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猫杯状病毒VP1蛋白B细胞表位的串联表达及间接ELISA方法的建立
1
作者 王真真 汤傲星 +9 位作者 刘春草 李娜 林亮亮 宋若楠 贾楠楠 杜汉宇 朱杰 李传峰 刘光清 孟春春 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期103-109,共7页
为建立一种检测猫杯状病毒抗体的间接ELISA方法,本试验将截短的猫杯状病毒VP1蛋白表达为重组蛋白纯化后作为包被抗原。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了比较。结果显示,抗... 为建立一种检测猫杯状病毒抗体的间接ELISA方法,本试验将截短的猫杯状病毒VP1蛋白表达为重组蛋白纯化后作为包被抗原。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了比较。结果显示,抗原包被量为2μg/mL,血清最佳稀释度为1∶1000,37℃作用1 h;二抗的最佳工作浓度为1∶10000;TMB底物显色液37℃避光显色反应15 min。特异性试验结果显示,同FPV和FHV阳性血清均无交叉反应。此方法对猫细小病毒阳性血清的敏感性为1∶40960;组内、组间变异系数均小于5%。与本实验室建立的包被全病毒的方法平行比较,显示其检测阴阳性血清的值高度一致。结果表明,建立的基于截短的猫杯状病毒VP1蛋白建立的间接ELISA方法非常适用于临床样本的检测,可为猫杯状病毒的防控工作提供技术支撑。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 vp1蛋白 串联的B细胞表位 间接ELISA
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一种来源于云南棕果蝠肠道的新型博卡病毒及其VP1基因进化特征
2
作者 李柳醒 李楠 +3 位作者 何于雯 孟锦昕 杨绍昌 王静林 《中国热带医学》 北大核心 2025年第8期945-950,共6页
目的了解云南棕果蝠(Rousettus leschenaultii)携带病毒的情况及其新型博卡病毒(Bocavirus,BoV)遗传进化关系,为病毒溯源及相关疾病防控提供了新的参考。方法2019年9月在云南省临沧市双江自治县某果园捕捉蝙蝠,经形态鉴定后,将蝙蝠进行... 目的了解云南棕果蝠(Rousettus leschenaultii)携带病毒的情况及其新型博卡病毒(Bocavirus,BoV)遗传进化关系,为病毒溯源及相关疾病防控提供了新的参考。方法2019年9月在云南省临沧市双江自治县某果园捕捉蝙蝠,经形态鉴定后,将蝙蝠进行解剖,分别取肺和肠道及其内容物,研磨后每个样本取200μL上清液混合成2个样本,即肺组织样本和肠道及其内容物样本。2个样本经超速离心浓缩后,提取病毒核酸,采用随机PCR扩增病毒核酸,并对扩增产物进行高通量测序及拼接组装。根据拼接获得的病毒序列进行引物设计、半巢式PCR扩增,并测序验证;采用MEGA-X等生物信息学软件对博卡病毒VP1基因进行序列分析。结果共采集到5只棕果蝠。从肠道及其内容物样本中拼接组装到1条3401 nt序列,经Blast-x比对发现与蝙蝠博卡病毒氨基酸同源性最高,为63.90%;在肺组织样本中未能检测出博卡病毒序列。根据这条序列设计5套引物,分别对5只蝙蝠肠道及其内容物进行半巢式PCR扩增,其中1只棕果蝠(编号:YNSJ03)肠道及其内容物扩增为阳性,对样本进行部分基因组扩增,获得2900 nt的博卡病毒基因序列,将该序列命名为YNSJ03-BtBoV。基于VP1基因氨基酸序列构建系统发育树,遗传进化分析结果显示:本研究在云南省棕果蝠中检测到的YNSJ03-BtBoV单独形成一个进化分支,与2017年和2024年在中国蝙蝠中检测的蝙蝠博卡细小病毒属遗传进化关系较近,它们之间的氨基酸同源性为70.1%(BtMf-PV/HuB2013株),核苷酸同源性为71.0%(YN2016株)。结论本研究在棕果蝠肠道中发现了一种新型博卡病毒,拓展了蝙蝠携带博卡病毒的相关资料,并揭示了蝙蝠中博卡病毒的遗传多样性。 展开更多
关键词 蝙蝠 博卡病毒 vp1基因 遗传进化 同源性 高通量测序
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猪捷申病毒5型VP1蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
3
作者 邵永恒 倪民婷 +6 位作者 高梦玲 汤娇 张耕馨 林圣宇 刘光亮 陈佳宁 王雯慧 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期883-889,共7页
旨在建立针对猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)5型的间接ELISA检测方法,为其防控提供物质储备。PTV是猪的一种急性、烈性病原,以高发病率和高致死率为主要特征。其临床表现包括脑炎、肺炎、繁殖障碍、心肌炎及腹泻等多种症状。但该... 旨在建立针对猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)5型的间接ELISA检测方法,为其防控提供物质储备。PTV是猪的一种急性、烈性病原,以高发病率和高致死率为主要特征。其临床表现包括脑炎、肺炎、繁殖障碍、心肌炎及腹泻等多种症状。但该病原亚型众多,不同亚型间临床表现差异较大,且缺乏高效、特异的血清学检测方法,阻碍了对PTV-5的防治。本研究针对危害较大的PTV-5构建了pET-30a-VP1重组质粒,通过原核表达获得了VP1蛋白,以纯化的VP1为包被抗原,经条件优化成功建立了针对PTV-5的间接ELISA方法。该方法与常见猪源病毒标准阳性血清无交叉反应,最低检测稀释度为1∶3200,批内与批间变异系数均低于10%,具有良好的特异性、敏感性和重复性。利用该方法对东北地区279份临床样本进行检测,其阳性率为67.74%,与报道的流行情况相符。本研究建立的间接ELISA检测方法综合评价良好,为PTV-5的临床检测提供技术支持。 展开更多
关键词 猪捷申病毒 vp1蛋白 原核表达 间接ELISA
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牛肠病毒VP1基因重组腺病毒的构建及其对小鼠的免疫原性评价
4
作者 马思琪 吕雯雯 +9 位作者 陈俊贞 李建林 刘昱成 关团 丁剑 刘浩然 叶鸿艳 杨莉 付强 史慧君 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4615-4625,共11页
构建表达牛肠病毒(bovine enterovirus,BEV)结构蛋白VP1的重组腺病毒,并对其进行免疫原性和安全性的初步验证。首先,应用PCR扩增BEV VP1基因,并将其克隆至腺病毒载体pDC316-CMV-copGFP,获得的重组质粒pDC316-VP1-copGFP与pBHGlox-△E1,3... 构建表达牛肠病毒(bovine enterovirus,BEV)结构蛋白VP1的重组腺病毒,并对其进行免疫原性和安全性的初步验证。首先,应用PCR扩增BEV VP1基因,并将其克隆至腺病毒载体pDC316-CMV-copGFP,获得的重组质粒pDC316-VP1-copGFP与pBHGlox-△E1,3cre共转染至293细胞后,进行病毒滴度测定及RT-PCR鉴定;其次,构建pET-32a-BEV-VP1原核表达质粒,优化诱导时间和温度后纯化BEV VP1蛋白;同时,将阴性对照腺病毒rAdv-copGFP、重组腺病毒rAdv-VP1及空白对照PBS分别肌注免疫BALB/c小鼠,观察小鼠临床症状;随后于免疫21 d后感染BEV,并于攻毒第0、5、10、15天采集小鼠肝、肺、脾、肾、小肠,分别提取组织RNA并制作病理切片,检测各组织中病毒载量并观察组织病理变化;最后,使用ELISA检测免疫血清中总IgG抗体、特异性抗体、细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果显示:成功构建腺病毒载体pDC316-VP1-copGFP;筛选出最优VP1原核表达条件为37℃诱导8 h,成功纯化出pET-32a-BEV-VP1蛋白;腺病毒免疫小鼠血清能够识别纯化后的VP1蛋白;重组腺病毒免疫能使小鼠产生特异性抗体,从而提高体液免疫与细胞免疫水平。本研究成功构建表达BEV VP1蛋白的重组腺病毒,在免疫小鼠后能够较好地诱导小鼠体内产生体液免疫应答和细胞免疫应答,从而对BEV感染起到了一定的保护作用,为进一步研发BEV新型疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 牛肠病毒 重组腺病毒 结构蛋白vp1 细胞免疫
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基于遗传密码子扩展技术的口蹄疫病毒VP1蛋白位点特异性荧光标记
5
作者 郝荣增 卢炳州 +6 位作者 杨洋 毛玉涵 王姿逸 赵陇和 李亚军 茹毅 郑海学 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期427-434,共8页
将荧光标记分子引入细胞内表达的口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1的特异性氨基酸位点,从而实现在活细胞内对蛋白质的动态可视化标记。先对VP1蛋白中非天然氨基酸(UAA)插入位点进行筛选,利用遗传密码子扩展技术将UAA定点插入到VP1蛋白,并通... 将荧光标记分子引入细胞内表达的口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1的特异性氨基酸位点,从而实现在活细胞内对蛋白质的动态可视化标记。先对VP1蛋白中非天然氨基酸(UAA)插入位点进行筛选,利用遗传密码子扩展技术将UAA定点插入到VP1蛋白,并通过生物正交点击化学反应引入荧光分子,观察细胞内的荧光标记蛋白;进一步通过间接免疫荧光试验验证荧光标记的蛋白。结果显示,成功筛选出VP1蛋白中UAA插入效率较高的氨基酸突变位点,并可以通过UAA控制VP1蛋白的表达。证实荧光分子染料DIBO-Alexa Fluor-488与VP1蛋白上的UAA发生点击化学反应可以进行活细胞染色,同时进行间接免疫荧光染色,可以观察到2种染色结果存在共定位趋势。本研究采用新方法实现了活细胞内FMDV VP1蛋白特异位点的荧光标记,为VP1蛋白功能研究和在细胞内示踪FMDV的感染及复制过程奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白质标记 口蹄疫病毒 vp1蛋白 点击化学 非天然氨基酸
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2021—2022年云南省柯萨奇病毒A10病毒VP1基因特征分析
6
作者 曹亿会 田炳均 +4 位作者 王志超 寸建萍 周晓芳 姜黎黎 乔恩发 《公共卫生与预防医学》 2025年第6期25-29,共5页
目的了解云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病原柯萨奇病毒A10型(Coxsackievirus A10,CVA10)VP1基因特征。方法对HFMD患者粪便样本进行肠道病毒CVA10实时荧光定量PCR核酸检测,阳性标本对其VP1基因序列进行扩增并测序。... 目的了解云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病原柯萨奇病毒A10型(Coxsackievirus A10,CVA10)VP1基因特征。方法对HFMD患者粪便样本进行肠道病毒CVA10实时荧光定量PCR核酸检测,阳性标本对其VP1基因序列进行扩增并测序。采用DNAstar7.1的Seqman软件进行序列拼接及Mega 6.0进行核苷酸序列及氨基酸位点分析。结果得到CVA10的VP1基因序列894核苷酸,共编辑298个氨基酸。和原始株相比,主要有3个区段氨基酸突变活跃,分别为13-33、141-142、283-285等位点,云南省分离株和参考株各组间核苷酸差异率在16.92%~30.90%之间,氨基酸差异率为2.58%~4.00%。CVA10组内核苷酸差异率为10.58%,氨基酸差异率为1.80%。CVA10 VP1氨基酸序列的150-176区域具有高度保守的特性。20株CVA10有6株和四川株MW178898株属于C基因型的C1亚型。其余的14株均属于C基因组的C2亚型。结论CVA10的VP1基因变异活跃,是云南手足口病的重要病原,CVA10的C2亚型是本次分离的优势株,在云南省C1、C2共循环,应加强CVA10持续监测并研发包含CVA10的多价疫苗。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒CVA10 vp1基因 系统进化分析
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聚集性发热疫情相关的柯萨奇病毒A组4型VP1区基因特征分析
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作者 尉秀霞 肖金波 +4 位作者 李敏 王祎 杨艳娜 吕若然 张勇 《病毒学报》 北大核心 2025年第5期1361-1366,共6页
本研究针对2024年6月北京经济技术开发区发生的两起聚集性发热疫情,开展了病原学鉴定和基因特征分析,旨在为该类疫情的防控提供实验室依据。研究采集了两起发热疫情中6例病例的咽拭子标本,采用实时荧光定量RT-PCR方法进行呼吸道多种病... 本研究针对2024年6月北京经济技术开发区发生的两起聚集性发热疫情,开展了病原学鉴定和基因特征分析,旨在为该类疫情的防控提供实验室依据。研究采集了两起发热疫情中6例病例的咽拭子标本,采用实时荧光定量RT-PCR方法进行呼吸道多种病原体的核酸筛查,结果显示6份标本均为肠道病毒核酸阳性。进一步通过病毒分离、分型鉴定和VP1区进化分析,确认两起疫情均是由柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus A4,CVA4)感染引起,且均属于C基因型。这一结果表明,应加强肠道病毒尤其是CVA4引起的聚集性发热疫情的监测和防控工作。 展开更多
关键词 聚集性发热疫情 肠道病毒 柯萨奇病毒A组4型 C基因型 vp1区 系统发育分析
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猫杯状病毒VP1蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立
8
作者 姬晶晶 王彬 +3 位作者 何昭群 李嘉豪 单衍可 刘斐 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第3期87-94,共8页
旨在建立一种灵敏、准确、高通量检测猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)抗体的间接ELISA方法。本研究通过优化表达条件,在大肠杆菌中表达FCV的VP1蛋白,对重组蛋白进行镍离子亲和层析纯化和透析复性,通过SDS-PAGE和Western blot验证... 旨在建立一种灵敏、准确、高通量检测猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)抗体的间接ELISA方法。本研究通过优化表达条件,在大肠杆菌中表达FCV的VP1蛋白,对重组蛋白进行镍离子亲和层析纯化和透析复性,通过SDS-PAGE和Western blot验证重组蛋白;以重组VP1蛋白为包被抗原建立检测FCV抗体的间接ELISA方法,通过方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度和抗体最佳稀释度,优化抗原包被条件、样品孵育时间、封闭液种类等条件,并对其性能进行验证。结果:表达的目的蛋白条带清晰、大小正确,与FCV阳性血清具有良好的反应性,建立的间接ELISA方法检测6份FCV阴性血清,猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)阳性血清,猫疱疹病毒(feline herpesvirus, FHV)阳性血清均为阴性,对FCV阳性血清的最低检出效价可达1∶10 240,组间与组内变异系数均小于10%,与商品化试剂盒相比符合率达100%。综上,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的灵敏度、重复性和符合率,与其他猫常见病毒阳性血清不发生交叉反应,可以用于临床样品的检测,为FCV感染的诊断、防控、疫苗免疫效力评价提供了技术手段。 展开更多
关键词 猫杯状病毒vp1蛋白 原核表达 间接ELISA
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塞内加谷病毒VP1蛋白对细胞因子的影响
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作者 董建国 陶梦筱 +7 位作者 马云欣 刘培研 王莹 杨灿 杨大苗 刘向楠 张宁 丛锋 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期308-313,共6页
为了研究塞内加谷病毒(SVV)VP1蛋白对细胞因子的影响,本研究通过RT-PCR、双酶切和连接试验构建表达VP1蛋白真核质粒,免疫印迹试验鉴定VP1是否正确表达,荧光定量试验检测VP1过表达对细胞因子IL-1α、IL-1β、CCL-2、CCL-5和TNF-α的影响... 为了研究塞内加谷病毒(SVV)VP1蛋白对细胞因子的影响,本研究通过RT-PCR、双酶切和连接试验构建表达VP1蛋白真核质粒,免疫印迹试验鉴定VP1是否正确表达,荧光定量试验检测VP1过表达对细胞因子IL-1α、IL-1β、CCL-2、CCL-5和TNF-α的影响。双酶切结果显示VP1真核质粒构建成功,遂被命名为p EGFP-C1-VP1。免疫印迹试验显示VP1蛋白能够正确表达。荧光定量试验结果显示VP1蛋白在转染后第24小时显著促进IL-1α的转录,在第12小时和第36小时分别显著促进和抑制IL-1β的转录,在第12小时和第24小时显著促进CCL-2的转录,在第12、24、36小时显著促进CCL-5的转录,在第12小时和第24小时显著促进TNF-α的转录。结果表明,SVV VP1蛋白能够诱导IL1α、CCL-2、CCL-5、TNF-α的转录;对于IL-1β,SVV VP1蛋白早期促进IL-1β的转录,后期抑制IL-1β的转录。 展开更多
关键词 塞内加谷病毒 vp1蛋白 细胞因子 荧光定量
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2018—2022年成都市手足口柯萨奇病毒A6型VP1基因进化特征分析
10
作者 周玉真 谢汶君 +3 位作者 沈丹芸 程悦 何迅 陈恒 《预防医学情报杂志》 2025年第4期557-561,共5页
目的分析2018—2022年成都市手足口病柯萨奇病毒A6型(coxsackievirus A6,CVA6)基因特征,为手足口病的预防控制提供依据。方法收集2018—2022年手足口病人中为CV A6阳性的样本168份,采用RT-PCR法扩增CVA6VP1基因并测序,使用MEGA 7.0软件... 目的分析2018—2022年成都市手足口病柯萨奇病毒A6型(coxsackievirus A6,CVA6)基因特征,为手足口病的预防控制提供依据。方法收集2018—2022年手足口病人中为CV A6阳性的样本168份,采用RT-PCR法扩增CVA6VP1基因并测序,使用MEGA 7.0软件进行序列分析、进化树构建及比较核苷酸、氨基酸同源变异情况。结果基因进化分析显示,168株CV A6位于同一分支,均属于D基因型中的D3a基因亚型,与Gdula原型株处于不同分支,亲缘关系较远。168株样本的氨基酸序列VP1区与原型株Gdula株比较共有26个位点的氨基酸发生了变异。结论2018—2022年成都市引起手足口病的CV A6属于D3a亚型,VP1区基因存在多个氨基酸变异位点。应加强对CV A6的持续监测及基因特征分析,为有效防控手足口病提供科学依据。 展开更多
关键词 手足口 柯萨奇病毒A6型 vp1基因 基因特征
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EV71vp1线性mRNA转录载体的构建
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作者 马明鑫 赵霞 +5 位作者 曹小花 郑亮 Matthew Kay 吴志军 许晓娟 张华 《中国病原生物学杂志》 北大核心 2025年第11期1389-1392,共4页
目的 针对肠道病毒71型(EV71)的VP1蛋白构建线性mRNA转录载体,并进行细胞转染验证VP1蛋白表达,为开发手足口病mRNA疫苗提供技术支撑。方法 应用PCR技术获得vp1基因,在其上游和下游分别引入5'UTR、3'UTR和poly(A)尾,通过基因克... 目的 针对肠道病毒71型(EV71)的VP1蛋白构建线性mRNA转录载体,并进行细胞转染验证VP1蛋白表达,为开发手足口病mRNA疫苗提供技术支撑。方法 应用PCR技术获得vp1基因,在其上游和下游分别引入5'UTR、3'UTR和poly(A)尾,通过基因克隆技术构建出EV71 vp1线性mRNA转录载体pcDNA3.1-EV71-VP1。在PCR、酶切和测序鉴定转录载体后,体外转录出修饰的vp1 mRNA。将转录载体和vp1 mRNA转染HeLa细胞,采用Western blot和免疫荧光验证VP1蛋白的表达。结果 转录载体通过PCR扩增和双酶切都可得到891 bp的vp1基因和1 448 bp的基因片段,与预期相符。体外转录出的vp1 mRNA大小约1 448 bp,与理论值相符。转录载体和vp1 mRNA转染HeLa细胞后,Western blot可检测到38 ku大小的特异性条带,免疫荧光试验也检测到VP1蛋白的正确表达。结论 成功构建了EV71 vp1线性mRNA转录载体,为其免疫学评价奠定了基础。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 vp1蛋白 转录载体 蛋白表达 mRNA疫苗
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口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 张芳源 杜文琪 +2 位作者 杨大为 李桂梅 单虎 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期82-90,共9页
为建立口蹄疫病毒(FMDV)快速、高效的血清学检测方法,根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(GenBank登录号:JN998085.1),构建重组质粒pCold TF-VP1,通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达和反应... 为建立口蹄疫病毒(FMDV)快速、高效的血清学检测方法,根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(GenBank登录号:JN998085.1),构建重组质粒pCold TF-VP1,通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达和反应原性后,将纯化后的蛋白作为抗原,建立FMDV抗体间接ELISA方法。结果显示,重组质粒成功转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,并以可溶性蛋白形式表达。建立的FMDV抗体间接ELISA方法其抗原包被最佳浓度0.5μg/mL,使用1%BSA溶液封闭效果最佳,血清最佳稀释度1∶600,酶标二抗最佳工作浓度1∶8000,且具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与商品化试剂盒比较,符合率为90.2%。本试验在大肠杆菌中成功表达并纯化了FMDV的VP1蛋白,并建立了FMDV抗体间接ELISA方法,为口蹄疫的监测、诊断及试剂盒的开发提供了参考。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1蛋白 原核表达 间接ELISA
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西双版纳流行柯萨奇病毒A16型B1基因亚型VP1区基因序列分析
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作者 李富雨 王家军 +10 位作者 冷珺 李柳醒 黄洁 张俊玫 周艳 李章 余俊 郑亚雄 於倩 王佳丽 王静林 《中国热带医学》 北大核心 2025年第9期1174-1180,共7页
目的了解云南省西双版纳边境地区柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus A16,CVA16)分子特征与国内外流行毒株的进化关系,为西双版纳地区CVA16感染防治及分子溯源提供科学依据。方法2024年12月在西双版纳州景洪市第一人民医院采集临床诊断为... 目的了解云南省西双版纳边境地区柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus A16,CVA16)分子特征与国内外流行毒株的进化关系,为西双版纳地区CVA16感染防治及分子溯源提供科学依据。方法2024年12月在西双版纳州景洪市第一人民医院采集临床诊断为疑似手足口病儿童的咽拭子样本,提取病毒核酸,采用巢式RT-PCR扩增病毒VP1区基因序列,使用MEGA 7.0等生物信息学软件进行序列分析。结果共采集到36份疑似手足口病儿童的咽拭子样本;CVA16-VP1特异引物扩增3份阳性(样本编号:3/JH-YN/2025、5/JH-YN/2025、6/JH-YN/2025),CVA16检出率为8.33%。序列分析结果显示,本研究获得3条序列与2022—2023年中国江西省流行的B1a基因亚型CVA16位于同一进化分支内,核苷酸同源性均在89%以上,氨基酸同源性均在92%以上;而其他基因亚型CVA16病毒位于不同进化分支内,核苷酸同源性低于89%,氨基酸同源性低于90%,提示本次景洪市12月份流行的手足口病病毒以CVA16 B1a基因亚型为主要流行基因亚型病毒;氨基酸位点分析发现,景洪市3株阳性株符合当前新型B1a基因VP1-164K/251I流行模式,16个易突变位点中有4个发生突变。第145位氨基酸未发生突变,符合E145V。第252、261位产生个体株特异性位点突变,3株阳性株第266位均出现特异性位点突变。结论2024年12月西双版纳州景洪市存在CVA16-B1a流行基因亚型流行,本次流行毒株与近年来在云南其他地区和江西流行的毒株密切相关。研究结果为该地区手足口病的诊断及预防提供科学依据。 展开更多
关键词 手足口病 柯萨奇病毒A16型 vp1基因 序列分析
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表达猫杯状病毒VP1蛋白的重组猫疱疹病毒的构建与鉴定
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作者 艾丽思 焦翠翠 +4 位作者 金宏丽 黄培 张海丽 李媛媛 王化磊 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第8期1624-1631,1641,共9页
以猫疱疹病毒Ⅰ型(feline herpesvirus 1,FHV-1)为载体,采用CRISPR/Cas9技术和同源重组技术将FHV-1的gI和gE基因替换为猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)VP1基因和红色荧光蛋白(mCherry)基因,拯救获得重组病毒FHVΔgI&gE/VP1-mChe... 以猫疱疹病毒Ⅰ型(feline herpesvirus 1,FHV-1)为载体,采用CRISPR/Cas9技术和同源重组技术将FHV-1的gI和gE基因替换为猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)VP1基因和红色荧光蛋白(mCherry)基因,拯救获得重组病毒FHVΔgI&gE/VP1-mCherry+,经空斑纯化重组病毒;利用间接免疫荧光试验、空斑形态学分析及PCR鉴定分析重组病毒的生物学特性和遗传稳定性。间接免疫荧光鉴定结果显示,重组病毒FHVΔgI&gE/VP1-mCherry+能够在F81细胞中表达VP1蛋白,且重组病毒的生长特性与亲本病毒FHV-1无明显差异;空斑形态观察及染色结果显示,重组病毒形成的空斑面积小于亲本病毒,表明缺失gI、gE基因后重组病毒在细胞间扩散能力降低;PCR鉴定结果显示,重组病毒连续传代15代仍能检测到VP1基因,表明重组病毒具有良好的遗传稳定性。结果表明,成功构建了表达FCV VP1蛋白的重组猫疱疹病毒,为FCV、FHV-1二联基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 猫疱疹病毒Ⅰ型 猫杯状病毒vp1蛋白 重组猫疱疹病毒 生物学特性
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柯萨奇病毒A组6型VP1的主要特性及表位预测分析
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作者 刘益文 张晓雯 +6 位作者 高邦婷 项钦戈 张晨阳 左成 杨欢 汪大巍 张高博 《生物信息学》 2025年第1期50-60,共11页
运用生物信息学方法预测分析襄阳地区分离的柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6, CV-A6)病毒蛋白(Viral protein, VP)中VP1的主要特性及表位。应用ProtParam, SOPMA,Phyre 2,DNAstar v8.1.3,Mega11,ABCpred, ElliPro, NetMHCpan-4.1,Ne... 运用生物信息学方法预测分析襄阳地区分离的柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6, CV-A6)病毒蛋白(Viral protein, VP)中VP1的主要特性及表位。应用ProtParam, SOPMA,Phyre 2,DNAstar v8.1.3,Mega11,ABCpred, ElliPro, NetMHCpan-4.1,NetMHCIIpan-4.0等软件和在线网站预测分析CV-A6 VP1包括理化性质、结构特征、序列特点,亲缘关系在内的主要特性及B,T细胞抗原表位。结果发现该分离株VP1为碱性、不稳定的亲水性蛋白,其二级结构以无规则卷曲为主,核苷酸(氨基酸)同源性不一,有12个氨基酸突变位点,属于D3a亚型。该蛋白还存在多个潜在及优势B,T细胞抗原表位。CV-A6襄阳分离株与国内广西、广东地区CV-A6共进化共循环,具有一定的免疫潜能,可为分子流行病学监测以及多价疫苗的研制提供科学依据与参考。 展开更多
关键词 CV-A6 vp1 生物信息学 主要特性 表位
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埃可病毒18型衣壳蛋白VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备
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作者 李飞 李奇 +4 位作者 付艺亮 黄陆慈 张瀚文 陈祥鹏 谢正德 《中国生物制品学杂志》 2025年第3期297-301,共5页
目的原核表达埃可病毒18型(echovirus 18,E18)衣壳蛋白VP1(E18-VP1),并制备其多克隆抗体,以期为E18的免疫学检测及相关试剂盒的开发奠定基础。方法将E18-254 VP1基因克隆至载体pET30a,构建重组质粒pET30a-E18-254 VP1,转化感受态E.coli ... 目的原核表达埃可病毒18型(echovirus 18,E18)衣壳蛋白VP1(E18-VP1),并制备其多克隆抗体,以期为E18的免疫学检测及相关试剂盒的开发奠定基础。方法将E18-254 VP1基因克隆至载体pET30a,构建重组质粒pET30a-E18-254 VP1,转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,获得重组蛋白E18-VP1,并通过镍离子金属螯合层析纯化。用纯化蛋白分别免疫1只雌性新西兰大白兔及5只雌性BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,并采用间接ELISA法测定抗体效价,Western blot法及间接免疫荧光方法检测抗体特异性。结果重组蛋白E18-VP1经纯化后纯度>95%。兔及小鼠抗E18-VP1多克隆抗体效价分别为1∶1280000和1∶640000,且具有较强特异性。结论原核表达了重组蛋白E18-VP1,且纯度较高,并获得了具有较高效价及特异性的多克隆抗体。 展开更多
关键词 埃可病毒18型 衣壳蛋白vp1 原核表达 多克隆抗体
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2014-2021年甘肃省柯萨奇病毒A10型VP1区基因特征分析 被引量：1
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作者 陈建华 武海卓 +3 位作者 赵哲 徐丛杉 李保娣 董茂星 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1179-1184,共6页
目的了解2014—2021年甘肃省柯萨奇病毒A10(Cox A10)的VP1区基因特征及分子流行病学特征。方法对甘肃省59条Cox A10的VP1区序列,使用MEGA11等生物信息分析软件,对这些病毒序列的核苷酸和氨基酸相似度进行了统计分析,并构建了VP1区序列... 目的了解2014—2021年甘肃省柯萨奇病毒A10(Cox A10)的VP1区基因特征及分子流行病学特征。方法对甘肃省59条Cox A10的VP1区序列,使用MEGA11等生物信息分析软件,对这些病毒序列的核苷酸和氨基酸相似度进行了统计分析,并构建了VP1区序列的系统发育树。结果2014—2021年甘肃省流行的Cox A10均为C基因型,分属于C1和C2两个亚型,在亚型中又可划分为7个不同分支,在VP1区表现出9种特征性的氨基酸突变。结论2014—2021年甘肃省Cox A10出现多个流行变异株。因此,加强Cox A10的监测工作,研究其基因变异与临床表现之间的关系显得尤为重要,此外,通过VP1区的分子进化和氨基酸突变分析,可以有效追溯流行株并进行精确分类,为传统流行病学调查提供有力补充。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A10 疱疹性咽峡炎 手足口病 vp1区 基因特征 氨基酸突变 分子流行病学
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禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立与临床应用
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作者 吕转平 苏晓月 +2 位作者 唐思静 王艳萍 张多明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期887-892,共6页
为建立1种禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus, AEV)抗体检测方法,试验对AEV VP1蛋白进行截短表达,以表达蛋白为包被抗原建立检测AEV抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组VP1蛋白以包涵体形式表达,大小为34 kDa;可与AEV阳性... 为建立1种禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus, AEV)抗体检测方法,试验对AEV VP1蛋白进行截短表达,以表达蛋白为包被抗原建立检测AEV抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组VP1蛋白以包涵体形式表达,大小为34 kDa;可与AEV阳性血清发生特异性反应;以VP1蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测ALV、IBDV、IBV、ILTV、NDV、AIV-H9阳性血清均为阴性;检测AEV抗体的最低检出效价为1∶51 200;与IDEXX试剂盒的符合率为95.24%;检测新疆地区1 127份AEV疫苗免疫鸡血清样品和879份未免疫鸡血清样品的免疫抗体阳性率和感染抗体阳性率分别为88.91%和8.19%。结果表明,建立的间接ELISA方法特异、敏感、准确,可用于临床中免疫抗体和野毒感染抗体的检测和筛查。 展开更多
关键词 禽脑脊髓炎病毒 vp1蛋白 间接ELISA 临床应用
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鸡群中鸡传染性贫血病原与抗体检测及分离株VP1基因序列分析 被引量：3
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作者 冯笑艳 胡明雪 +10 位作者 林雨萌 刘长军 李凯 祁小乐 崔红玉 高立 王素艳 陈运通 王笑梅 张艳萍 高玉龙 《中国家禽》 北大核心 2024年第2期52-58,共7页
为了解鸡群中鸡传染性贫血病毒(CAV)感染及抗体产生情况,从黑龙江省两个无临床症状鸡群(B群和S群)中,分别采集血清通过ELISA方法进行抗体检测,采集抗凝血并分离淋巴细胞,针对基因组保守序列设计引物,通过PCR方法进行病原检测,并对从B群... 为了解鸡群中鸡传染性贫血病毒(CAV)感染及抗体产生情况,从黑龙江省两个无临床症状鸡群(B群和S群)中,分别采集血清通过ELISA方法进行抗体检测,采集抗凝血并分离淋巴细胞,针对基因组保守序列设计引物,通过PCR方法进行病原检测,并对从B群病原阳性鸡分离到的分离株进行VP1基因序列分析。结果显示,B群和S群CAV抗体阳性率分别为62.7%(79/126)和68.2%(88/129),病原阳性率分别为43.0%(49/114)和62.3%(48/77),其中,B群和S群中抗体和病原双阴性的鸡分别为23.7%(27/114)和15.6%(12/77),而抗体和病原双阳性的鸡分别高达28.1%(32/114)和46.8%(36/77);在双阳性鸡中,B群和S群分别有62.5%(20/32)和58.3%(21/36)抗体滴度在1.0×10^(4)及以上,从B群病原阳性鸡全血中分离到一株CAV(HLJ/2022株),分离株HLJ/2022第394位氨基酸为谷氨酰胺,具有强毒的分子特征;两个鸡群的环境拭子CAV阳性率为10.0%(3/30),存在于消毒前的鸡蛋表面、更衣处和鞋底。研究表明,检测鸡群的CAV抗体阳性率在62.7%以上,病原阳性率在43.0%以上,抗体滴度在1.0×104及以上CAV仍可存在,CAV流行株(HLJ/2022)具有强毒分子特征,鸡群环境中存在CAV污染,结果为CIA防控提供重要的参考意见。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 血清学检测 病原学检测 病毒分离鉴定 vp1基因序列分析
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2020-2021年上海市某哨点医院疱疹性咽峡炎流行特征及相关肠道病毒VP1基因特征分析 被引量：5
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作者 李润 刘嘉婧 +5 位作者 吴文成 张靖翊 崔晓青 袁芳 滕峥 王嘉瑜 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期439-445,共7页
目的分析2020—2021年上海市某哨点医院疱疹性咽峡炎(HA)标本病例信息的流行病学及主要病原体VP1基因特征,为HA防控提供参考依据。方法采集2020—2021年上海市某哨点医院HA病例标本及信息进行描述性统计分析;采用实时荧光定量聚合酶链... 目的分析2020—2021年上海市某哨点医院疱疹性咽峡炎(HA)标本病例信息的流行病学及主要病原体VP1基因特征,为HA防控提供参考依据。方法采集2020—2021年上海市某哨点医院HA病例标本及信息进行描述性统计分析;采用实时荧光定量聚合酶链式反应开展肠道病毒血清型鉴定,对阳性标本进行病毒分离、VP1基因测序及基因进化、核苷酸及氨基酸同源性分析。结果155例HA标本中肠道病毒阳性病例95例,3~6岁学龄前儿童发病率最高,占确诊病例的57.90%。柯萨奇病毒(Cox)A组6型、Cox A4分别为2020和2021年引起HA的主要优势血清型,检出率分别为33.70%、29.50%,未发现肠道病毒(EV)71型、Cox A5等其他肠道病毒血清型感染病例。基于VP1基因区段,Cox A4、Cox A6、EV71、Cox A10和Cox A16基因型分别为C2 Cluster1、D3、C4a、C、B1b,自HA标本中分离的毒株与我国主要流行株的核苷酸同源性分别为92.60%~96.10%、89.70%~97.00%、92.00%~94.60%、90.70%~97.00%和92.20%~93.70%,氨基酸同源性分别为92.90%~96.20%、97.20%~99.70%、98.30%~99.30%、91.10%~97.10%和96.00%~97.10%。结论2020—2021年上海市某哨点医院HA易感人群以3~6岁学龄前儿童为主;Cox A6、Cox A4是HA的主要血清型;2021年,Cox A4成为引起HA最主要的血清型;所分离肠道病毒与我国优势流行株具有较高同源性。持续开展HA病原谱变化和病毒基因组特征监测对了解病毒传播及防控策略的制定具有参考意义。 展开更多
关键词 疱疹性咽峡炎 肠道病毒 vp1基因特征 柯萨奇病毒A组4型 柯萨奇病毒A组6型
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