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O型口蹄疫病毒VLPs疫苗抗体竞争ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 刘玲 戴伶俐 +7 位作者 李晓艳 付玲芳 康斌 董鹏 武玉梅 尹忠良 吴蒙 李雪峰 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第6期60-66,共7页
为实现对口蹄疫病毒(FMDV)类病毒颗粒(VLPs)疫苗免疫效果的有效评估,建立一种O型FMDV VLPs疫苗抗体竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法。本试验以O型FMDV VLPs作为免疫原免疫小鼠制备单克隆抗体,通过O型FMDV VLPs和O型FMDV灭活疫苗抗... 为实现对口蹄疫病毒(FMDV)类病毒颗粒(VLPs)疫苗免疫效果的有效评估,建立一种O型FMDV VLPs疫苗抗体竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法。本试验以O型FMDV VLPs作为免疫原免疫小鼠制备单克隆抗体,通过O型FMDV VLPs和O型FMDV灭活疫苗抗原筛选,ELISA四参数拟合曲线判定,确定最佳单抗。将O型FMDV VLPs作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记特异性单抗与被检血清竞争结合,通过优化确定O型FMDV VLPs最佳包被浓度、HRP标记特异性单抗最佳工作浓度和最适封闭液,经计算确定判定标准,并进一步分析该竞争ELISA方法的敏感性和特异性;采用建立的方法检测90份O型FMDV VLPs疫苗免疫猪血清样品,验证其实用性。结果显示,O型FMDV VLPs特异性单抗为1D3单抗,该竞争ELISA检测方法的最佳工作条件为:O型FMDV VLPs最佳包被浓度为0.2μg/mL,HRP标记1D3单抗最佳工作浓度为1∶1000,最适封闭液为1%明胶。竞争ELISA判定标准为:被检血清阻断率≥40%,判为阳性;被检血清阻断率≤32%,判为阴性;被检血清阻断率介于32%~40%,则应在14 d后对动物进行重新检测。敏感性和特异性试验结果显示,建立方法的最低检测限为血清效价1∶1000,仅有O型FMDV VLPs疫苗免疫阳性血清能发生竞争性结合,O型和A型FMDV灭活疫苗免疫猪阳性血清无竞争性结合。90份O型FMDV VLPs疫苗免疫猪血清样品的阻断率结果符合体液免疫应答的一般规律,证明该方法可以有效评估O型FMDV VLPs疫苗免疫后血清抗体水平。本试验建立的FMDV VLPs疫苗抗体竞争ELISA检测方法可为开发更多VLPs疫苗检测技术提供技术支撑。 展开更多
关键词 O型口蹄疫 类病毒颗粒(vlps) 竞争ELISA
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铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响 被引量:2
2
作者 邓中华 段招军 +3 位作者 谢志萍 谢乐云 张兵 曹友德 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期56-58,64,共4页
目的:探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。方法:BABL/c小鼠随机分为VLPs实验组、明矾佐剂实验组、PBS对照组和明矾佐剂对照组。实验组小鼠分别采用HBoV1 VP2 VLPs和HBoV1 VP2 VLPs加明矾佐剂肌肉注射免疫,对照组小鼠同... 目的:探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。方法:BABL/c小鼠随机分为VLPs实验组、明矾佐剂实验组、PBS对照组和明矾佐剂对照组。实验组小鼠分别采用HBoV1 VP2 VLPs和HBoV1 VP2 VLPs加明矾佐剂肌肉注射免疫,对照组小鼠同期注射等量明矾佐剂或PBS缓冲液;实验8周后ELISA检测两实验组特异性Ig G抗体效价和活性,ELIspot检测两实验组特异性细胞免疫反应强度,从细胞免疫和体液免疫强度探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。结果:明矾佐剂降低HBoV1 VP2 VLPs诱导细胞免疫反应强度(P<0.001),增强HBoV1 VP2 VLPs诱导的血清Ig G效价(P<0.01)和Ig G活性(P<0.05)。结论:明矾佐剂使HBoV1 VP2 VLPs诱导的体液免疫反应增强而细胞免疫反应减弱。HBoV1 VP2 VLPs作为预防性疫苗使用时应添加明矾佐剂,作为治疗性疫苗使用时应不加明矾佐剂。 展开更多
关键词 铝佐剂 人博卡病毒1(HBoV1) 病毒蛋白2(VP2) 病毒样颗粒(vlps)
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RHDV VLPs单克隆抗体的制备及其识别表位的初步定位 被引量:1
3
作者 宋艳华 胡波 +5 位作者 范志宇 彭伟 魏后军 薛家宾 徐为中 王芳 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期65-70,共6页
为了筛选兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)的特异性单抗,并进一步分析单抗识别表位的分布情况,将重组杆状病毒r Ac V-Bac-VP60接种Sf9昆虫细胞,收获细胞培养物,电镜观察显示重组VP60蛋白获得有效表达,并可组装成病毒样粒子(VLPs)。将RH... 为了筛选兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)的特异性单抗,并进一步分析单抗识别表位的分布情况,将重组杆状病毒r Ac V-Bac-VP60接种Sf9昆虫细胞,收获细胞培养物,电镜观察显示重组VP60蛋白获得有效表达,并可组装成病毒样粒子(VLPs)。将RHDV VLPs作为免疫原与等量弗氏佐剂乳化,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次亚克隆后,获得11株能稳定分泌抗RHDV VLPs抗体的阳性杂交瘤细胞株。间接ELISA、IFA和Western Blot鉴定结果表明,这11株单克隆抗体均能够特异地识别RHDV VLPs和天然RHDV。11株单抗均为Ig G1,其中1D4和3F7的轻链为Lambda型,其余均为Kappa型。截短表达结果显示,单抗5A3针对RHDV VP60的NTA区,5F3针对RHDV VP60的S区,单抗1B8、1D4、3D11、3F7、4C2、4G2、5G2、5H3和6B2针对RHDV VP60的P区。研究为RHDV VLPs抗原表位的鉴定和RHDV结构功能的研究奠定了基础,同时为RHDV的检测和新型疫苗研究提供物质基础。 展开更多
关键词 RHDV vlps 单克隆抗体 表位 初步定位
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Her2/ECD-sf162/TM嵌合VLPs的制备及抗肿瘤免疫效果研究 被引量:1
4
作者 龙敏 董柯 +3 位作者 王希 林芳 刘冲 张惠中 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第21期3355-3359,共5页
目的:成功制备Her2胞外段基因与猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)包膜蛋白sf162跨膜区基因融合的Her2/ECD-sf162/TM病毒样颗粒(VLPs),并在小鼠体内进行初步的抗肿瘤免疫效果研究。方法:利用前期构建好的Her2/neu与SIV... 目的:成功制备Her2胞外段基因与猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)包膜蛋白sf162跨膜区基因融合的Her2/ECD-sf162/TM病毒样颗粒(VLPs),并在小鼠体内进行初步的抗肿瘤免疫效果研究。方法:利用前期构建好的Her2/neu与SIV-gag嵌合的表达载体Her2/ECD-sf162/TM,制备Her2/neu与SIV-gag嵌合型VLPs疫苗,并用该疫苗免疫小鼠。结果:VLPs可成功激发小鼠体内免疫应答反应,产生血清抗VLPs的抗体;VLP免疫后接种Her2/neu+小鼠乳腺癌细胞EMT6,结果显示该疫苗可有效抑制肿瘤生长;同时,VLP对荷瘤鼠治疗结果也显示,该疫苗可在一定程度上抑制肿瘤生长。结论:VLPs疫苗具有良好的免疫原性,且免疫后对肿瘤攻击具有保护作用。 展开更多
关键词 HER2/NEU 肿瘤疫苗 vlps 免疫
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基于PAT的PCV2 VLPs生产过程优化与控制研究 被引量:2
5
作者 化磊召 易小萍 +2 位作者 储炬 庄英萍 张嗣良 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期50-58,共9页
昆虫细胞-杆状病毒载体表达系统(baculovirus expression vector system,BEVS)是病毒样颗粒亚单位疫苗(virus like particles,VLPs)的理想生产平台。动物细胞培养过程分析技术(process analytical technology,PAT)研究的重点在于... 昆虫细胞-杆状病毒载体表达系统(baculovirus expression vector system,BEVS)是病毒样颗粒亚单位疫苗(virus like particles,VLPs)的理想生产平台。动物细胞培养过程分析技术(process analytical technology,PAT)研究的重点在于更多地获取与细胞生理状态相关的过程参数,以及实现过程敏感参数的在线表征和过程控制关键时间节点的在线判定,从而指导过程优化和控制。通过昆虫Sf9细胞的分批和补料悬浮培养,发现细胞代谢活性与在线特征频率(fc)之间存在相关性。以fc作为细胞代谢活性的在线指征,在细胞代谢活性下降之前补料,使得Sf9细胞在代谢活性明显增强的基础上,最高活细胞密度提高1.75倍。通过分批培养与补料分批培养过程细胞生理特性参数的相关性分析,发现比电容增长速率(με)与培养体系S-期细胞比例之间存在相关性,με作为细胞增殖活性状态的在线指征参数,可以作为最佳接毒时间的判定依据。此外,研究还发现在线检测参数电容(ε)与最高疫苗产量之间存在相关性,可以作为疫苗最佳收获时间的在线表征参数。以在线fc值作为补料时间指征,以在线με值作为病毒感染时间指征,以在线ε值作为病毒收获时间指征,实现了猪圆环病毒2型(PCV2)VLPs的高效生产。相比于批培养,基于PAT的生产工艺疫苗单位体积产量提高76%,生产周期缩短了24h,为PCV2病毒样颗粒亚单位疫苗大规模生产提供了一种新的高效生产模式。 展开更多
关键词 vlps 昆虫细胞-杆状病毒载体表达系统 PAT
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BVDV-1 VLPs的构建及免疫原性研究 被引量:2
6
作者 杨霞 李雅茹 +11 位作者 丛佳南 李一权 李善智 韩继成 房金波 白冰 宋高杰 修智儒 程成 葛晨晨 孙福亮 朱羿龙 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第1期43-48,共6页
目的利用C、E0、E1和E2蛋白构建BVDV病毒样颗粒,并评价BVDV-1 VLPs的免疫原性。方法以BVDV-BA株为模板通过反转录得到C、E0、E1和E2基因,再将C、E0、E1和E2基因分别克隆至PEASY-Blunt Simple克隆载体上。提取质粒摇菌扩大培养,将得到的C... 目的利用C、E0、E1和E2蛋白构建BVDV病毒样颗粒,并评价BVDV-1 VLPs的免疫原性。方法以BVDV-BA株为模板通过反转录得到C、E0、E1和E2基因,再将C、E0、E1和E2基因分别克隆至PEASY-Blunt Simple克隆载体上。提取质粒摇菌扩大培养,将得到的C、E0、E1和E2基因克隆至杆状病毒穿梭载体pFast Bac HTA中,采用热激法将重组穿梭质粒转化至DH10.Bac大肠埃希菌感受态细胞,通过蓝白斑筛选技术获得重组杆粒rB-C、rB-E0、rB-E1和rB-E2。将重组杆粒转染至SF9细胞,获得重组杆状病毒;再用构建的4种重组杆状病毒同时感染SF9悬浮细胞,72 h后收集细胞沉淀进行超声破碎,利用蔗糖垫超速离心和蔗糖密度梯度离心进行纯化,通过Western blot和透射电镜进行鉴定。将获得的BVDV-1 VLPs联合氢氧化铝佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体水平评价VLPs的免疫原性。结果成功克隆出C、E0、E1和E2基因,并构建C、E0、E1和E2蛋白的杆状病毒。通过纯化和鉴定,在20%~30%蔗糖层获得由C、E0、E1和E2蛋白组成结构完整的病毒样颗粒BVDV-1 VLPs。BVDV-1 VLPs能够显著增加免疫小鼠的特异性抗体表达水平。结论构建并获得了由C、E0、E1和E2蛋白组成,并具备良好免疫原性的病毒样颗粒BVDV-1 VLPs。 展开更多
关键词 VLP C、E0、E1和E2蛋白 BVDV-1 vlps 免疫原性
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动物RNA病毒VLPs疫苗的研究进展 被引量:1
7
作者 郭春红 李金斗 +1 位作者 丁佳欣 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2561-2568,2577,共9页
RNA病毒引发了众多的人类、动物重大疫病和公共卫生事件,然而目前尚无针对RNA病毒的特效药物,开发安全且有效的疫苗是控制RNA病毒感染的最有效手段,新型疫苗研发和使用已经是第3次疫苗革命的主题。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs... RNA病毒引发了众多的人类、动物重大疫病和公共卫生事件,然而目前尚无针对RNA病毒的特效药物,开发安全且有效的疫苗是控制RNA病毒感染的最有效手段,新型疫苗研发和使用已经是第3次疫苗革命的主题。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是病毒的一种或几种结构蛋白构成的纳米级空心颗粒,不含有感染性遗传物质,无法自我复制,具有较高安全性。另外,VLPs形态结构与天然病毒粒子类似,保留了天然病毒粒子的空间构象,易被宿主免疫系统有效的识别、摄取和递呈,进而高效地诱导T细胞和B细胞的免疫反应,是近年来新型疫苗领域中的研究热点。现对RNA病毒结构与功能、VLPs疫苗的分类、包装与嵌入、表达系统及载体动能、免疫原性评价、蛋白定量及纯化等方面进行综述。 展开更多
关键词 RNA病毒 病毒样颗粒(vlps) 表达系统 免疫原性 定量方法
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口服重组HEV VLPs的保护作用
8
作者 陈金元 陈锦荣 《生物制品快讯》 2004年第8期16-17,共2页
关键词 口服重组HEV vlps 保护作用 戊型肝炎病毒 疫苗 开发
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SIV的VLPs鼻内免疫
9
作者 YaoQ. 陈锦荣 江丽君 《生物制品快讯》 2003年第7期9-9,共1页
关键词 SIV vlps 鼻内免疫 猴免疫缺陷病毒 免疫应答
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脑心肌炎病毒样颗粒疫苗的制备及免疫保护效果评价
10
作者 张艳芳 朱琼 +5 位作者 付杰 方耀辉 靳佳音 张丹娜 邓菲 曹胜波 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第5期994-1001,共8页
脑心肌炎是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的一种以脑炎、心肌炎为主要临床特征的人畜共患传染病。为探索有效的预防措施,本研究利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,将EMCV的P12A和3C基因插入到pFastBacDual穿梭载体... 脑心肌炎是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的一种以脑炎、心肌炎为主要临床特征的人畜共患传染病。为探索有效的预防措施,本研究利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,将EMCV的P12A和3C基因插入到pFastBacDual穿梭载体中,构建重组杆状病毒Ac-P12A-3C,并大量表达和纯化了EMCV病毒样颗粒(EMCV-VLPs),透射电镜观察显示,EMCV-VLPs能正确组装约30 nm的病毒样颗粒。小鼠免疫和攻毒试验表明,该病毒样颗粒免疫可有效抵抗EMCV的攻击,保护率高达100%。组织病理切片结果显示,与PBS攻毒组相比,VLP免疫组的组织病理损伤显著减轻,且组织中的病毒载量也明显降低。仔猪免疫试验结果显示,该病毒样颗粒可以诱导仔猪产生良好的体液免疫反应,二免后中和抗体滴度可达1∶320~1∶640,且免疫过程中未观察到明显的副反应。本研究初步验证了病毒样颗粒疫苗的免疫原性和安全性,为研制基于EMCV-VLPs的亚单位疫苗奠定了基础,并为脑心肌炎的防控提供了新的策略。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒(EMCV) 病毒样颗粒(vlps) 免疫原性 体液免疫 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 中和抗体 亚单位疫苗
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CTAB对口蹄疫病毒样颗粒纯化及组装的影响
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作者 刘潇 蔺晓忠 +9 位作者 严欢 李敏 李仙月 朱映新 杨雪 何清 钟丽君 余谦 田丽梅 杜平 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第2期197-202,共6页
为确定十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)对大肠杆菌发酵菌泥重悬液的澄清效果及口蹄疫病毒样颗粒(foot-and-mouth disease virus-like particles,FMD VLPs)组装的影响,通过在破碎后的FMDV结构蛋白大肠杆菌... 为确定十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)对大肠杆菌发酵菌泥重悬液的澄清效果及口蹄疫病毒样颗粒(foot-and-mouth disease virus-like particles,FMD VLPs)组装的影响,通过在破碎后的FMDV结构蛋白大肠杆菌发酵重悬液中加入CTAB,用核酸电泳和鲎试剂显色法分别检测DNA及内毒素含量的变化,确定CTAB对发酵菌泥重悬液的澄清效果,然后经His亲和层析凝胶法纯化目标蛋白,并将纯化蛋白在无细胞体系内组装成FMD VLPs,利用蔗糖密度梯度超速离心结合高效液相分析法对FMD VLPs进行定量分析。结果表明,加入CTAB,均质离心后上清中宿主DNA含量明显减少(P<0.01),纯化后收获目的蛋白浓度未出现明显变化(P>0.05),但收获蛋白的内毒素含量明显上升(P<0.01),重悬液上清及纯化蛋白Zeta电位绝对值明显降低(P<0.05),且FMD VLPs的组装量显著减少(P<0.05)。CTAB在一定盐浓度溶液中能够沉淀DNA,利于宿主DNA的去除,但同时会改变目标蛋白的带电属性,增强目标蛋白与内毒素的结合,并降低组装体系的稳定性,致使FMD VLPs的组装率显著下降。 展开更多
关键词 CTAB FMDV结构蛋白 DNA 内毒素 vlps
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A Review on Vision-Language-Based Approaches: Challenges and Applications
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作者 Huu-Tuong Ho Luong Vuong Nguyen +4 位作者 Minh-Tien Pham Quang-Huy Pham Quang-Duong Tran Duong Nguyen Minh Huy Tri-Hai Nguyen 《Computers, Materials & Continua》 2025年第2期1733-1756,共24页
In multimodal learning, Vision-Language Models (VLMs) have become a critical research focus, enabling the integration of textual and visual data. These models have shown significant promise across various natural lang... In multimodal learning, Vision-Language Models (VLMs) have become a critical research focus, enabling the integration of textual and visual data. These models have shown significant promise across various natural language processing tasks, such as visual question answering and computer vision applications, including image captioning and image-text retrieval, highlighting their adaptability for complex, multimodal datasets. In this work, we review the landscape of Bootstrapping Language-Image Pre-training (BLIP) and other VLM techniques. A comparative analysis is conducted to assess VLMs’ strengths, limitations, and applicability across tasks while examining challenges such as scalability, data quality, and fine-tuning complexities. The work concludes by outlining potential future directions in VLM research, focusing on enhancing model interpretability, addressing ethical implications, and advancing multimodal integration in real-world applications. 展开更多
关键词 Bootstrapping language-image pre-training(BLIP) multimodal learning vision-language model(VLM) vision-language pre-training(VLP)
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猪细小病毒病研究进展 被引量:10
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作者 刘运超 陈玉梅 +3 位作者 杨苏珍 魏蔷 郝慧芳 柴书军 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期107-110,共4页
猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是一种无囊膜DNA病毒,主要引起母猪繁殖障碍。该病毒在全世界广泛流行,我国猪场PPV感染率高达90%以上,给养猪业带来巨大经济损失。PPV经口、鼻传播,主要侵染猪的生殖器官,引起母猪的死胎、木乃伊胎... 猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是一种无囊膜DNA病毒,主要引起母猪繁殖障碍。该病毒在全世界广泛流行,我国猪场PPV感染率高达90%以上,给养猪业带来巨大经济损失。PPV经口、鼻传播,主要侵染猪的生殖器官,引起母猪的死胎、木乃伊胎和公猪的精液质量下降。临床采用接种疫苗的方式进行防控,起到了一定的效果。论文对病毒的基因组和蛋白特征、流行病学和疫苗研究进行综述,以期为PPV的基础研究和疫苗开发提供参考。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VLP组装 病毒抗原表位 VP2蛋白
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密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析 被引量:2
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作者 于吉锋 谢晶 +8 位作者 黄勇 肖璐 林毅 曹冶 叶勇刚 魏勇 吴学婧 李江凌 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期668-677,共10页
[目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据... [目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据昆虫细胞的密码子偏好性优化合成RHDV2 VP60全基因,将双VP60基因插入真核载体pFastBacTMDual,转化携带Bacmid质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,构建含双VP60基因的重组杆粒Bacmid-VP60-VP60,转染Sf9昆虫细胞,通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)及透射电镜对重组杆状病毒Bacmid-VP60-VP60进行表达验证;将优化策略制备的重组蛋白抗原与氢氧化铝佐剂按照9∶1比例制备VLP灭活疫苗,通过安全性检验、最小免疫剂量、免疫持续期等评估优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗的保护效果。[结果]试验成功构建重组杆粒Bacmid-VP60-VP60。Western blotting鉴定结果显示,重组杆状病毒转染Sf9细胞表达出大小约60 ku的RHDV2 VP60蛋白。IFA鉴定结果显示,感染重组杆状病毒的Sf9细胞产生了大量的黄绿色荧光,表明重组杆状病毒在Sf9细胞中大量表达VP60蛋白。透射电镜观察结果显示,VP60蛋白折叠成VLP,大小为40 nm左右,呈现球形结构,表面光滑。优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫原性,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫持续期可达210 d以上。[结论]试验构建了含有密码子优化的双VP60基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中成功表达RHDV2 VP60蛋白,该蛋白制备的VLP疫苗对家兔具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 兔出血症病毒2型(RHDV2) 病毒样颗粒(VLP) 密码子偏好性 重组杆状病毒 免疫原性
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病毒样颗粒疫苗研究进展 被引量:1
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作者 赵尉吏 吕娜 +4 位作者 李会强 何亚辉 李露露 梁明丽 李岩异 《生物技术进展》 2024年第5期776-784,共9页
病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是含有某种病毒一个或多个结构蛋白的空心颗粒形态,结构上类似完整病毒,具有与完整病毒相似的免疫原性并通过激活抗原提呈细胞诱导免疫应答,由于不含有完整的病毒基因组,因此适合用于开发更安全... 病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是含有某种病毒一个或多个结构蛋白的空心颗粒形态,结构上类似完整病毒,具有与完整病毒相似的免疫原性并通过激活抗原提呈细胞诱导免疫应答,由于不含有完整的病毒基因组,因此适合用于开发更安全、成本更低的候选疫苗。系统阐述了VLPs的分类、表征、优势及表达系统,回顾了VLPs疫苗的发展历程,并汇总了已上市的疫苗品种。同时,介绍了部分在研的预防性或治疗性VLPs疫苗,并探讨了新的开发策略,进一步拓宽了VLPs疫苗的研发领域,为未来的研究与应用提供了更广阔的前景。 展开更多
关键词 病毒样颗粒 vlps疫苗 表征工具 表达系统
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Toward innovative veterinary nanoparticle vaccines
16
作者 Meiqi Sun Aldryan Cristianto Pratama +2 位作者 He Qiu Zehui Liu Fang He 《Animal Diseases》 CAS 2024年第2期78-97,共20页
Nanoparticles are significant for veterinary vaccine development because they are safer and more effective than conventional formulations.One promising area of research involves self-assembled protein nanoparticles(SA... Nanoparticles are significant for veterinary vaccine development because they are safer and more effective than conventional formulations.One promising area of research involves self-assembled protein nanoparticles(SAPNs),which have shown potential for enhancing antigen-presenting cell uptake,B-cell activation,and lymph node trafficking.Numerous nanovaccines have been utilized in veterinary medicine,including natural self-assembled protein nanoparticles,rationally designed self-assembled protein nanoparticles,animal virus-derived nanoparticles,bacteriophagederived nanoparticles,and plant-derived nanoparticles,which will be discussed in this review.SAPN vaccines can produce robust cellular and humoral immune responses and have been shown to protect against various animal infectious diseases.This article attempts to summarize these diverse nanovaccine types and their recent research progress in the field of veterinary medicine.Furthermore,this paper highlights their disadvantages and methods for improving their immunogenicity. 展开更多
关键词 NANOPARTICLES Veterinary vaccine Self-assembling protein nanoparticles(SAPNs) Virus-like nanoparticles(vlps) Immune responses Animal infectious diseases Optimization strategies
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加热法促进猪圆环病毒2型病毒样颗粒的高效组装
17
作者 黎明 辛菲 +3 位作者 郑侃 蔡清波 杨延丽 贺笋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第10期1-9,共9页
为了提高猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳(Cap)蛋白病毒样颗粒(VLPs)的产量,本试验探索了采用加热法促进杆状病毒-昆虫细胞表达的Cap蛋白体外组装的可行性,通过高效液相尺寸排阻色谱法定量PCV2 Cap VLPs,分析4~56℃加热0~10 h对细胞培养液上清... 为了提高猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳(Cap)蛋白病毒样颗粒(VLPs)的产量,本试验探索了采用加热法促进杆状病毒-昆虫细胞表达的Cap蛋白体外组装的可行性,通过高效液相尺寸排阻色谱法定量PCV2 Cap VLPs,分析4~56℃加热0~10 h对细胞培养液上清中PCV2 Cap VLPs浓度的影响,并采用透射电子显微镜(TEM)验证;通过监测45℃加热6 h后的细胞培养液上清在4℃放置6个月中PCV2 Cap VLPs的浓度变化,验证PCV2 Cap VLPs的稳定性;通过全能核酸酶消化试验验证宿主核酸对PCV2 Cap VLPs组装的作用;对比加热与未加热工艺的PCV2 Cap VLPs纯化收率,并通过高效液相尺寸排阻色谱偶联多角度激光散射、圆二色光谱、差示扫描量热法和微量热泳动分析2种工艺所得PCV2 Cap VLPs表征的一致性。结果显示,细胞培养液上清中PCV2 Cap VLPs浓度随着温度和时间的延长逐渐升高,其中45℃加热6 h后PCV2 Cap VLPs浓度为未加热的3.77倍,TEM观察进一步验证PCV2 Cap VLPs浓度增加。加热后形成的PCV2 Cap VLPs在4℃储存6个月浓度稳定,未出现解聚现象。全能核酸酶消化试验显示,加热过程中宿主核酸的作用并非关键因素。采用45℃加热6 h后再进行纯化,PCV2 Cap VLPs纯化收率是未加热工艺的2.9倍。经分析,加热与未加热工艺所得PCV2 Cap VLPs具有一致的分子量(2.385×10^(6)和2.361×10^(6) Da)、水力学半径(10.1和10.2 nm)、热转变温度Tm(67.22和66.92℃)、二级结构和特异性抗体亲和力(49.0和76.5 pmol/L),表明两者具有相近结构。本试验为PCV2 Cap VLPs的生产探索了一个提高产量的新方法,为兽用疫苗的研发提供了在抗原性质分析方法上的借鉴。 展开更多
关键词 猪圆环病毒(PCV) 病毒样颗粒(vlps) 组装 理化性质 温度
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猪口蹄疫O型病毒样颗粒疫苗田间试验报告
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作者 明晓 艾有林 +3 位作者 祁光宇 栾东亮 蔺晓忠 石应禄 《畜牧业环境》 2024年第9期45-48,共4页
猪口蹄疫O型病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗是一种基于病毒颗粒表面抗原的疫苗,通过模拟病毒颗粒的结构和表面蛋白,刺激机体产生特异性免疫反应,从而达到预防猪口蹄疫的目的。本试验主要探讨猪口蹄疫O型VLPs疫苗接种后的免... 猪口蹄疫O型病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗是一种基于病毒颗粒表面抗原的疫苗,通过模拟病毒颗粒的结构和表面蛋白,刺激机体产生特异性免疫反应,从而达到预防猪口蹄疫的目的。本试验主要探讨猪口蹄疫O型VLPs疫苗接种后的免疫反应及抗体测定,为猪口蹄疫O型VLPs疫苗的优化和应用提供科学依据。试验表明,试验A组免疫2次,第60d猪口蹄疫O型抗体阳性率100%,口蹄疫3ABC抗体阳性率0%;试验B组免疫1次,第0d、15d、30 d、60d、90d、120d、150d、165d猪口蹄疫O型抗体阳性率分别为0%、77.1%、85.4%、82.6%、86.7%、80%、85.7%、80%,达到国家免疫合格率的目标要求,口蹄疫3ABC抗体阳性率0%。 展开更多
关键词 猪口蹄疫O型vlps疫苗 免疫 采血 抗体检测
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杆状病毒表达EV71病毒样颗粒的装配、制备纯化与鉴定 被引量:10
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作者 曹蕾 伊瑶 +6 位作者 宋敬东 田苗苗 田瑞光 孟庆玲 邱丰 贾志远 毕胜利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期201-206,共6页
将EV71P1和3CD基因片段克隆入同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bac-mid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD)。用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定和分... 将EV71P1和3CD基因片段克隆入同一杆状病毒穿梭质粒Bacmid中,构建出重组杆状病毒表达质粒Bac-mid-P1-3CD;脂质体介导其转染Sf9昆虫细胞获得共表达P1和3CD的重组杆状病毒(AcMNPV-P1-3CD)。用IFA和Western-blot法对表达产物进行鉴定和分析。电镜结果显示P1经3CD切割装配成了大小约为27nm的类球形颗粒(即EV71VLPs)。进一步分析影响杆状病毒表达系统的因素以对表达条件进行优化,结果显示MOI值和时间均可影响目的蛋白的表达,其中时间是主要因素。选择优化后条件利用无血清培养基对贴壁Sf9细胞在多层细胞培养器中进行VLPs的大量表达,密度梯度离心法纯化,SDS-PAGE结果可见三条大小约为39kD、34kD和26kD的VP1、VP0和VP3特异性条带。纯化后EV71VLPs颗粒结构完好,为下一步EV71蛋白结构的基础研究和基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 杆状病毒 肠道病毒71型(EV71) 病毒样颗粒(vlps) 制备 鉴定 纯化
原文传递
病毒样颗粒及其疫苗研究 被引量:3
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作者 童彦军 谢溱 蒋琳 《微生物学免疫学进展》 2015年第4期69-74,共6页
随着传统疫苗的升级换代,疫苗的研制越来越多的借助于基因工程手段,其中病毒样颗粒(VLPs)成为了当今病毒性疫苗研究的热点,尤其对于不易在体外大规模培养的病毒,VLPs是研发其疫苗的突破口。关于VLPs及其疫苗的研究,从球状病毒的组装理... 随着传统疫苗的升级换代,疫苗的研制越来越多的借助于基因工程手段,其中病毒样颗粒(VLPs)成为了当今病毒性疫苗研究的热点,尤其对于不易在体外大规模培养的病毒,VLPs是研发其疫苗的突破口。关于VLPs及其疫苗的研究,从球状病毒的组装理论、病毒的VLPs组装、VLP疫苗设计和VLP疫苗等几个方面予以综述。 展开更多
关键词 vlps vlps组装 VLP疫苗设计 VLP疫苗
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