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TRV介导的向日葵VIGS体系的构建
1
作者 周菲 黄绪堂 +5 位作者 谢鹏远 王静 刘岩 崔佳伟 唐立郦 王文军 《作物杂志》 北大核心 2025年第6期45-50,共6页
为解决缺少稳定遗传转化体系而制约向日葵基因功能研究的问题,以向日葵(Helianthus annuus L.)‘R5’为材料,以向日葵八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因作为报告基因,构建其VIGS重组载体pTRV2-HaPDS,叶背注射和真空渗透... 为解决缺少稳定遗传转化体系而制约向日葵基因功能研究的问题,以向日葵(Helianthus annuus L.)‘R5’为材料,以向日葵八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因作为报告基因,构建其VIGS重组载体pTRV2-HaPDS,叶背注射和真空渗透2种方法侵染向日葵子叶。结果表明,叶背注射在向日葵上不能成功侵染;采用真空渗透法,2次抽真空至-0.08 MPa,每次保持3 min,接种20 d后观察到基因沉默现象,新生真叶出现部分区域颜色变浅迹象,接种30 d后真叶白化表型更为明显,大部分植株第2、3对真叶出现更明显白化表型,但分布不均匀,在第4对真叶上只表现轻微白化,白化表型的维持时间大约是侵染后20~75 d,沉默效率约为57%,qRT-PCR结果发现白化植株的HaPDS基因表达量显著低于对照组,证明基因沉默成功。 展开更多
关键词 向日葵 vigs HaPDS基因 基因沉默
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TRV介导的上海青和芥菜VIGS体系的构建
2
作者 马燕勤 周玉洁 +7 位作者 龙海成 李菊 王海娥 常伟 李志 钟建 苗明军 杨亮 《中国农业科技导报(中英文)》 北大核心 2025年第8期239-249,共11页
为构建烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)介导的十字花科植物的病毒诱导的基因沉默(virusinduced gene silencing,VIGS)体系,以十字花科蔬菜上海青和芥菜为研究对象,以内源八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因为标... 为构建烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)介导的十字花科植物的病毒诱导的基因沉默(virusinduced gene silencing,VIGS)体系,以十字花科蔬菜上海青和芥菜为研究对象,以内源八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因为标记基因,构建pTRV2-BrPDS、pTRV2-BjuPDS-g和pTRV2-BjuPDS-c载体,并进一步对农杆菌的侵染水平进行优化,构建上海青和芥菜的高效VIGS系统。结果显示,pTRV2-BrPDS、pTRV2-BjuPDS-g和pTRV2-BjuPDS-c载体构建成功。当农杆菌OD600=1.0时,上海青植株白化表型最明显,当农杆菌OD600=0.8时,芥菜的沉默效果最佳。通过qRT-PCR证实,白化表型是由TRV重组病毒侵染植株后,内源性PDS基因发生沉默而引起的。以上研究结果为利用VIGS技术研究十字花科植物的基因功能提供了理论依据。 展开更多
关键词 上海青 芥菜 vigs PDS基因 白化表型
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白栎茎段离体再生体系与VIGS体系的构建
3
作者 蔡羽晴 吴立文 +3 位作者 熊仕发 施翔 石洋鑫 汪阳东 《林业科学研究》 北大核心 2025年第6期21-32,共12页
[目的]探究在白栎组织培养中不同因素对外植体选择、腋芽萌发、不定芽增殖和不定根诱导的影响,建立白栎组织离体再生技术体系;利用再生体系培育的白栎幼苗,初步建立烟草脆裂病毒(TRV)介导的VIGS基因沉默技术体系。将白栎的组培再生和瞬... [目的]探究在白栎组织培养中不同因素对外植体选择、腋芽萌发、不定芽增殖和不定根诱导的影响,建立白栎组织离体再生技术体系;利用再生体系培育的白栎幼苗,初步建立烟草脆裂病毒(TRV)介导的VIGS基因沉默技术体系。将白栎的组培再生和瞬时转化技术体系结合,实现对白栎基因功能的精准解析,为推动白栎遗传改良与分子育种奠定基础。[方法]以白栎茎段为外植体,通过对外植体、消毒时间和培养基进行选择,建立白栎组织离体再生技术体系;以白栎PDS基因(QfPDS)为报告基因,构建以TRV介导的VIGS技术体系。[结果](1)外植体宜选择5月采集的幼嫩茎段为材料,0.1%(质量分数)升汞消毒4.5 min或6月采集的半木质化茎段,0.1%升汞消毒6.0 min;(2)最佳的腋芽启动培养基配方为:WPM+0.5 mg·L^(-1)6-BA+80 mg·L^(-1)抗坏血酸,腋芽启动率为80%,启动时间为8.83 d;(3)最佳的不定芽增殖培养基配方为:WPM+0.03 mg·L^(-1)NAA+1.00 mg·L^(-1)6-BA,出芽率为85%,增殖系数3.13,伸长量2.83 cm;(4)最佳不定根诱导培养基配方为:1/4 MS+0.05 mg·L^(-1)NAA+0.50 mg·L^(-1)IBA,生根率为93.33%,平均根数3.93条,平均根长2.86 cm;(5)利用GV3101农杆菌介导TRV,配置10 mmol·L^(-1)氯化镁+10 mmol·L^(-1)2-吗啉乙磺酸+200 mg·L^(-1)乙酰丁香酮侵染液(pH=5.2),OD600=0.8的侵染液真空侵染白栎叶片,25°C室温培养22 d。[结论]在组织培养中,白栎外植体茎段易发生褐化与污染,可以通过选择外植体样品、消毒时间或添加抗褐化试剂以减缓褐化过程;在白栎再生体系建立过程中,白栎展现出较强的适应性和对NAA较高的敏感性;白栎VIGS体系虽然在基因表达分析中体现了极显著(p<0.01)的沉默效率,但在表型上表现出沉默不完全、不均一的现象。 展开更多
关键词 白栎 组织培养 再生体系 vigs体系
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基于VIGS的不同表达载体混合接种对烤烟烟碱代谢的影响
4
作者 卜亚艇 李伟 +9 位作者 许燕彪 谢可 徐秉聪 吴剑平 叶性荣 周建军 祖琼瑶 杨再军 郑聪 徐世晓 《江苏农业科学》 北大核心 2025年第3期16-23,共8页
烟碱的代谢具有复杂的基因调控网络,其中众多基因间存在相互影响,为探究不同基因共同沉默后对烟碱代谢通路以及叶片烟碱含量的影响。使用前期构建的烟碱代谢途径中3个功能基因(NtA622、NtPMT、NtBBL)和1个调控基因(NtMYB305a)病毒载体,... 烟碱的代谢具有复杂的基因调控网络,其中众多基因间存在相互影响,为探究不同基因共同沉默后对烟碱代谢通路以及叶片烟碱含量的影响。使用前期构建的烟碱代谢途径中3个功能基因(NtA622、NtPMT、NtBBL)和1个调控基因(NtMYB305a)病毒载体,利用病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术依据基因在烟碱代谢中的作用性质和作用阶段,设置不同载体组合浸染液接种处理,测定各处理的基因相对表达量、酶活性、烟碱含量,系统分析目的基因沉默效率以及沉默后对其他基因表达的影响,并探究各处理的基因平均沉默效率对烟碱降低率的贡献度。结果表明,各处理沉默相应目的基因,会在一定程度上影响本研究中其他目的基因的表达,其中NtA622基因受影响较小,而NtPMT、NtBBL基因受影响较大;各处理烟碱含量均得到降低,其中D6处理4个基因共同沉默后烟碱含量降低幅度最大,PMT、BBL活性与烟碱含量趋势基本一致,A622活性与烟碱含量趋势不完全一致;基因平均沉默效率低于烟碱含量降低率越多,说明对烟碱降低的贡献度越大,基因平均沉默效率高于烟碱含量降低率越多,说明对烟碱降低的贡献度越小。由此可知,利用VIGS技术可有效沉默目的基因的表达,进而降低叶片中烟碱含量,其中4个基因共同沉默后,烟碱含量降低最多;在烟碱代谢途径上,NtA622基因相对较稳定,而NtPMT与NtBBL基因相对不稳定;PMT、BBL活性与烟碱含量趋势基本一致。本研究为烤烟烟碱的分子调控提供了理论和技术支撑。 展开更多
关键词 vigs 混合载体 烟碱 基因表达量 酶活性 基因平均沉默效率
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VIGS-HIGS技术协同沉默大丽轮枝菌CYP51基因对烟草抗病能力的影响
5
作者 邹润 谢成建 《重庆师范大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期111-118,共8页
宿主诱导的基因沉默(host-induced gene silencing, HIGS)近些年来被深入研究并应用到植物抗病育种中,然而该技术需要首先在宿主植物中建立针对病原菌目标基因的siRNA。基于通过病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing, VIGS... 宿主诱导的基因沉默(host-induced gene silencing, HIGS)近些年来被深入研究并应用到植物抗病育种中,然而该技术需要首先在宿主植物中建立针对病原菌目标基因的siRNA。基于通过病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing, VIGS)技术能在本氏烟草(Nicotiana benthamiana)中快速产生siRNA的思路,构建了一个可同时沉默转基因本氏烟草16c(后简称16c-NB)GFP基因及大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)CYP51基因的融合片段,并将它插入到VIGS载体TRV2中,以实现在通过观察16c-NB绿色荧光是否消失来快速确认基因沉默效应是否发生的同时,也让16c-NB体内产生大量针对大丽轮枝菌CYP51基因的siRNA。结果显示:16c-NB在转入TRV2:GFP-CYP51载体后体内的GFP基因被沉默,且在接种大丽轮枝菌后的萎蔫病状明显低于作为对照的转入了TRV2:GFP载体的16c-NB,说明通过VIGS技术让16c-NB产生的针对大丽轮枝菌CYP51基因的siRNA明显提高了该物种对大丽轮枝菌的抗性。上述基于VIGS技术建立的TRV2:GFP-目标基因体系为快速筛选抗大丽轮枝菌的HIGS靶基因提供了高效工具。 展开更多
关键词 宿主诱导的基因沉默(HIGS) 病毒诱导的基因沉默(vigs) CYP51基因 本氏烟草 大丽轮枝菌
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番茄SlBLI2基因VIGS载体的构建及其功能研究
6
作者 肖钰薇 张华 +3 位作者 汪文杰 赵维升 姚改芳 胡康棣 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第10期1383-1388,共6页
番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。BLISTER(BLI)蛋白是许多应激反应的调节因子,可以促进植物对环境的适应性,在调控植物成熟方面发挥了重要作用。文章以番茄的S... 番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。BLISTER(BLI)蛋白是许多应激反应的调节因子,可以促进植物对环境的适应性,在调控植物成熟方面发挥了重要作用。文章以番茄的SlBLI2(Solyc12g097070.3)基因为研究对象,对BLI家族的基因序列特征进行分析。通过SlBLI2基因的特异性区域沉默序列,利用同源重组技术成功构建了番茄SlBLI2病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)载体。文章利用基因沉默实验对番茄果实注射不同杆菌,发现SlBLI2具有抑制果实成熟功能,为进一步探究番茄SlBLI2基因在果实成熟中的作用提供参考。 展开更多
关键词 番茄 vigs载体 SlBLI2基因 同源重组 成熟衰老
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茄子SmMsrA基因VIGS表达载体的构建及表达分析 被引量：16
7
作者 赵祯 刘富中 +3 位作者 张映 齐东霞 陈钰辉 连勇 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1495-1504,共10页
利用RT-PCR从茄子单性结实品系D-10中获得甲硫氨酸亚砜还原酶A基因(Sm Msr A)的编码区。通过Gateway同源重组技术,构建了3个分别含Sm Msr A基因不同片段的烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(VIGS)表达载体p TRV2-Sm... 利用RT-PCR从茄子单性结实品系D-10中获得甲硫氨酸亚砜还原酶A基因(Sm Msr A)的编码区。通过Gateway同源重组技术,构建了3个分别含Sm Msr A基因不同片段的烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(VIGS)表达载体p TRV2-Sm Msr Ai。表达载体转入农杆菌GV3101后,用注射压迫法侵染茄子叶片。采用表型观察、TRV病毒分子检测和q RT-PCR技术,评价构建的VIGS体系对Sm Msr A基因的沉默效果。结果表明,报告基因PDS沉默后叶片呈现明显的光漂白现象,Sm Msr A基因沉默后叶片呈花叶状,果实变小,叶片和果实中的Sm Msr A基因的表达量明显降低,表明Sm Msr A基因是正向调控茄子果实发育的相关基因。 展开更多
关键词 茄子 SmMsrA基因 vigs GATEWAY技术 果实发育
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利用VIGS技术研究草莓FaMYB5的功能 被引量：14
8
作者 王玲 汤浩茹 +3 位作者 王小蓉 陈清 江雷雨 林源秀 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期33-42,共10页
以‘丰香’草莓(Fragaria×ananassa‘Toyonaka’)为材料,采用病毒诱导的基因沉默技术(Virus-induced Gene Silencing,VIGS)对果实中类黄酮化合物代谢相关转录因子基因FaMYB5进行沉默,并对沉默后果实类黄酮化合物代谢途径相关的结... 以‘丰香’草莓(Fragaria×ananassa‘Toyonaka’)为材料,采用病毒诱导的基因沉默技术(Virus-induced Gene Silencing,VIGS)对果实中类黄酮化合物代谢相关转录因子基因FaMYB5进行沉默,并对沉默后果实类黄酮化合物代谢途径相关的结构基因和其他转录因子基因表达量进行半定量RT-PCR及RT-qPCR分析。并分别采用HPLC和香草醛—硫酸比色法对沉默后果实中花青素苷和原花青素含量进行测定。成功构建了pTRV2-FaMYB5的VIGS沉默载体,并建立了草莓果实VIGS沉默体系,FaMYB5基因沉默效率达60%;FaMYB5基因沉默处理与阴性对照相比,草莓类黄酮化合物代谢途径相关结构基因和转录因子表达量均发生改变,其中FaMYB9、FaLAR、FaDFR、FaANR表达量显著增加,从而导致果实中原花青素含量增加;而花青素合成相关基因FaANS的表达量减少1/2,FaMYB10表达量变化并不显著。此外,bHLH家族的转录因子基因FabHLH3和FabHLH3Δ随着FaMYB5的沉默表达量显著下降,而FaGL3显著升高。结果进一步证明FaMYB5转录因子对草莓类黄酮化合物代谢途径中的原花青素合成途径起负调控作用。 展开更多
关键词 草莓 vigs FaMYB5 负调控类黄酮代谢
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病毒诱导的基因沉默(VIGS)研究进展 被引量：35
9
作者 宋震 李中安 周常勇 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1885-1894,共10页
病毒诱导的基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是一种RNA介导的植物抗病毒机制,近年来已被用作研究植物基因功能的反向遗传学手段。与转基因、基因敲除、反义抑制等基因功能研究方法相比,VIGS技术研究周期短,不需要遗传转化,... 病毒诱导的基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是一种RNA介导的植物抗病毒机制,近年来已被用作研究植物基因功能的反向遗传学手段。与转基因、基因敲除、反义抑制等基因功能研究方法相比,VIGS技术研究周期短,不需要遗传转化,具有低成本、高通量等优势。因此,VIGS已被广泛应用于植物抗病抗逆、生长发育以及代谢调控等生理途径相关基因的功能鉴定。综述了VIGS的机制、技术发展、沉默效率的影响因素及其在植物基因功能鉴定中的应用,并对VIGS在植物性状改良及植物保护方面的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 vigs 功能基因组学 病毒载体
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VIGS:植物功能基因组学研究的革命 被引量：15
10
作者 姚丹青 张微微 +3 位作者 原丽华 潘俊松 何欢乐 蔡润 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期155-161,共7页
病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术是一种RNA介导的抗病毒防御反应机制,目前在植物反向遗传学领域已经表现出巨大的潜力。VIGS技术不仅优于传统的植物转基因技术,方法简便,高效耐用,而且具有高通量特性。在功能... 病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术是一种RNA介导的抗病毒防御反应机制,目前在植物反向遗传学领域已经表现出巨大的潜力。VIGS技术不仅优于传统的植物转基因技术,方法简便,高效耐用,而且具有高通量特性。在功能基因组学领域的研究中,这些优越性已经使VIGS技术成为最具吸引力的首选技术手段。目前,VIGS体系应用最成功的植物是病毒学家常用的模式植物-本氏烟草(Nicotiana benthamiana),与此同时,也在努力改良VIGS技术,使其能够在包括单子叶植物在内的其它物种中得到广泛应用。我们讨论的重点是针对利用VIGS技术来确定基因功能,该技术已经在抗病性,逆境胁迫,细胞信号传导以及次生代谢生物合成途径研究中显示出相关基因功能的多样性,并随之构建出一系列新的相关模型。 展开更多
关键词 vigs 病毒载体 基因沉默 功能基因组学
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棉花VIGS病毒载体的构建及其在抗病基因功能鉴定的应用 被引量：8
11
作者 李建平 郝晓燕 +6 位作者 李琴 高升旗 常晓春 陈勋基 足木热木.吐尔逊 陈果 黄全生 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1203-1208,共6页
【目的】利用农杆菌介导的VIGS基因沉默技术,研究陆地棉抗病相关基因在棉花抗黄萎病中的功能。【方法】利用分子生物学技术构建VIGS病毒载体,建立VIGS病毒诱导沉默体系;利用此体系将棉花中的一个钙依赖蛋白(CDPK)基因,通过农杆菌介导在... 【目的】利用农杆菌介导的VIGS基因沉默技术,研究陆地棉抗病相关基因在棉花抗黄萎病中的功能。【方法】利用分子生物学技术构建VIGS病毒载体,建立VIGS病毒诱导沉默体系;利用此体系将棉花中的一个钙依赖蛋白(CDPK)基因,通过农杆菌介导在陆地棉中沉默,根据此基因沉默植株在病原菌环境下的发病情况研究该基因在棉花抗病中的功能。【结果】利用包含有Gh CPK抗病基因片段的VIGS病毒载体的农杆菌侵染棉花子叶,病毒载体上的目的基因片段由RNA聚合酶识别并合成双链RNA(double stranded RNA,dsRNA),dsRNA由Dicer酶识别并于其它RNA形成RNA诱导的沉默复合体(RNA induced silencing complex,RISC),RISC对内源Gh CPK mRNA进行识别和切割作用,内源Gh CPK mRNA降解而发生基因沉默。Gh CPK基因沉默导致棉苗对黄萎病敏感性增加,证明Gh CPK基因参与调控棉花抗病功能。【结论】病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)能够快速有效的研究Gh CPKs基因在棉花抗病中的功能。 展开更多
关键词 棉花 钙依赖蛋白基因 vigs 黄萎病
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VIGS载体在蔬菜作物中的应用研究进展 被引量：12
12
作者 季娜娜 闵德栋 +2 位作者 邵淑君 李富军 张新华 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期810-816,共7页
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是一种RNA介导的植物抗病毒机制,近年来在蔬菜作物基因功能的研究中,VIGS作为一种快速、高效、高通量的反向遗传学新技术发挥了重要作用。由于VIGS技术需要借助病毒载体来实现,... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是一种RNA介导的植物抗病毒机制,近年来在蔬菜作物基因功能的研究中,VIGS作为一种快速、高效、高通量的反向遗传学新技术发挥了重要作用。由于VIGS技术需要借助病毒载体来实现,所以选择适宜的病毒载体是在性状各异的蔬菜中成功构建VIGS体系的关键。本文介绍了在蔬菜作物中应用的VIGS载体及其在基因功能研究中的应用实例,并分析了病毒载体在诱导蔬菜作物基因沉默时存在的一些问题及解决方法。 展开更多
关键词 vigs 病毒载体 蔬菜 研究进展
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VIGS技术及其在棉花功能基因组研究中的应用进展 被引量：11
13
作者 张景霞 王芙蓉 +1 位作者 高阳 张军 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期469-473,共5页
病毒诱导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)是一种转录后基因沉默现象,是植物体内普遍存在的遗传免疫机制,现已被开发为快速、高效、高通量的反向遗传学技术,在植物基因功能研究中得到广泛应用。近年,利用VIGS技术进行棉... 病毒诱导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)是一种转录后基因沉默现象,是植物体内普遍存在的遗传免疫机制,现已被开发为快速、高效、高通量的反向遗传学技术,在植物基因功能研究中得到广泛应用。近年,利用VIGS技术进行棉花基因功能研究也取得了一定进展。本文对VIGS技术的发展、操作技术的优化进行了综述,尤其总结了VIGS技术在棉花抗病、品质改良、生长发育等基因鉴定和功能研究中的应用进展,并对其应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 棉花 vigs 基因功能 抗病基因 品质基因
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马铃薯中VIGS沉默体系的研究 被引量：8
14
作者 张晓萝 张之为 +3 位作者 娜仁 杨叔清 高婧 赵君 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期36-40,共5页
以马铃薯X病毒载体PVX为工具,探究不同马铃薯品种和不同侵染方式对PVX介导的VIGS沉默体系的影响,结果表明:马铃薯基因型的差异是影响VIGS沉默效果的主要因素。通过对VIGS沉默pds(八氢茄红素脱氢酶)基因的植株进行半定量RT-PCR检测,发现... 以马铃薯X病毒载体PVX为工具,探究不同马铃薯品种和不同侵染方式对PVX介导的VIGS沉默体系的影响,结果表明:马铃薯基因型的差异是影响VIGS沉默效果的主要因素。通过对VIGS沉默pds(八氢茄红素脱氢酶)基因的植株进行半定量RT-PCR检测,发现在所有供试的马铃薯品种中,乌盟601中pds基因的沉默效果最好,侵染后pds基因表达量下降了79.8%;而虎头、夏坡蒂和大西洋中的pds基因表达量也有不同程度降低,分别为64.1%,31.0%,4.5%。不同侵染方式即叶片注射和茎秆刺伤的试验结果表明,VIGS沉默效果和侵染方式的相关性不显著,采用叶片注射和茎秆刺伤接种马铃薯品种乌盟601,pds基因表达量分别下降了59.0%和56.5%;而虎头叶片注射和茎秆刺伤接种pds基因表达量分别下降了34.7%和40.3%。方差分析结果表明,2种不同的接种方法对pds基因沉默比例没有显著差异。 展开更多
关键词 vigs 沉默 马铃薯 接种方法
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桑树PDS基因VIGS转化体系的构建与鉴定 被引量：8
15
作者 李瑞雪 王钰婷 +3 位作者 胡飞 夏家凤 汪泰初 赵卫国 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1432-1438,共7页
【目的】建立桑树的病毒诱导基因沉默(VIGS)转化体系,为桑树功能基因的分析研究提供技术支持。【方法】以丰驰桑为试验材料,克隆含Bam H I和Xba I酶切位点的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,经Xba I和Bam H I双酶切后与烟草脆裂病毒(T... 【目的】建立桑树的病毒诱导基因沉默(VIGS)转化体系,为桑树功能基因的分析研究提供技术支持。【方法】以丰驰桑为试验材料,克隆含Bam H I和Xba I酶切位点的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,经Xba I和Bam H I双酶切后与烟草脆裂病毒(TRV)连接构建重组病毒载体p TRV2-PDS,转化农杆菌GV3101后通过压迫注射方式侵染桑树幼苗叶片。【结果】克隆获得的桑树PDS基因干扰片段346 bp,与改造后的TRV质粒连接可成功构建携带桑树PDS基因的重组病毒载体p TRV2-PDS。桑树叶片被侵染15 d后,接种重组病毒载体p TRV2-PDS桑树的第二轮真叶开始出现叶片白化现象,侵染20 d后,白化现象沿叶脉向四周逐渐扩散,叶片呈现明显的白化表型。实时荧光定量PCR检测结果显示,重组病毒载体p TRV2-PDS侵染的桑叶PDS基因相对表达量仅为阴性对照(p TRV2)的58%,二者差异极显著(P<0.01),表明桑树PDS基因表达被有效抑制。【结论】利用TRV构建的桑树VIGS体系能有效沉默PDS基因,使桑树叶片呈现明显的白化症状,即可用于后续的桑树功能基因鉴定。 展开更多
关键词 桑树 八氢番茄红素脱氢酶(PDS) 病毒诱导的基因沉默(vigs) 烟草脆裂病毒(TRV) 白化表型
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VIGS技术在植物基因功能研究中的应用 被引量：17
16
作者 杨迎伍 李正国 +1 位作者 宋红丽 杨平 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2007年第2期379-383,共5页
文章就病毒载体选择、目标基因插入片段设计、病毒嫁接技术、环境条件控制、沉默植株检测等方面对应用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术研究植物基因功能应遵循的基本原则进行介绍,并讨论了其在应用中存在的一些问题。
关键词 病毒诱导的基因沉默(vigs) 植物基因功能 应用 基本原则
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VIGS介导的番茄转录因子SIDREB2基因的耐旱特征 被引量：6
17
作者 于国红 马雪峰 +2 位作者 徐娜 辛世超 程宪国 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期93-100,共8页
SlDREB2基因是利用rd29A基因启动子的DRE元件通过酵母单杂交技术从番茄幼苗(丽春)cDNA文库中筛选得到的属于EREBP家族的一个转录因子基因。利用构建病毒VIGS载体,分别用含pBINTRB6、pTV00::SlDREB2-1和pTV00::SlDREB2-2重组载体的农杆菌... SlDREB2基因是利用rd29A基因启动子的DRE元件通过酵母单杂交技术从番茄幼苗(丽春)cDNA文库中筛选得到的属于EREBP家族的一个转录因子基因。利用构建病毒VIGS载体,分别用含pBINTRB6、pTV00::SlDREB2-1和pTV00::SlDREB2-2重组载体的农杆菌GV3101菌液灌根与叶片注射法侵染番茄植株,转化7 d后进行病毒DNA检测与验证。测定了干旱胁迫下侵染成功的番茄植株与野生型株系的生理指标,并通过Real-time qPCR分析了VIGS介导的SlDREB2转录因子基因的表达特征。番茄植株干旱3周胁迫处理后测定结果表明,野生番茄中脯氨酸和可溶性糖水平要高于被VIGS病毒侵染的番茄植株,而丙二醛水平要低于被侵染植株,并且指标显示被pTV00::SlDREB2-2重组载体的农杆菌GV3101菌液侵染的番茄植株抗旱性明显降低;复水1周后,受VIGS浸染株系丙二醛含量明显高于野生型,而可溶性糖与脯氨酸累积却低于野生型。Real-time qPCR结果表明,经VIGS病毒侵染过的番茄植株在胁迫处理时期SlDREB2基因的相对表达量都明显低于野生型株系,表明番茄SlDREB2基因保守域末端459 bp的特异片段具有较显著的沉默效果,说明VIGS介导的SlDREB2基因的表达受干旱诱导,该基因可以作为抗旱型作物品种改良的有价值基因。 展开更多
关键词 vigs 番茄 DREB 干旱胁迫 REAL-TIME qPCR
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VIGS技术在禾本科植物中的应用研究进展 被引量：8
18
作者 李淼淼 南富波 +1 位作者 刘伟 李卫华 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期401-406,共6页
病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是一种转录后基因沉默现象。近年来在植物基因功能研究中,VIGS技术作为一种快速、高效、高通量的反向遗传学新技术发挥了重要作用。尤其在禾本科植物基因功能研究中VIGS技术得到了... 病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)是一种转录后基因沉默现象。近年来在植物基因功能研究中,VIGS技术作为一种快速、高效、高通量的反向遗传学新技术发挥了重要作用。尤其在禾本科植物基因功能研究中VIGS技术得到了广泛的应用。本文阐述了VIGS技术的发现及作用机制,并重点介绍了在禾本科植物中应用的VIGS载体及功能基因组学研究的应用实例,最后探讨了VIGS技术在禾本科植物中影响沉默效率的因素、局限性及应用前景。 展开更多
关键词 禾本科植物 vigs 功能基因组
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利用VIGS技术分析野生茄Ve基因的抗黄萎病功能 被引量：5
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作者 刘军 周晓慧 +2 位作者 冯翠 武文 庄勇 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期217-221,共5页
黄萎病是影响茄子生产的一种重要土传性病害,挖掘利用抗病基因对茄子抗黄萎病育种具有重要的意义。Ve类基因是已知的植物抗黄萎病基因之一。采用同源法从抗黄萎病野生茄中分离Ve类基因的同源序列,构建重组载体TRV2-SlVe,经农杆菌介导侵... 黄萎病是影响茄子生产的一种重要土传性病害,挖掘利用抗病基因对茄子抗黄萎病育种具有重要的意义。Ve类基因是已知的植物抗黄萎病基因之一。采用同源法从抗黄萎病野生茄中分离Ve类基因的同源序列,构建重组载体TRV2-SlVe,经农杆菌介导侵染植株并接种黄萎病病菌,结合表型观察和半定量RT-PCR技术对结果进行了分析。结果发现,TRV2-SlVe成功地抑制了野生茄中Ve基因的表达,接种植株表现出明显的黄萎病症状。以上结果表明,野生茄中的Ve类基因具有抗黄萎病的特性。 展开更多
关键词 野生茄 vigs 黄萎病 Ve基因
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VIGS诱导MdHB-1沉默对苹果果实成熟的影响 被引量：9
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作者 温小红 姜永华 +1 位作者 周轲 任小林 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期113-119,共7页
为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,V... 为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,VIGS技术成功抑制果肉MdHB-1表达,使MdACO1表达量下调,果实的呼吸强度和乙烯释放速率受到显著抑制,果实硬度、可溶性固形物和可滴定酸质量分数的下降延缓。说明:MdHB-1不仅可以正向调控苹果果实MdACO1表达,还参与果实的成熟衰老过程。 展开更多
关键词 '澳洲青苹’苹果 vigs 转录因子MdHB-1 果实成熟
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