人博卡病毒1型主要抗原NS1、NP1及VP1/2的抗体制备及应用

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作者 刘文宽 游爱萍 +4 位作者 许多 邱淑燕 周志超 李炽 周荣 《化学与生物工程》 CAS 2017年第12期4-9,共6页

人博卡病毒1型(human bocavirus 1,HBoV1)是全球流行的重要呼吸道病毒,其研究尚处于初期阶段。通过原核表达的方式对HBoV1主要抗原NS1、NP1、VP1/2进行蛋白表达,通过纯化、免疫小鼠成功获得3种蛋白的抗体血清,通过ELISA评价了抗体对相... 人博卡病毒1型(human bocavirus 1,HBoV1)是全球流行的重要呼吸道病毒,其研究尚处于初期阶段。通过原核表达的方式对HBoV1主要抗原NS1、NP1、VP1/2进行蛋白表达,通过纯化、免疫小鼠成功获得3种蛋白的抗体血清,通过ELISA评价了抗体对相应蛋白抗原及临床HBoV1阳性样品的效价,并将所制备的抗体成功用于HBoV1广州株GU338055反向遗传系统的NS1、NP1、VP1/2的免疫荧光研究。结果表明,所制备抗体在1∶50稀释度时A_(450)值对阴性对照约有4倍提升,为HBoV1后续深入研究提供了重要工具,具有重要意义。 展开更多

关键词 人博卡病毒1型 NS1 NP1 vp1/2 抗体 免疫荧光

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共表达口蹄疫病毒VP1-2A基因与猪IL-2重组腺病毒的构建及其免疫效果研究 被引量：3

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作者 苏春霞 段相国 +3 位作者 郑洁 林源 郭琳 陈溥言 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期1-5,共5页

构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨... 构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨架载体pAdenoVatorΔE1/E3同源重组。重组腺病毒质粒转染HEK-293A细胞,得到重组腺病毒rAd5VP1-2A-Po IL-2。MTT法检测重组IL-2的生物活性。用rAd5VP1-2A-poIL-2免疫接种小鼠,同时设免疫单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1和空腺病毒的对照组。通过检测淋巴细胞增殖功能,特异性抗体分泌,IL-4和IFN-γ的表达水平衡量rAd5VP1-2A-poIL-2对小鼠特异性免疫应答的影响。结果显示,成功获得了rAd5VP1-2A-poIL-2,MTT法检测重组IL-2具有生物学活性。小鼠免疫试验结果显示,与rAd5VP1免疫组相比,rAd5VP1-2ApoIL-2免疫既能增强重组病毒诱导小鼠淋巴细胞增殖的能力,又能提高重组病毒诱导小鼠特异性抗体的水平。细胞因子检测结果显示,串联IL-2能促进重组病毒诱导Th1和Th2的分化。研究结果说明,rAd5VP1-2A-poIL-2可望成为口蹄疫的候选疫苗。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 重组腺病毒 vp1-2A基因 白细胞介素2

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猪圆环病毒2型Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白在杆状病毒中共表达及鉴定 被引量：3

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作者 王一平 郭龙军 +7 位作者 唐青海 刘丹 危艳武 李胜斌 刘建波 黄立平 吴洪丽 刘长明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期44-47,共4页

为在真核细胞中共表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白,本研究将其各自编码基因克隆于杆状病毒双表达载体(pFastBacTMDual)中构建重组转移质粒(pFBD-Cap-VP1),转化至DH10BacTM感受态细胞中制备重组杆粒(rBacm... 为在真核细胞中共表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白与猪O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白,本研究将其各自编码基因克隆于杆状病毒双表达载体(pFastBacTMDual)中构建重组转移质粒(pFBD-Cap-VP1),转化至DH10BacTM感受态细胞中制备重组杆粒(rBacmid-Cap-VP1),并转染Sf21昆虫细胞,拯救出能够共表达PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白的重组杆状病毒(rBac-Cap-VP1)。SDS-PAGE和western blot检测结果表明,共表达的重组PCV2-Cap和FMDV-VP1蛋白产物的分子量分别为28 ku和30 ku,各占总蛋白含量的11.6%和3.4%,能够分别与PCV2和FMDV抗体发生特异性反应,表明共表达蛋白具有良好的反应原性。本研究为PCV2和FMDV基因工程二联亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 猪O型口蹄疫病毒 CAP蛋白 vp1蛋白 共表达

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GⅡ.2型诺如病毒VP1蛋白原核表达及蛋白纯化 被引量：2

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作者 李秋璇 韩继成 +8 位作者 付婷婷 张金勇 王茂鹏 李金凤 解长占 李卓昕 肖朋朋 鲁会军 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第7期745-748,754,共5页

目的利用原核表达系统,表达了GⅡ.2型诺如病毒VP1蛋白,优化诱导条件并进行蛋白的纯化。方法扩增诺如病毒的VP1基因,克隆至pET32a(+)载体,构建重组质粒pET32a-VP1。将pET32a-VP1转化至大肠埃希菌BL21(DE3),加入IPTG进行诱导表达并优化诱... 目的利用原核表达系统,表达了GⅡ.2型诺如病毒VP1蛋白,优化诱导条件并进行蛋白的纯化。方法扩增诺如病毒的VP1基因,克隆至pET32a(+)载体,构建重组质粒pET32a-VP1。将pET32a-VP1转化至大肠埃希菌BL21(DE3),加入IPTG进行诱导表达并优化诱导条件。利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。结果成功扩增大小为1659 bp的诺如病毒VP1基因。PCR检测重组质粒pET32a-VP1构建成功。将重组质粒转化至BL21(DE3),IPTG诱导表达70×10^3的VP1重组蛋白,优化的最佳诱导表达条件为37℃,0.6 mmol/L IPTG诱导5 h。重组蛋白以包涵体的形式表达,并SDS-PAGE鉴定镍柱纯化产物为单一电泳条带的目的蛋白。结论利用原核表达系统成功构建了重组质粒pET32a-VP1,并表达纯化了诺如病毒VP1重组蛋白,为单克隆及多克隆抗体的制备、检测试剂盒以及新型疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 GⅡ.2型诺如病毒 vp1 原核表达 蛋白纯化

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亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因重组犬2型腺病毒的构建

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作者 张秀芹 夏咸柱 +2 位作者 卫广森 常惠芸 高玉伟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期118-121,共4页

应用PCR方法扩增出亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒的VP1基因,继而构建出真核表达载体pVAX-VP1。再将含有巨细胞启动子CMV的目的基因表达盒连接到穿梭载体pVAX△E3上,筛选出VP1表达盒方向与E3区转录方向一致的重组子,获得转移载体。再经酶切,连接等... 应用PCR方法扩增出亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒的VP1基因,继而构建出真核表达载体pVAX-VP1。再将含有巨细胞启动子CMV的目的基因表达盒连接到穿梭载体pVAX△E3上,筛选出VP1表达盒方向与E3区转录方向一致的重组子,获得转移载体。再经酶切,连接等方法获得重组腺病毒质粒。利用脂质体介导将重组质粒转染DK细胞,转染3次后,细胞出现明显的腺病毒病变。经PCR扩增、测序检测及基因组酶切鉴定,证明该病毒即为重组犬2型腺病毒。命名为CAV2/FMDV。经验证,该重组毒可稳定遗传,其毒价为103.5TCID50/mL。 展开更多

关键词 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒 犬2型腺病毒 重组 vp1基因

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表达O型口蹄疫病毒VP1中和表位的重组猪圆环病毒2型毒株的构建及其生物学特性 被引量：1

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作者 张飞雁 唐青海 +5 位作者 黄立平 危艳武 吴洪丽 郭龙军 付玉洁 刘长明 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期448-453,共6页

为构建以猪圆环病毒2型(PCV2)为载体,表达O型口蹄疫病毒(FMDV)中和表位的重组病毒,将FMDV-VP1蛋白中和抗原表位(第141～160位氨基酸)插入PCV2-ORF2编码的Cap蛋白C-末端,利用感染性克隆技术拯救出1株表达FMDV-VP1的中和抗原表位PCV2重组... 为构建以猪圆环病毒2型(PCV2)为载体,表达O型口蹄疫病毒(FMDV)中和表位的重组病毒,将FMDV-VP1蛋白中和抗原表位(第141～160位氨基酸)插入PCV2-ORF2编码的Cap蛋白C-末端,利用感染性克隆技术拯救出1株表达FMDV-VP1的中和抗原表位PCV2重组毒株(命名为recPCV2-CL-VP1);采用免疫过氧化物酶单层试验、捕获ELISA和免疫电镜技术鉴定该重组病毒。结果表明,在重组病毒感染细胞中检出PCV2特异性抗原及VP1表位抗原;重组病毒的形态学特征与亲本病毒相似,可采用PCR和ELISA法相鉴别;拯救毒株的繁殖能力较亲本毒差,经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定。证实成功构建了1株表达FMDV-VP1中和抗原表位的PCV2重组病毒,为进一步研制基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 口蹄疫病毒 vp1蛋白 中和表位 重组病毒

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南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白单抗的制备与特性研究 被引量：1

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作者 朱昱茜 石正旺 +8 位作者 罗俊聪 陈婕 林永玉 席韬 张帆 石鑫泰 郑海学 包世俊 田宏 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期794-801,共8页

为制备南非2型口蹄疫病毒型特异性单克隆抗体,本研究通过原核系统表达南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白,亲和层析的方法纯化目的蛋白。将纯化的VP1蛋白使用弗氏佐剂乳化后,免疫BALB/c小鼠,待加强免疫后取血清效价最稳定的小鼠脾细胞与小鼠骨髓... 为制备南非2型口蹄疫病毒型特异性单克隆抗体,本研究通过原核系统表达南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白,亲和层析的方法纯化目的蛋白。将纯化的VP1蛋白使用弗氏佐剂乳化后,免疫BALB/c小鼠,待加强免疫后取血清效价最稳定的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞进行融合,应用间接ELISA筛选针对南非2型VP1蛋白的单克隆抗体。采用特异性试验、叠加试验和抗体亚型鉴定等方法对筛选的单克隆抗体特性进行分析。结果发现,本研究成功表达南非2型VP1蛋白,筛选出2株能稳定分泌特异性针对南非2型VP1蛋白的杂交瘤细胞株(3B2和6F2),其亚型分别为IgG2a和IgG1,叠加试验结果表明2株单抗的叠加系数>40%,说明两株单抗针对不同的抗原位点;单抗的效价可达1∶256000,特异性试验证明2株单抗均不与O型、A型口蹄疫病毒及其他常见猪病病毒产生交叉反应。由此可见,本研究制备的单克隆抗体具有良好的特异性和反应性,为南非2型口蹄疫病毒定型诊断和未来疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 南非2型 口蹄疫病毒 vp1蛋白 特异性单克隆抗体

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杆状病毒表达系统融合表达猪圆环病毒2型Cap蛋白与口蹄疫病毒VP1蛋白及免疫原性评估 被引量：1

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作者 刘小康 江乾森 +5 位作者 杨意 陈健 何玉龙 杨芳 唐少君 舒建洪 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期275-282,共8页

猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白,能诱导宿主产生特异性免疫应答。口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）VP1蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能刺激机体产生中和抗体。利用杆状... 猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白,能诱导宿主产生特异性免疫应答。口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）VP1蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能刺激机体产生中和抗体。利用杆状病毒表面展示系统,将这2种病毒蛋白与猪CD40配体（CD40 ligand,CD40L）进行融合表达并展示在杆状病毒表面,构建了rv Ac-Cap、rv Ac-VP1和rv Ac-Cap-VP1 3种重组杆状病毒。通过SDS-PAGE和Western blotting检测3种重组杆状病毒感染的Sf9细胞总蛋白,证明3种融合蛋白成功表达。纯化的重组杆状病毒颗粒以1×10^8pfu/只的剂量免疫接种BALB/c小鼠,通过间接ELISA检测血清中Cap和VP1的抗体浓度,证明表面展示有Cap和VP1的重组杆状病毒能激发小鼠产生较高水平的抗体,与PCV2和FMDV商品化疫苗免疫组的抗体浓度差异不显著（P〉0.05）,表明该重组杆状病毒具有较好的免疫原性。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型Cap蛋白 口蹄疫病毒vp1蛋白 杆状病毒 表面展示 免疫原性

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肠道病毒71型VP1及2A基因特征研究 被引量：2

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作者 范张洁 段广才 +1 位作者 张卫东 郗园林 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期234-240,共7页

目的 检测临床分离的肠道病毒71型（EV71）轻型、重型毒株VP1基因、2A基因的核苷酸序列,进行遗传进化途径分析.方法 将50份临床手足口病患者粪便标本处理后分离病毒,用EV71特异性引物进行RT-PCR扩增,获得EV71毒株,针对不同临床背景的标... 目的 检测临床分离的肠道病毒71型（EV71）轻型、重型毒株VP1基因、2A基因的核苷酸序列,进行遗传进化途径分析.方法 将50份临床手足口病患者粪便标本处理后分离病毒,用EV71特异性引物进行RT-PCR扩增,获得EV71毒株,针对不同临床背景的标本,分别选取轻型、重型的毒株,用特异性引物分别对VP1基因及2A基因进行RT-PCR扩增,对其产物进行测序及遗传进化分析,并探讨它们之间的差别.结果 50份临床手足口病标本中有30份检测是EV71,其中轻型（手足口）13份,重型（手足口并发脑炎或心肌炎）17份.轻型和重型中各自选取5株对VP1基因和2A基因进行测序和遗传学分析,通过同源性比较和构建系统发生树发现,此10株EV71病毒和中国大陆已发表的5株EV71病毒（fuyangEU703814.1、xi_anHM003207.1、shandongEU753418.1、shenzhen-FJ607337.1、henanGU366191.1）全部属于C基因型,且核苷酸同源性较高,VP1基因和2A基因的同源性分别在94.7%～99.4%和93.6%～99.3%范围内.本次分离的10株EV71病毒与A、B基因型代表株比较,核苷酸同源性分别为81.0%～84.6%和78.4%～82.2%,差异较大.与已知的C1、C2、C3亚型代表株比较,核苷酸同源性在87.8%～90.2%,差异≥10%,与已知的C4亚型代表株比较,核苷酸同源性在96.8%～99.6%,因此认为可将这10株病毒划分为C4亚型.在系统发生树上,这10株病毒形成一个较独立的分支.结论 EV71 C4亚型病毒在中国大陆有较广泛的传播,且毒株之间VP1基因的遗传关系紧密;2A基因在轻型和重型病例毒株之间遗传差异不大. 展开更多

关键词 肠道病毒71型 基因型 vp1基因 2A基因 遗传进化

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伪狂犬病病毒UL36蛋白单克隆抗体的制备和鉴定 被引量：1

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作者 陈玲超 王兴娅 +11 位作者 李俊波 李佳佳 王晨 李松楠 王安铖 孟鑫 童武 孔宁 于海 单同领 童光志 郑浩 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期373-378,共6页

伪狂犬病病毒UL36基因编码的皮层蛋白VP1/2在病毒粒子组装过程中发挥重要作用。本试验以UL36基因为研究对象,将截短的UL36基因克隆入载体pCold I,构建了重组原核表达质粒pCold I-UL36。经诱导表达,将包涵体形式表达的重组蛋白经过变性... 伪狂犬病病毒UL36基因编码的皮层蛋白VP1/2在病毒粒子组装过程中发挥重要作用。本试验以UL36基因为研究对象,将截短的UL36基因克隆入载体pCold I,构建了重组原核表达质粒pCold I-UL36。经诱导表达,将包涵体形式表达的重组蛋白经过变性、亲和层析及复性后获得了纯度较高的蛋白。将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合和间接ELISA方法筛选出1株能稳定分泌针对UL36蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,被命名为UL36-6,抗体亚型鉴定结果为Ig G1和κ,制备的腹水抗体中和效价及纯度高,Western-blot和间接免疫荧光试验结果表明单克隆抗体具有很好的特异性。综上所述,本研究成功制备出1株针对PRV UL36蛋白的单克隆抗体,为深入研究UL36蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 UL36基因 vp1/2 单克隆抗体

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CDV,CPV,CAV三联DNA疫苗的实验免疫研究 被引量：4

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作者 郑颖 邱薇 +6 位作者 李丽红 聂福平 龙贵伟 李作生 张富强 李江 范泉水 《云南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期529-535,共7页

犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)是引起犬传染病的主要病原体,严重危害犬的健康,基因疫苗具有安全和克服幼犬母源抗体对主动免疫干扰的优点.根据CDV的H基因、CPV的VP1基因、犬2型腺病毒(CAV-2)F基因的核苷酸序列,用PCR... 犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)是引起犬传染病的主要病原体,严重危害犬的健康,基因疫苗具有安全和克服幼犬母源抗体对主动免疫干扰的优点.根据CDV的H基因、CPV的VP1基因、犬2型腺病毒(CAV-2)F基因的核苷酸序列,用PCR或RT-PCR方法扩增克隆目的基因,分别构建了pIRCDV-H,pIRESVP1和pcCAV-F 3个真核表达质粒并进行了序列验证,用3种免疫质粒经纯化后混合对15只犬进行免疫,所有接种混合基因疫苗的犬,2次免疫后即可产生较高的抗体水平,攻毒后大部分犬能抵抗3种强毒的攻击,对照犬发病严重,证明所构建的核酸疫苗在一定程度上可抵抗强毒的攻击. 展开更多

关键词 犬瘟热H基因 犬细小病毒vp1基因 犬腺病毒F基因 基因免疫

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