目的:探讨术藤方(ZTF)调控肿瘤驯化B细胞(tumor educated B cell,TEB)抑制结直肠癌淋巴管生成及对白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)/信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)/血管内皮...目的:探讨术藤方(ZTF)调控肿瘤驯化B细胞(tumor educated B cell,TEB)抑制结直肠癌淋巴管生成及对白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)/信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)/血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor C,VEGFC)信号轴的影响。方法:采用超高效液相色谱检测ZTF的活性成分。取CT26.WT和MC38细胞,采用CCK-8法检测ZTF的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。提取小鼠原代B细胞,构建TEB模型,并以ZTF干预。将TEB分为LPS+Anti-CD40 B cell组、TEB^(CT26)cell/TEB^(MC38)cell组、ZTF-L组、ZTF-M组、ZTF-H组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清中IL-10、VEGFC含量,Western blot法检测p-STAT3、VEGFC蛋白表达水平。收集各组细胞上清干预SVEC4-10细胞,分为LPS+Anti-CD40 B cell CM组、TEB^(CT26)cell/TEB^(MC38)cell CM组、ZTF-L CM组、ZTF-M CM组、ZTF-H CM组,采用细胞迁移实验和成管实验检测迁移细胞数、管腔节点数及管腔长度,Western blot法检测LYVE-1、Podoplanin、VEGFR2、VEGFR3蛋白表达水平。结果:术藤方的活性成分包括柠檬酸、儿茶素、香草酸葡萄糖苷等。与TEB^(CT26)cell/TEB^(MC38)cell组比较,LPS+Anti-CD40 B cell、ZTF-M、ZTF-H组细胞凋亡率升高(P<0.01)。与TEB^(CT26)cell/TEB^(MC38)cell组比较,LPS+Anti-CD40 B cell、ZTF-M、ZTF-H组细胞上清中IL-10、VEGFC含量降低(P<0.01)。与TEB^(CT26)cell/TEB^(MC38)cell组比较,LPS+Anti-CD40 B cell、ZTF-M、ZTF-H组细胞p-STAT3/STAT3、VEGFC蛋白表达水平降低(P<0.05)。与TEB^(CT26)cell CM/TEB^(MC38)cell CM组比较,LPS+Anti-CD40 B cell CM、ZTF-L CM、ZTF-M CM、ZTF-H CM组SVEC4-10细胞迁移数目、管腔节点数及管腔长度减少(P<0.05)。与TEB^(CT26)cell CM/TEB^(MC38)cell CM组比较,LPS+Anti-CD40 B cell CM、ZTF-H CM组细胞LYVE-1、Podoplanin、VEGFR2、VEGFR3蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:ZTF可能通过抑制IL-10/STAT3/VEGFC信号轴,调控TEB,从而抑制淋巴管生成。展开更多
文摘目的:探讨术藤方(ZTF)调控肿瘤驯化B细胞(tumor educated B cell,TEB)抑制结直肠癌淋巴管生成及对白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)/信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)/血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor C,VEGFC)信号轴的影响。方法:采用超高效液相色谱检测ZTF的活性成分。取CT26.WT和MC38细胞,采用CCK-8法检测ZTF的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。提取小鼠原代B细胞,构建TEB模型,并以ZTF干预。将TEB分为LPS+Anti-CD40 B cell组、TEB^(CT26)cell/TEB^(MC38)cell组、ZTF-L组、ZTF-M组、ZTF-H组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清中IL-10、VEGFC含量,Western blot法检测p-STAT3、VEGFC蛋白表达水平。收集各组细胞上清干预SVEC4-10细胞,分为LPS+Anti-CD40 B cell CM组、TEB^(CT26)cell/TEB^(MC38)cell CM组、ZTF-L CM组、ZTF-M CM组、ZTF-H CM组,采用细胞迁移实验和成管实验检测迁移细胞数、管腔节点数及管腔长度,Western blot法检测LYVE-1、Podoplanin、VEGFR2、VEGFR3蛋白表达水平。结果:术藤方的活性成分包括柠檬酸、儿茶素、香草酸葡萄糖苷等。与TEB^(CT26)cell/TEB^(MC38)cell组比较,LPS+Anti-CD40 B cell、ZTF-M、ZTF-H组细胞凋亡率升高(P<0.01)。与TEB^(CT26)cell/TEB^(MC38)cell组比较,LPS+Anti-CD40 B cell、ZTF-M、ZTF-H组细胞上清中IL-10、VEGFC含量降低(P<0.01)。与TEB^(CT26)cell/TEB^(MC38)cell组比较,LPS+Anti-CD40 B cell、ZTF-M、ZTF-H组细胞p-STAT3/STAT3、VEGFC蛋白表达水平降低(P<0.05)。与TEB^(CT26)cell CM/TEB^(MC38)cell CM组比较,LPS+Anti-CD40 B cell CM、ZTF-L CM、ZTF-M CM、ZTF-H CM组SVEC4-10细胞迁移数目、管腔节点数及管腔长度减少(P<0.05)。与TEB^(CT26)cell CM/TEB^(MC38)cell CM组比较,LPS+Anti-CD40 B cell CM、ZTF-H CM组细胞LYVE-1、Podoplanin、VEGFR2、VEGFR3蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:ZTF可能通过抑制IL-10/STAT3/VEGFC信号轴,调控TEB,从而抑制淋巴管生成。
