目的:探讨泛素特异性蛋白酶18(ubiquitin specific peptidase 18,USP18)在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及意义,分析USP18的表达水平与宫颈癌临床病例特征的关系。方法:实时荧光定量PCR法检测USP18在30例新鲜宫颈癌组织及癌旁宫颈组织中m...目的:探讨泛素特异性蛋白酶18(ubiquitin specific peptidase 18,USP18)在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及意义,分析USP18的表达水平与宫颈癌临床病例特征的关系。方法:实时荧光定量PCR法检测USP18在30例新鲜宫颈癌组织及癌旁宫颈组织中mRNA的表达情况,蛋白免疫印迹法检测USP18在6例新鲜宫颈癌组织及癌旁宫颈组织中蛋白的表达情况,免疫组织化学染色方法检测USP18在60例宫颈癌及癌旁组织石蜡包埋标本中的蛋白表达情况,并分析USP18的表达与宫颈癌临床病理特征之间的相关性。结果:新鲜组织中,宫颈癌组织的USP18在mRNA水平和蛋白水平均显著高于癌旁宫颈组织(P<0.01,P<0.01);石蜡组织中,宫颈癌组织的USP18表达显著高于癌旁宫颈组织(86.7%vs 33.9%,P<0.01),USP18的表达与宫颈癌患者的年龄无显著相关性(P>0.05),但是与肿瘤分化程度和淋巴结转移情况有显著相关性(P<0.01)。结论:宫颈癌组织中USP18的表达显著升高,并与宫颈癌的分化转移相关,有望成为宫颈癌的一种新的分子标志物。展开更多
【背景】家禽卵泡发育具有独特的等级卵泡发育特性,受自分泌、旁分泌、生长因子和多种功能基因的共同调控。颗粒细胞是卵泡内数量最多的功能细胞,颗粒细胞的存活直接决定了卵泡的生长发育和成熟。铁死亡是一种新发现细胞程序性死亡方式...【背景】家禽卵泡发育具有独特的等级卵泡发育特性,受自分泌、旁分泌、生长因子和多种功能基因的共同调控。颗粒细胞是卵泡内数量最多的功能细胞,颗粒细胞的存活直接决定了卵泡的生长发育和成熟。铁死亡是一种新发现细胞程序性死亡方式,与卵泡发育密切相关。泛素特异性肽酶18(ubiquitin specific peptidase 18,USP18)在铁死亡过程中发挥重要的调控作用,但其在蛋鸭卵巢颗粒细胞中的功能尚不清楚。【目的】通过探究USP18在蛋鸭卵泡颗粒细胞铁死亡过程中的分子调控机制,为家禽产蛋性状的遗传改良提供理论基础和分子靶点。【方法】选取300日龄高、低产蛋鸭各4只,采集等级前卵泡组织,实时荧光定量PCR和Western blotting检测高、低产蛋鸭等级前卵泡组织中USP18表达水平;分离等级前颗粒细胞,设计USP18干扰片段并转染卵巢颗粒细胞,采用CCK-8试剂盒、Calcein-AM/PI细胞双染法检测USP18对颗粒细胞活力的影响,活性氧检测试剂盒和酶联免疫吸附法分析USP18对颗粒细胞内氧化应激水平的影响;利用线粒体膜电位试剂盒、脂质过氧化荧光探针、铁离子FerroOrange探针、普鲁士蓝试剂盒检测USP18对颗粒细胞铁死亡的影响;通过免疫荧光、免疫共沉淀和Western blotting分析USP18与谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白间的互作关系及GPX4蛋白表达水平。【结果】高产蛋鸭等级前卵泡组织中USP18表达量显著高于低产蛋鸭(P<0.01);敲降USP18显著降低颗粒细胞活力(P<0.01),抑制颗粒细胞存活(P<0.05),促进ROS积累(P<0.01),提高丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量(P<0.01),抑制超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性(P<0.01);敲降USP18显著提高颗粒细胞内脂质过氧化水平(P<0.05),降低线粒体膜电位(P<0.05),增强线粒体膜通透性(P<0.01),提高细胞内铁离子水平和铁沉积(P<0.01),促进铁死亡抑制因子A长链酰基辅酶A合成酶4(acyl-coA synthetase long chain family member 4,ACSL4)和GPX4表达并抑制铁死亡驱动因子转铁蛋白受体1(transferrin receptor protein 1,TFR1)表达(P<0.01);免疫共沉淀和免疫荧光证实USP18可与GPX4互作;Western blotting和免疫共沉淀结果显示敲降USP18提高GPX4泛素化水平并促进GPX4蛋白降解。【结论】USP18在高产蛋鸭等级前卵泡组织中高表达;敲降USP18显著提高了蛋鸭卵巢颗粒细胞内氧化应激水平并诱发铁死亡;USP18可与GPX4蛋白发生互作,敲降USP18提高GPX4泛素化水平并促进GPX4蛋白降解。综上所述,USP18通过抑制GPX4泛素化降解调控蛋鸭卵巢颗粒细胞铁死亡。展开更多
Ubiquitin-specific peptidase 18(USP18)plays an important role in the development of CD11b^(+)dendritic cells(DCs)and Th17 cells,however,its role in the differentiation of other T cell subsets,especially in regulatory ...Ubiquitin-specific peptidase 18(USP18)plays an important role in the development of CD11b^(+)dendritic cells(DCs)and Th17 cells,however,its role in the differentiation of other T cell subsets,especially in regulatory T(Treg)cells,is unknown.In our study,we used Usp18 K0 mice to study the loss of USP18 on the impact of Treg cell differentiation and function.We found that USP18 deficiency upregulates the differentiation of Treg cells,which may lead to disrupted homeostasis of peripheral T cells,and downregulates INF-y,IL-2,IL-17A producing CD4^(+)T cells and INF-γproducing CD8^(+)T cells.Mechanistically,we also found that the upre-gulation of Tregs is due to elevated expression of CD25 in Usp18 KO mice.Finally,we found that the suppressive function of Usp18 KO Tregs is downregulated.Altogether,our study was the first to identify the role of USP18 in Tregs differentiation and its suppressive function,which may provide a new reference for the treatment of Treg function in many autoimmune diseases,and USP18 can be used as a new therapeutic target for precise medical treatment.展开更多
文摘目的:探讨泛素特异性蛋白酶18(ubiquitin specific peptidase 18,USP18)在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及意义,分析USP18的表达水平与宫颈癌临床病例特征的关系。方法:实时荧光定量PCR法检测USP18在30例新鲜宫颈癌组织及癌旁宫颈组织中mRNA的表达情况,蛋白免疫印迹法检测USP18在6例新鲜宫颈癌组织及癌旁宫颈组织中蛋白的表达情况,免疫组织化学染色方法检测USP18在60例宫颈癌及癌旁组织石蜡包埋标本中的蛋白表达情况,并分析USP18的表达与宫颈癌临床病理特征之间的相关性。结果:新鲜组织中,宫颈癌组织的USP18在mRNA水平和蛋白水平均显著高于癌旁宫颈组织(P<0.01,P<0.01);石蜡组织中,宫颈癌组织的USP18表达显著高于癌旁宫颈组织(86.7%vs 33.9%,P<0.01),USP18的表达与宫颈癌患者的年龄无显著相关性(P>0.05),但是与肿瘤分化程度和淋巴结转移情况有显著相关性(P<0.01)。结论:宫颈癌组织中USP18的表达显著升高,并与宫颈癌的分化转移相关,有望成为宫颈癌的一种新的分子标志物。
文摘【背景】家禽卵泡发育具有独特的等级卵泡发育特性,受自分泌、旁分泌、生长因子和多种功能基因的共同调控。颗粒细胞是卵泡内数量最多的功能细胞,颗粒细胞的存活直接决定了卵泡的生长发育和成熟。铁死亡是一种新发现细胞程序性死亡方式,与卵泡发育密切相关。泛素特异性肽酶18(ubiquitin specific peptidase 18,USP18)在铁死亡过程中发挥重要的调控作用,但其在蛋鸭卵巢颗粒细胞中的功能尚不清楚。【目的】通过探究USP18在蛋鸭卵泡颗粒细胞铁死亡过程中的分子调控机制,为家禽产蛋性状的遗传改良提供理论基础和分子靶点。【方法】选取300日龄高、低产蛋鸭各4只,采集等级前卵泡组织,实时荧光定量PCR和Western blotting检测高、低产蛋鸭等级前卵泡组织中USP18表达水平;分离等级前颗粒细胞,设计USP18干扰片段并转染卵巢颗粒细胞,采用CCK-8试剂盒、Calcein-AM/PI细胞双染法检测USP18对颗粒细胞活力的影响,活性氧检测试剂盒和酶联免疫吸附法分析USP18对颗粒细胞内氧化应激水平的影响;利用线粒体膜电位试剂盒、脂质过氧化荧光探针、铁离子FerroOrange探针、普鲁士蓝试剂盒检测USP18对颗粒细胞铁死亡的影响;通过免疫荧光、免疫共沉淀和Western blotting分析USP18与谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白间的互作关系及GPX4蛋白表达水平。【结果】高产蛋鸭等级前卵泡组织中USP18表达量显著高于低产蛋鸭(P<0.01);敲降USP18显著降低颗粒细胞活力(P<0.01),抑制颗粒细胞存活(P<0.05),促进ROS积累(P<0.01),提高丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量(P<0.01),抑制超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性(P<0.01);敲降USP18显著提高颗粒细胞内脂质过氧化水平(P<0.05),降低线粒体膜电位(P<0.05),增强线粒体膜通透性(P<0.01),提高细胞内铁离子水平和铁沉积(P<0.01),促进铁死亡抑制因子A长链酰基辅酶A合成酶4(acyl-coA synthetase long chain family member 4,ACSL4)和GPX4表达并抑制铁死亡驱动因子转铁蛋白受体1(transferrin receptor protein 1,TFR1)表达(P<0.01);免疫共沉淀和免疫荧光证实USP18可与GPX4互作;Western blotting和免疫共沉淀结果显示敲降USP18提高GPX4泛素化水平并促进GPX4蛋白降解。【结论】USP18在高产蛋鸭等级前卵泡组织中高表达;敲降USP18显著提高了蛋鸭卵巢颗粒细胞内氧化应激水平并诱发铁死亡;USP18可与GPX4蛋白发生互作,敲降USP18提高GPX4泛素化水平并促进GPX4蛋白降解。综上所述,USP18通过抑制GPX4泛素化降解调控蛋鸭卵巢颗粒细胞铁死亡。
基金supported by National NaturalScience Foundation of China(grant numbers 81861138002,81722002,31970839,31900654)。
文摘Ubiquitin-specific peptidase 18(USP18)plays an important role in the development of CD11b^(+)dendritic cells(DCs)and Th17 cells,however,its role in the differentiation of other T cell subsets,especially in regulatory T(Treg)cells,is unknown.In our study,we used Usp18 K0 mice to study the loss of USP18 on the impact of Treg cell differentiation and function.We found that USP18 deficiency upregulates the differentiation of Treg cells,which may lead to disrupted homeostasis of peripheral T cells,and downregulates INF-y,IL-2,IL-17A producing CD4^(+)T cells and INF-γproducing CD8^(+)T cells.Mechanistically,we also found that the upre-gulation of Tregs is due to elevated expression of CD25 in Usp18 KO mice.Finally,we found that the suppressive function of Usp18 KO Tregs is downregulated.Altogether,our study was the first to identify the role of USP18 in Tregs differentiation and its suppressive function,which may provide a new reference for the treatment of Treg function in many autoimmune diseases,and USP18 can be used as a new therapeutic target for precise medical treatment.
