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石斑鱼肠孢虫环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用
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作者 解恩佩 万晓媛 +6 位作者 要菲 魏京广 吴成龙 史成银 张庆利 谢国驷 黄倢 《渔业科学进展》 北大核心 2026年第1期151-160,共10页
石斑鱼肠孢虫(Enterospora epinepheli)是当前危害石斑鱼(Epinephelus spp.)养殖产业的重要病原,但该病原自2017年报道以来,仅有2种基于核酸检测方法的报道。本研究以石斑鱼肠孢虫的核糖体小亚基r RNA(small subunit ribosomal RNA, SSU... 石斑鱼肠孢虫(Enterospora epinepheli)是当前危害石斑鱼(Epinephelus spp.)养殖产业的重要病原,但该病原自2017年报道以来,仅有2种基于核酸检测方法的报道。本研究以石斑鱼肠孢虫的核糖体小亚基r RNA(small subunit ribosomal RNA, SSU rRNA)基因为靶序列,设计3对环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)引物,建立了该病原的LAMP检测方法(LAMP for E. epinepheli, E.ep_LAMP)。添加EvaGreen^(®)核酸染料的检测体系置于定量PCR仪中,以2.68×10^(2)~2.68×10^(9)拷贝/μL的重组质粒标准品pMD18_E.ep为模板,各浓度均可在20 min内完全检测,检测灵敏度为2.68×10^(2)拷贝/反应;分析p MD18_E.ep中目的基因核酸拷贝数的对数值(x)与其对应Ct值(y)的线性关系得到检测方法的标准曲线:y=–1.719 5x+23.971(R2=0.996 2);重复性检测中,其批内和批间检测的变异系数(coefficient of variation, CV)范围分别为0.22%~3.52%和0.24%~1.70%。特异性检测中,E.ep_LAMP与虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)和肌孢虫(Ameson portunus)以及其他11种细菌和病毒均无交叉反应。E.ep_LAMP检测体系中使用核酸染料GeneFinder^(®)后,还可在简易恒温条件下进行现场检测,具有诊断试剂产品开发的前景。总体而言,本研究建立的方法快速、灵敏、特异性强,兼顾定量和可现场诊断的优点,可为当前频发的石斑鱼微孢子虫病的诊断及防控提供新的有效检测方法。 展开更多
关键词 石斑鱼肠孢虫 环介导等温扩增 检测 核糖体小亚基rRNA
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地黄灼烧病毒RT-LAMP快速检测方法的建立与应用
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作者 鲁书豪 文艺 +8 位作者 高素霞 李雪梦 杨瑾 李绍建 李想 徐国豪 齐红志 王飞 秦艳红 《河南农业科学》 北大核心 2026年第2期80-88,共9页
地黄灼烧病毒(Rehmannia torradovirus virus,ReTV)是首次在地黄上报道的新病毒,严重危害地黄田间生长。为建立快速检测ReTV的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),以ReTV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因为靶标基因设计了4组特异性引物,... 地黄灼烧病毒(Rehmannia torradovirus virus,ReTV)是首次在地黄上报道的新病毒,严重危害地黄田间生长。为建立快速检测ReTV的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),以ReTV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因为靶标基因设计了4组特异性引物,利用电泳检测及可视化方法(加SYBR GreenⅠ显色剂)进行引物筛选和RT-LAMP产物鉴定,同时以单一变量法优化RT-LAMP反应条件,以ReTV重组质粒为模板检测特异性和灵敏度,并对田间地黄样品进行检测应用。结果表明,建立的ReTV RTLAMP检测方法最适反应条件为65℃60 min;特异性检测结果表明,只有ReTV为模板显示阳性,与地黄上其他病毒无交叉反应;RT-LAMP灵敏度是常规RT-PCR的100倍,可检测到3.39×10^(0)拷贝/μL;在样品检测中RT-LAMP方法的阳性检出率(100%)高于常规RT-PCR方法(93.75%),表明RT-LAMP方法准确性高于常规RT-PCR方法。建立的RT-LAMP检测技术为ReTV的准确检测提供了快速、特异、简便的方法。 展开更多
关键词 地黄灼烧病毒 地黄 环介导等温扩增技术 可视化检测
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地黄葱X病毒RT-LAMP快速检测方法的建立与应用
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作者 鲁书豪 秦艳红 +7 位作者 杨会珍 杨瑾 李雪梦 李绍建 文艺 高素霞 王飞 鲁传涛 《植物保护》 北大核心 2026年第1期266-272,共7页
地黄葱X病毒(Rehmannia allexivirus,ReAV)是首次在地黄上报道的新病毒,本研究基于ReAV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的核苷酸序列设计了3组引物进行筛选,对RT-LAMP进行了温度优化、时间优化、特异性检测、灵敏度比较等试验,建立了ReA... 地黄葱X病毒(Rehmannia allexivirus,ReAV)是首次在地黄上报道的新病毒,本研究基于ReAV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的核苷酸序列设计了3组引物进行筛选,对RT-LAMP进行了温度优化、时间优化、特异性检测、灵敏度比较等试验,建立了ReAV反转录环介导恒温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)快速检测技术。结果表明:本研究建立的ReAV RT-LAMP方法最适反应条件为65°C40 min,该方法可特异性检测出ReAV,其检测限为6.99拷贝/μL,灵敏度是常规PCR的10倍。对21份地黄样品的检测结果表明,RT-LAMP方法的阳性检出率(85.7%)略高于常规RT-PCR方法(71.4%)。本研究建立的RT-LAMP检测技术为ReAV的准确检测提供了快速、特异、简便的方法,为田间样品的检测提供了技术支撑。 展开更多
关键词 地黄 地黄葱X病毒 反转录环介导等温扩增(RT-lamp) 可视化 快速检测
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UVC-LED灯具在水杀菌中的应用研究
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作者 廖俊宇 喻洪波 周涛 《灯与照明》 2025年第5期246-249,共4页
在饮用水及工业流体处理领域,汞蒸气紫外灯长期作为主流消毒手段,但其固有缺陷导致汞污染风险与能源效率瓶颈并存,开发环境友好型的紫外发光二极管(UVC-LED)杀菌技术已成为行业迫切需求。本研究聚焦UVC-LED技术革新,通过联合结构和光学... 在饮用水及工业流体处理领域,汞蒸气紫外灯长期作为主流消毒手段,但其固有缺陷导致汞污染风险与能源效率瓶颈并存,开发环境友好型的紫外发光二极管(UVC-LED)杀菌技术已成为行业迫切需求。本研究聚焦UVC-LED技术革新,通过联合结构和光学模拟分析,使得单个模组的杀菌腔的理论处理流量达到6 L/min,多个模组串联可达到20 L/min以上的大流量处理要求,把杀菌的时长分配到多个模组杀菌腔中,从而满足整体的紫外杀菌剂量需求。本研究结果为新一代模块化UVC-LED水杀菌装备的开发提供了理论支撑与技术参考。 展开更多
关键词 uvc-led 紫外水杀菌 光学模拟 辐射照度
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溶酶体相关蛋白CTSB及LAMP2与IgA肾病病情进展关系的分析
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作者 胡杰强 徐映雪 +1 位作者 张会健 李贵森 《临床肾脏病杂志》 2026年第2期97-104,共8页
目的 经尿液蛋白质组学筛选出IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者特征性蛋白,分析其与临床、病理指标的相关性,并探索IgAN潜在的蛋白生物标志物。方法 回顾性收集50例IgAN患者、50例膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者及68名健康... 目的 经尿液蛋白质组学筛选出IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者特征性蛋白,分析其与临床、病理指标的相关性,并探索IgAN潜在的蛋白生物标志物。方法 回顾性收集50例IgAN患者、50例膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者及68名健康对照(health controls,HC)人群尿液标本,通过液相色谱串联质谱法检测蛋白质组学数据,筛选出IgAN的表达差异蛋白,富集在溶酶体通路的5种差异蛋白:CTSA, CTSB,CTSH,β-GAL,LAMP2。进一步收集31例IgAN和31例HC人群的尿液、血液标本,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对上述蛋白表达情况进行验证,并与IgAN临床及病理指标进行相关性分析。进一步筛选出CTSB、LAMP2表达差异蛋白,通过免疫组化检测其在6例IgAN患者肾活检组织及6例肾癌患者癌旁正常肾组织中的表达情况,探讨溶酶体功能与IgAN的关系。结果 尿蛋白质组学结果显示,HC组尿液中CTSA、CTSB、CTSH、β-GAL、LAMP2差异蛋白表达水平显著高于IgAN组,差异具有统计学意义(P<0.05)。通过ELISA验证,尿液中蛋白表达水平结果与尿蛋白质组学趋势一致,在血液中,HC组表达水平低于IgAN组,除β-GAL外差异均有统计学意义(P<0.05)。与IgAN临床和病理指标进行相关性分析,尿液中5种蛋白与高密度脂蛋白、血清IgM正相关,与尿白蛋白/肌酐比值、24h尿蛋白量、血氯、三酰甘油等负相关。血液中CTSB与尿白蛋白/肌酐比值、24h尿蛋白量、血清补体C4呈负相关,与高血压、牛津肾脏病理分型E评分呈正相关;LAMP2与血肌酐、血钾、游离轻链κ、游离轻链λ呈负相关,与估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)、牛津肾脏病理分型E评分呈正相关,相关性均有统计学意义(P<0.05),其余3种蛋白无相关性。CTSB、LAMP2在IgAN肾小管、肾小球均表达。结论 多种溶酶体相关蛋白在IgAN患者尿液中表达显著变化。CTSB与尿蛋白相关指标显著相关,LAMP2与eGFR、血肌酐显著相关,两者有望成为IgAN的潜在生物标志物,为研究IgAN发病机制提供新思路。 展开更多
关键词 IGA肾病 尿蛋白质组学 CTSB lamp2 溶酶体相关蛋白
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基于新型分子靶标的LAMP可视化技术检测新鲜鱼肉中的黄杆菌
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作者 周宝青 毛旭东 +5 位作者 聂翔 朱应飞 范宏伟 熊文启 吴鑫 马冰峰 《食品工业科技》 北大核心 2026年第7期357-366,共10页
本研究致力于开发一种基于新型分子靶标的环介导等温扩增(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)可视化技术,旨在实现新鲜鱼肉中黄杆菌的同时、快速、灵敏检测。利用全基因测序和泛基因组分析技术系统挖掘黄杆菌属候选分子靶标... 本研究致力于开发一种基于新型分子靶标的环介导等温扩增(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)可视化技术,旨在实现新鲜鱼肉中黄杆菌的同时、快速、灵敏检测。利用全基因测序和泛基因组分析技术系统挖掘黄杆菌属候选分子靶标,通过5株黄杆菌和44株非黄杆菌对候选靶标进行特异性验证。基于靶标序列设计LAMP引物,优化LAMP扩增体系,并对新型LAMP及LAMP横向流动试纸条(Lateral Flow Dipstick,LFD)可视化方法进行特异性、灵敏度评价,最后测定其抗干扰能力及在实际样本检测中的准确性。结果显示本研究挖掘的menB靶标具有良好的特异性,在最佳条件下,LAMP方法针对12株非目标菌无交叉反应,在黄杆菌纯培养物和混合加标鱼肉中的检测限分别为3.3×10^(2) CFU/mL和3.3×10^(3) CFU/g。同时,LAMP可视化技术在纯培养物和混合加标鱼肉样本中检测灵敏度和特异性与传统LAMP方法相当,且在高浓度杂菌和腐败鱼肉样本干扰下,仍保持优异的检测性能。对24份实际样品检测,LAMP-LFD可视化方法检测结果与传统培养法一致。本研究建立的新型LAMP可视化检测技术,为食品中黄杆菌污染防控提供了一种高效、可靠的检测手段,具有重要的应用价值和推广前景。 展开更多
关键词 黄杆菌 分子靶标 环介导等温扩增(lamp) 横向流动试纸条(LFD) 快速检测
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LAMP2变异导致非典型起病Danon病的遗传学分析
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作者 石璐璐 于静 +2 位作者 路钰夏 郑丽娟 夏志毅 《中国优生与遗传杂志》 2026年第1期154-158,共5页
目的探讨以肝功能异常为首发症状的Danon病患儿临床表型及遗传学特点。方法选取2024年10月河南省儿童医院1例Danon病患儿,收集其临床资料、家族史,对患儿行全外显子组测序(WES),Sanger测序验证候选变异,并按美国医学遗传学与基因组学学... 目的探讨以肝功能异常为首发症状的Danon病患儿临床表型及遗传学特点。方法选取2024年10月河南省儿童医院1例Danon病患儿,收集其临床资料、家族史,对患儿行全外显子组测序(WES),Sanger测序验证候选变异,并按美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南行致病性评级。结果患儿男,11岁7月,首发症状为肝功能异常(谷丙转氨酶、谷草转氨酶反复升高),伴肌酸激酶升高及心室预激。WES显示其X染色体LAMP2基因c.554delA(p.N185Mfs*57)半合子变异,Sanger测序验证母亲为杂合变异,父亲及姐姐为野生型。蛋白质结构预测提示该变异致蛋白功能丧失,按ACMG指南评级为“致病性”(PVS1+PM2_Supporting+PP4)。结论本例患儿以肝功能异常首发,丰富了Danon病临床表型及LAMP2基因变异谱,为该病早期识别与诊断提供参考。 展开更多
关键词 Danon病 lamp2基因 肝功能异常 N185Mfs*57
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Examining the Impact of Heparin-Free Dialysis Supplemented with Infrared Lamp Irradiation on Coagulation in Dialyzers
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作者 Qin Chen 《Journal of Clinical and Nursing Research》 2026年第1期316-322,共7页
Objective:To investigate the effects of infrared lamp irradiation therapy on the risk of arteriovenous fistula thrombosis in patients undergoing heparin-free dialysis and those receiving appropriate reductions in hepa... Objective:To investigate the effects of infrared lamp irradiation therapy on the risk of arteriovenous fistula thrombosis in patients undergoing heparin-free dialysis and those receiving appropriate reductions in heparin anticoagulation dosage during dialysis.Methods:This study was conducted from January 1,2021,to December 31,2021,involving 19 patients who regularly underwent heparin-free dialysis for more than three months at our hospital,totaling 70 patient encounters.Each patient underwent heparin-free dialysis for more than two cycles during the experimental period.The study employed a self-control design.Prior to the experiment,an experienced medical team established an emergency management group and formulated relevant emergency measures,ensuring the long-term stability of patients’vital signs before enrollment.Patients requiring heparin-free dialysis as per medical advice underwent the procedure according to the treatment manual without additional interventions.During the second heparin-free dialysis session within the experimental period,patients received 40 minutes of infrared lamp irradiation as an adjunctive therapy during the dialysis process.The study observed coagulation in the dialyzer,blood biochemical indicators,the occurrence of adverse reactions,and patient satisfaction during treatment.Results:The use of heparin-free dialysis combined with infrared irradiation therapy resulted in better coagulation outcomes compared to heparin-free dialysis alone(p<0.05).There was no statistically significant difference in blood biochemical indicators between patients receiving heparin-free dialysis combined with infrared irradiation therapy and those receiving heparin-free dialysis alone(p>0.05).There was no statistically significant difference in the number of patients experiencing adverse clinical symptoms such as angina,dizziness,and lower limb cramps,leading to treatment interruption,between those receiving heparin-free dialysis combined with infrared therapy and those receiving heparin-free dialysis alone(p>0.05).Patient satisfaction was higher among those receiving heparin-free dialysis combined with infrared therapy compared to those receiving heparin-free dialysis alone(p<0.05).Conclusion:The use of infrared lamp irradiation therapy as an adjunct to heparin-free dialysis can reduce the risk of coagulation to a certain extent without affecting the stability of core blood biochemical indicators in patients.It also reduces the incidence of clinical adverse reactions caused by coagulation,demonstrating good safety and improving patient satisfaction. 展开更多
关键词 Heparin-free dialysis Infrared lamp Heparin anticoagulation
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LAMP3基因表达与肾癌之间的因果关系:一项基于孟德尔随机化分析的研究
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作者 吴金海 王斌 朱学进 《广州医药》 2026年第1期88-94,共7页
目的探讨溶酶体相关膜蛋白3(LAMP3)与肾癌发病风险之间的因果关系,为肾癌的分子致病机制提供新的理论依据。方法基于全基因组关联研究(GWAS)数据,采用孟德尔随机化分析方法,评估LAMP3基因表达与肾癌的因果关系。并通过GEPIA2分析LAMP3... 目的探讨溶酶体相关膜蛋白3(LAMP3)与肾癌发病风险之间的因果关系,为肾癌的分子致病机制提供新的理论依据。方法基于全基因组关联研究(GWAS)数据,采用孟德尔随机化分析方法,评估LAMP3基因表达与肾癌的因果关系。并通过GEPIA2分析LAMP3表达对肾癌总体生存期(OS)及无病生存期(DFS)的关系。结果LAMP3基因变异与肾癌风险呈正相关,提示LAMP3的表达可能增加肾癌的发病风险。此外,GEPIA2分析进一步显示,LAMP3的高表达与肾癌患者的低总体生存期(OS)及无病生存期(DFS)显著相关。结论本研究通过孟德尔随机化分析探讨了LAMP3基因表达与肾癌的因果关系,结果表明LAMP3可能是肾癌的潜在致病因子,并与肾癌预后相关。这为肾癌的分子致病机制研究提供了重要的理论依据,并为未来的生物标志物和靶向治疗策略的开发提供了新的思路。 展开更多
关键词 孟德尔随机化 lamp3 肾癌
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LAMP方法检测布鲁氏菌的研究
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作者 鞠丽丽 陈雪娇 刘博 《中国地方病防治》 2026年第1期20-22,共3页
布鲁氏菌病(布病)是由布鲁氏菌引发的人兽共患病,快速准确的诊断对临床治疗与疫情防控至关重要。环介导等温扩增技术(LAMP)凭借其恒温、快速、高灵敏的特性,在布病病原学检测领域受到广泛关注[1]。本文系统综述LAMP技术检测布鲁氏菌的... 布鲁氏菌病(布病)是由布鲁氏菌引发的人兽共患病,快速准确的诊断对临床治疗与疫情防控至关重要。环介导等温扩增技术(LAMP)凭借其恒温、快速、高灵敏的特性,在布病病原学检测领域受到广泛关注[1]。本文系统综述LAMP技术检测布鲁氏菌的原理、优势、应用现状、面临挑战及发展前景,以期为相关研究与现场应用提供参考。 展开更多
关键词 布病 病原学检测 环介导等温扩增技术 lamp
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辣椒斑驳病毒RT-LAMP-LFD快速检测方法的建立
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作者 付康 张灿 +3 位作者 赵薇 马宁 俞晓平 孙凯 《浙江农业学报》 北大核心 2026年第2期310-316,共7页
辣椒斑驳病毒(PepMoV),隶属马铃薯Y病毒属(Potyvirus),是侵染辣椒的重要病毒之一。该病毒通过蚜虫以非持久方式传播,对浙江省辣椒产业造成严重威胁。为了实现该病毒的快速检测,本研究建立了一种基于逆转录环介导等温扩增(reverse transc... 辣椒斑驳病毒(PepMoV),隶属马铃薯Y病毒属(Potyvirus),是侵染辣椒的重要病毒之一。该病毒通过蚜虫以非持久方式传播,对浙江省辣椒产业造成严重威胁。为了实现该病毒的快速检测,本研究建立了一种基于逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP)结合横向流动试纸条(lateral flow dipstick, LFD)的检测方法,可实现PepMoV的快速可视化检测。针对PepMoV外壳蛋白(coat protein, CP)基因的保守序列,设计了一套特异性RT-LAMP引物。优化后的RT-LAMP-LFD方法在63℃恒温条件下,反应40 min,再进行5 min试纸条显色反应,即可完成样品检测。该方法在特异性和灵敏度方面表现优异,与传统RT-qPCR相比,灵敏度提高了10倍,为PepMoV的快速诊断提供了一种高效、便捷的工具,有望广泛应用于辣椒病害防控。 展开更多
关键词 辣椒斑驳病毒 RT-lamp-LFD 快速检测 植物检疫
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樱桃病毒A陕西分离物基因组扩增及RT-LAMP检测体系的建立
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作者 吴薇 刘斐 +1 位作者 李开国 刘欢 《植物保护》 北大核心 2026年第1期258-265,共8页
本研究获得了樱桃病毒A(cherry virus A,CVA)陕西安康樱桃分离物SXAK3-3和SXAK3-4的全基因组,全长分别为7440 nt和7436 nt,核苷酸一致性为80.77%。建立了CVA的反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amp... 本研究获得了樱桃病毒A(cherry virus A,CVA)陕西安康樱桃分离物SXAK3-3和SXAK3-4的全基因组,全长分别为7440 nt和7436 nt,核苷酸一致性为80.77%。建立了CVA的反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测技术并优化了反应条件和体系。该检测体系可特异检测CVA,对樱桃小果病毒2(little cherry virus 2,LChV-2)、李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、柑橘叶斑驳病毒(citrus leaf blotch virus,CLBV)和樱桃绿环斑驳病毒(cherry green ring mottle virus,CGRMV)4种樱桃病毒的检测结果均为阴性,其检测灵敏度是RT-PCR的100倍。RT-LAMP检测CVA的成本低、速度快、特异性强,在CVA抗病毒育种、苗木带毒检测、病毒早期监测等方面将发挥重要作用。 展开更多
关键词 樱桃病毒A 全基因组 反转录环介导等温扩增
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基于LAMP-CRISPR/Cas12a技术的食源性致病菌检测研究进展
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作者 齐鹭瑶 孙雪言 赵喜红 《农产品加工》 2026年第5期111-113,117,共4页
食源性致病菌的快速和准确诊断对于预防疾病传播至关重要。近年来,基于环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与规律间隔成簇短回文重复序列及其关联蛋白12a(Clustered regularly interspaced short palindromic... 食源性致病菌的快速和准确诊断对于预防疾病传播至关重要。近年来,基于环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与规律间隔成簇短回文重复序列及其关联蛋白12a(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)系统结合的现场即时检测(Point-of-care testing,POCT)技术得到了广泛关注。这2种技术的结合受益于LAMP技术高效性、短周期及对设备的低需求;同时,利用了CRISPR/Cas12a系统的特异性识别功能和反式切割活性的特性。二者协同有效地解决了传统方法在特异性测量方面的不足,使得联用方法具有高效、灵敏和高特异的优势,已成为食源性致病菌诊断领域的研究热点。综述了CRISPR/Cas12a联合LAMP技术在食源性致病菌检测中的应用,回顾了2种技术结合的优点和局限性,并提出了具体策略以克服这些局限性,降低技术复杂性并减少污染风险,从而设计出更实用的POCT平台。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 规律间隔成簇短回文重复序列及其关联蛋白12a 食源性致病菌 现场即时检测
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睡眠嗜组织菌可视化LAMP现场检测方法的建立及初步应用 被引量:1
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作者 李富祥 高华峰 +1 位作者 赵文华 宋建领 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期477-483,共7页
为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检... 为建立睡眠嗜组织菌(Hi.somni)可视化LAMP检测方法,笔者根据Hi.somni 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了Hi.somni可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示,本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58℃反应70 min。特异性试验结果显示,该方法能特异性地检测Hi.somni,与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His,敏感性较高。临床样品检测结果显示,LAMP方法和普通PCR方法检测Hi.somni的阳性率分别为11.49%(10/87)和9.20%(8/87),LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%(85/87)、100%(8/8)和97.47%(77/79)。结果表明,本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊Hi.somni感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 睡眠嗜组织菌 环介等温扩增 现场检测 山羊 绵羊
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水禽细小病毒LAMP及其可视化通用检测方法的建立
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作者 戴银 周慧琴 +9 位作者 谷思琴 胡晓苗 王洁茹 殷冬冬 尹磊 沈学怀 潘孝成 赵瑞宏 周学利 侯宏艳 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期63-68,共6页
为了建立鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)通用的检测方法,本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标,设计了1组特异性引物,优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增(LAMP)和LAMP-羟基萘酚蓝(HNB)可视化通用检测... 为了建立鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)通用的检测方法,本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标,设计了1组特异性引物,优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增(LAMP)和LAMP-羟基萘酚蓝(HNB)可视化通用检测方法,并对2种方法的特异性和灵敏性进行检测。采用常规PCR、LAMP和LAMP-HNB对10份水禽临床样品进行检测,以评估2种方法的实用性。结果显示,LAMP方法的最佳反应温度为65℃、反应时间为60 min。2种方法仅能扩增GPV和MDPV,而对其他5种常见水禽病毒的检测结果均为阴性,最低检出浓度均为1×10-5ng/μL。2种方法与常规PCR的检测结果一致,符合率达100%。结果表明,建立的LAMP方法和LAMP-HNB可视化方法具有灵敏性好、特异性高、仪器要求低和可视化等优点,可为水禽细小病毒的现场快速检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(MDPV) NS基因 环介导等温扩增(lamp) 可视化
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余甘子果实斑点病菌LAMP可视化检测方法的建立 被引量:1
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作者 赖多 王德林 +3 位作者 邵雪花 秦健 庄庆礼 肖维强 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期69-79,90,共12页
【目的】建立余甘子果实斑点病菌快速、便捷、灵敏、可视的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,为该病害的风险预判和科学防治提供依据。【方法】以余甘子果实斑点病致病菌间座壳菌(Diaporthe ph... 【目的】建立余甘子果实斑点病菌快速、便捷、灵敏、可视的环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,为该病害的风险预判和科学防治提供依据。【方法】以余甘子果实斑点病致病菌间座壳菌(Diaporthe phoenicicola)的翻译延伸因子EF-1α基因为靶序列,设计LAMP特异性扩增引物;以余甘子间座壳菌DNA为模板,优化反应温度、反应时间、dNTPs浓度、Mg^(2+)浓度和内外侧引物浓度比,建立LAMP检测最佳反应体系,测试其特异性和灵敏性,并对余甘子发病果实进行实际检测。【结果】适用于余甘子果实斑点病LAMP检测的最佳引物为引物组合4(EF4-F3/EF4-B3和EF4-FIP/EF4-BIP);LAMP检测最佳反应条件为dNTPs浓度1.0 mmol/L,Mg^(2+)浓度4 mmol/L,内外侧引物质量比6∶1,反应温度63℃,反应时间50 min。优化后的LAMP检测方法可特异性地检出余甘子间座壳菌(D.phoenicicola),检测灵敏度可达0.01 ng/μL,且在实际应用中准确率高达100%。【结论】首次建立了余甘子果实斑点病致病菌间座壳菌LAMP可视化快速检测方法,该方法特异性强、灵敏度高,操作简单,可用于田间余甘子果实斑点病菌的快速检测。 展开更多
关键词 余甘子 间座壳菌 环介导等温扩增技术 灵敏性 特异性 可视化
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绵羊无浆体LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的建立 被引量:3
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作者 郭心龙 周勇志 +4 位作者 曹杰 王亚楠 张厚双 段德勇 周金林 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期330-337,共8页
绵羊无浆体(Anaplasma ovis)是一种蜱传、寄生于红细胞内的细菌病原体,引起绵羊、山羊和野生反刍动物等发病,对我国养羊业发展造成严重危害。尽管已有多种绵羊无浆体诊断方法报道,但仍然缺少简易快捷、应用于现场的检测技术。本研究旨... 绵羊无浆体(Anaplasma ovis)是一种蜱传、寄生于红细胞内的细菌病原体,引起绵羊、山羊和野生反刍动物等发病,对我国养羊业发展造成严重危害。尽管已有多种绵羊无浆体诊断方法报道,但仍然缺少简易快捷、应用于现场的检测技术。本研究旨在建立一种针对绵羊无浆体msp4基因的LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法。该检测方法是在恒定温度下进行的,不需要特殊设备仪器,能够产生荧光呈现可视化的结果。通过优化LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的体系以确定各成分最佳浓度比。该检测方法能够检测到绵羊无浆体msp4基因最低质粒DNA拷贝数为3.90 copies/μL,具有较高的敏感性。检测其他无浆体和其他常见羊病原体时呈阴性,表明特异性良好。对临床样本的应用检测,与常规PCR检测结果符合率为100%。结果表明,建立的LAMP-CRISPR/Cas12a体系适用于绵羊无浆体的检测,具有快捷方便的现场诊断和在资源匮乏的情况下应用的优势。 展开更多
关键词 绵羊无浆体 msp4基因 lamp CRISPR
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烟草轻型绿花叶病毒RT-LAMP快速检测方法的建立与应用
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作者 秦艳红 鲁书豪 +8 位作者 陈须琨 文艺 高素霞 李绍建 杨瑾 李雪梦 郝学政 王飞 鲁传涛 《植物病理学报》 北大核心 2025年第6期1325-1334,共10页
为快速检测烟草轻型绿花叶病毒(tobacco mild green mosaic virus,TMGMV),本文根据TMGMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的保守序列设计了3组RT-LAMP引物进行筛选确定最佳引物组合;采用单一变量法对反应温度和反应时间进行优化,并将RT-PC... 为快速检测烟草轻型绿花叶病毒(tobacco mild green mosaic virus,TMGMV),本文根据TMGMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的保守序列设计了3组RT-LAMP引物进行筛选确定最佳引物组合;采用单一变量法对反应温度和反应时间进行优化,并将RT-PCR和RT-LAMP进行对比实验,验证优化后特异性检测、灵敏度比较及田间应用的实际性,建立了TMGMV RT-LAMP快速检测技术体系。结果表明:RT-LAMP最适反应条件为在65℃恒温扩增60 min,优化后的RT-LAMP灵敏度是常规RT-PCR的1000倍,可检测到模板的最低浓度为1.65×10-2拷贝·μL-1,检测过程中与其他相关病毒无交叉反应。对60份地黄样品的检测结果表明,RT-LAMP方法的检出率(100%)高于RT-PCR检出率(83.3%)。因此本研究建立的RT-LAMP检测技术可用于TMGMV的快速检测。 展开更多
关键词 烟草轻型绿花叶病毒 地黄 RT-lamp恒温扩增 可视化检测
原文传递
哈维氏弧菌LAMP可视化检测方法的建立 被引量:1
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作者 于劼豪 黄郁葱 +4 位作者 孙良娟 钟键 鲁义善 简纪常 蔡双虎 《海洋渔业》 北大核心 2025年第1期29-39,共11页
为提高哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)早期快速诊断水平,建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)技术的可视化快速检测方法。利用表达环二聚体磷酸二酯的VieA基因序列在哈维氏弧菌中的保守性,将其作为靶基因设计引物,并初步建立LAMP反应体系,对L... 为提高哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)早期快速诊断水平,建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)技术的可视化快速检测方法。利用表达环二聚体磷酸二酯的VieA基因序列在哈维氏弧菌中的保守性,将其作为靶基因设计引物,并初步建立LAMP反应体系,对LAMP反应体系中各反应物浓度、内外引物比例、反应时间和反应温度进行优化,并对优化后的LAMP反应的特异性和灵敏度进行检测;分别在优化后的LAMP反应体系中加入SYBR Green I、钙黄绿素-锰离子或羟基萘酚蓝作为指标剂对LAMP反应产物进行可视化判别,从而建立一种针对哈维氏弧菌的LAMP可视化检测方法。研究表明,该LAMP反应体系最佳反应温度60℃、反应时间60 min、Mg2+浓度1.2 mmol·L^(-1)、dNTPs浓度0.64 mmol·L^(-1)、甜菜碱浓度0.25 mmol·L^(-1)及内外引物比例16∶1;该反应体系能特异性检测到哈维氏弧菌,且灵敏度为3.4×10-6 ng·μL^(-1)。可视化指标剂钙黄绿素-锰离子的添加比例为12∶1或羟基萘酚蓝的添加浓度为390μmol·L^(-1)时,LAMP反应产物的可视化效果最好,临床应用表明,该LAMP可视化技术能准确并特异性地检测到珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×E.lanceolatus♂)和凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)组织中感染的哈维氏弧菌。研究提供了一种简单、快速和结果可视化的哈维氏弧菌LAMP检测方法,可以为水生动物哈维氏弧菌的现场检测和弧菌病的早期诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 lamp技术 可视化检测 临床应用
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团头鲂皮特不动杆菌环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测方法建立 被引量:2
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作者 张瑞轩 曹景龙 +2 位作者 王卫民 罗毅 黎洁 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期71-78,共8页
为了精准识别和监测鱼类中皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)的感染,针对团头鲂(Megalobrama amblycephala)源皮特不动杆菌的管家基因rpo B设计特异性扩增引物,通过反应体系和条件(包括反应温度、时间、Mg^(2+)浓度以及内、外、环引... 为了精准识别和监测鱼类中皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)的感染,针对团头鲂(Megalobrama amblycephala)源皮特不动杆菌的管家基因rpo B设计特异性扩增引物,通过反应体系和条件(包括反应温度、时间、Mg^(2+)浓度以及内、外、环引物用量比)优化及灵敏度和特异性检测,建立一种基于环介导等温扩增技术(LAMP)的快速检测方法。结果表明:Mg^(2+)最优浓度为6.0 mmol/L,内、外、环引物最优用量比为8∶1∶4,在63℃恒温条件下反应30 min即可检测到皮特不动杆菌,反应60 min可获得最优结果;该LAMP方法的灵敏度是常规PCR方法的100倍,最低检出量为1.4 cfu/m L;在特异性检测方面,该方法仅能检测出皮特不动杆菌,与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、摩根菌(Morganella morganii)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)以及鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)等7种常见致病菌均无交叉反应;此外,该方法既可以通过检测体系的颜色变化直观读取结果,也可以通过琼脂糖凝胶电泳分析结果。由此可见,本研究中所建立的针对团头鲂源皮特不动杆菌的LAMP快速检测方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,可用于水产养殖业皮特不动杆菌引起的细菌性败血症的现场快速检测。 展开更多
关键词 团头鲂 皮特不动杆菌 细菌性败血症 环介导等温扩增技术(lamp) RPOB 反应体系
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