28 ) IgG 与胶体的黄金被结合。Unconjugated anti-VP (19+28 ) IgG 和山羊反兔子 IgG 在硝化纤维素膜上被使不能调动。在汇编以后，虾样品的三个组(在每个组的 5 个单个动物) 被测试它包括了健康、垂死、死了的虾。为每个组，三不同纸巾(身体蜜汁，鳃和 hepatopancreas ) 同时被测试。在平行，所有样品也为比较用 PCR 被分析。从测试的 45 件样品，当 15 作为否定被分类时， 30 作为积极被检测。LFIA 的结果相关，那些由 PCR 分析获得了，显示这二个察觉方法有在在这初步的研究测试的样品的有限数字的一样的功效。关键词侧面流动的免疫分析 - 白点症候群病毒(WSSV )- VP19 - VP28 CLC 数字 S945. 展开更多
关键词 Lateral-flow immunoassay White spot syndrome virus (WSSV) vp19 VP28
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