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人类痛风病与UOX基因沉默相关的研究 被引量：4
1
作者 楼秀余 《中外医学研究》 2012年第29期154-155,共2页
随着人们饮食结构和生活方式的改变,目前我国痛风病潜在发病人数已上升至一亿多,且发病人群日趋年轻化,因此越来越受到医学界的重视。医学界普遍认为,痛风是由嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄障碍所致,尿酸以钠盐的形式沉积在关节、软骨和肾脏中... 随着人们饮食结构和生活方式的改变,目前我国痛风病潜在发病人数已上升至一亿多,且发病人群日趋年轻化,因此越来越受到医学界的重视。医学界普遍认为,痛风是由嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄障碍所致,尿酸以钠盐的形式沉积在关节、软骨和肾脏中,引起组织异物炎性反应。其临床特点是高尿酸血症,痛风性急性关节炎反复发作,特征性慢性关节炎和关节畸形,常引起慢性间质性肾炎和肾尿酸结石的形成。笔者通过对痛风病的深入研究,发现除人类和一些灵长类、鸟类等少数动物会患痛风病外,绝大部分动物不会患痛风病。2010年笔者组织上海舒泽生物科技研究所的科研团队,通过人类基因组与不患痛风病动物基因组进行比较研究发现,人类和一些灵长类、鸟类动物UOX基因中存在无义突变而沉默,无法合成尿酸氧化酶(UrateOxidase;oxidase,EC1.7.3.3,UOX)或合成的UOX不具生物活性,在嘌呤降解代谢途径中以尿酸作为最终产物,尿酸无法及时排泄出体外,导致痛风病的发生。 展开更多
关键词 uox uox基因 嘌呤 无义突变 尿囊酸
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基于CRISPR/Cas9构建小鼠UOX基因敲除模型 被引量：2
2
作者 张茹君 夏海林 +2 位作者 朱赟 黄晶 孟雨菡 《中外医疗》 2020年第7期32-35,共4页
目的通过CRISPR/Cas9获得UOX基因敲除的小鼠纯合品系,为建立高尿酸血小鼠动物模型奠定基础。方法根据小鼠UOX基因第三外显子前后两个位点设计双sgRNA,通过PCR、体外转录和纯化获得sgRNA和Cas9 mRNA。将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射进小鼠... 目的通过CRISPR/Cas9获得UOX基因敲除的小鼠纯合品系,为建立高尿酸血小鼠动物模型奠定基础。方法根据小鼠UOX基因第三外显子前后两个位点设计双sgRNA,通过PCR、体外转录和纯化获得sgRNA和Cas9 mRNA。将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射进小鼠原核胚后,体外培养至二细胞胚阶段,进行胚胎移植至代孕母鼠。F0代小鼠出生后,提取其DNA进行电泳分析和测序分析。F0代交配繁殖至F2代获得UOX缺失的小鼠纯合品系。结果显微注射sgRNA和Cas mRNA至原核胚,成功获得50枚囊胚。移植后生育17只幼鼠。其中,有8只小鼠UOX基因缺失突变,突变率为47.06%。成功构建了UOX缺失的小鼠纯合品系。结论利用CRISPR/Cas9,成功获得UOX缺失的小鼠胚胎和纯合品系,为CRISPR/Cas9获得高尿酸血的小鼠动物模型奠定基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 uox 基因编辑 高尿酸 动物模型
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产朊假丝酵母尿酸氧化酶在乳酸乳球菌中的表达及其酶学性质
3
作者 时萍 刘远森 +4 位作者 彭静静 廖佳珺 吴庆龄 郭德军 王成华 《中国生物制品学杂志》 2025年第5期543-548,556,共7页
目的在乳酸菌中表达产朊假丝酵母尿酸氧化酶(urate oxidase,UOX),并进行酶学性质研究,为后续UOX的应用开发提供技术支持。方法将优化合成的UOX基因克隆至载体pTRKH2,构建重组表达质粒,电转入乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)NZ9000,筛选... 目的在乳酸菌中表达产朊假丝酵母尿酸氧化酶(urate oxidase,UOX),并进行酶学性质研究,为后续UOX的应用开发提供技术支持。方法将优化合成的UOX基因克隆至载体pTRKH2,构建重组表达质粒,电转入乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)NZ9000,筛选重组菌并表达带有His-tag标签的重组UOX(rUOX);以UOX酶活力为指标,优化重组菌发酵条件;采用镍离子金属螯合层析法纯化rUOX,并进行酶学性质表征。结果重组菌最佳表达条件为发酵温度37℃,发酵时间12 h,培养基初始pH 6,rUOX的最高酶活力达(44.57±0.43)U/mL。纯化的rUOX相对分子质量约为35000,与理论相对分子质量一致,比活为17.48 U/mg;rUOX的最适pH为11.5,最适温度为45℃,在最适条件下以尿酸为底物测定rUOX的米氏常数(K_(m))、最大反应速度(V_(max))及催化常数(k_(cat))值分别为5.72 mmol/L、71.25μmol/(L·min)和95.76/s;多种金属离子和化学试剂对rUOX具有抑制活性,Tween 20对rUOX具有明显的激活活性。结论UOX在乳酸菌中的重组表达是可行的,其酶活力较为稳定,为后续UOX在耐碱条件下的应用开发提供了实验依据。 展开更多
关键词 尿酸氧化酶 重组表达 乳酸菌 酶学性质 产朊假丝酵母
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高尿酸血症相关基因修饰的动物模型研究进展
4
作者 路永欣 李佳 谭文彬 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1361-1368,共8页
基因敲除技术日益成为建立高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)动物模型强有力的工具,HUA相关基因敲除的动物模型不仅有助于揭示尿酸代谢的分子机制,而且对于评估潜在治疗策略具有重要价值。通过查阅国内外文献详细探讨了基因敲除技术在构建... 基因敲除技术日益成为建立高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)动物模型强有力的工具,HUA相关基因敲除的动物模型不仅有助于揭示尿酸代谢的分子机制,而且对于评估潜在治疗策略具有重要价值。通过查阅国内外文献详细探讨了基因敲除技术在构建HUA动物模型中的应用,重点关注了尿酸氧化酶(urate oxidase,UOX)、葡萄糖转运蛋白9(glucose transporter 9,GLUT9)和ATP结合盒转运体G2(ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2)等蛋白的基因在实验动物中的敲除,以期为进一步利用基因敲除技术建立HUA动物模型提供参考和指导。 展开更多
关键词 基因敲除 高尿酸血症 动物模型 尿酸氧化酶 葡萄糖转运蛋白9
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黄曲酶尿酸氧化酶突变体的构建、表达、纯化及生物学活性分析 被引量：4
5
作者 张金龙 任军 +5 位作者 李冰 刘树玲 侯利华 付玲 李建民 陈薇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1102-1107,共6页
采用融合PCR的方法将黄曲霉尿酸氧化酶（uox）基因的307-309bp的TGC（Cys）突变为GCC（Ala），将所获得的突变体基因克隆到原核表达质粒pET-42a（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导，突变体蛋白（UOX—Ala^103）得到高水平的... 采用融合PCR的方法将黄曲霉尿酸氧化酶（uox）基因的307-309bp的TGC（Cys）突变为GCC（Ala），将所获得的突变体基因克隆到原核表达质粒pET-42a（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导，突变体蛋白（UOX—Ala^103）得到高水平的可溶性表达，目的蛋白占总蛋白含量的45％。疏水柱及阴离子柱纯化后，UOX-Ala^103蛋白纯度〉98％。Western blotting分析证实UOX—Ala加。能与抗UOX单抗特异结合。与天然型相比较，其体外生物学活性增加约60％，在高尿酸血症小鼠模型体内也有良好的降解尿酸的活性。 展开更多
关键词 黄曲霉尿酸氧化酶 突变体 半胱氨酸 表达 纯化 生物活性
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高尿酸血症对尿酸氧化酶基因敲除小鼠动脉粥样硬化的促进作用及其相关分子表达机制的研究 被引量：6
6
作者 邹耀武 房冬冬 +1 位作者 路杰 王静 《临床和实验医学杂志》 2020年第15期1569-1574,共6页
目的探讨高尿酸血症(HUA)在促进尿酸氧化酶基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)的作用以及相关分子表达的机制。方法①入组试验的为雄性SPF级C57BL6J鼠,10周龄,体重为26~28 g,共计24只,其中12只为尿酸氧化酶(UO)基因敲除(UOX-/-)小鼠,即KO小鼠... 目的探讨高尿酸血症(HUA)在促进尿酸氧化酶基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)的作用以及相关分子表达的机制。方法①入组试验的为雄性SPF级C57BL6J鼠,10周龄,体重为26~28 g,共计24只,其中12只为尿酸氧化酶(UO)基因敲除(UOX-/-)小鼠,即KO小鼠;另12只为野生型小鼠,即WT小鼠。将野生型小鼠采用随机数字表法分为WT组和WT套环组(行颈动脉套环干预的WT小鼠),将KO小鼠采用随机数字表法分为KO组和KO套环组(行颈动脉套环干预的KO小鼠)。四组小鼠均接受8周的高脂肪高胆固醇(HF/HC)西式饮食喂养,其中胆固醇含量0.15%,脂肪含量各为21.00%。②WT套环组和KO套环组于高脂饮食的第4周实施此项干预,完成AS模型的制备。③待实验进行至第4周与第8周,分别由实验动物尾静脉取血,检测血尿酸水平(SUA)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和C-反应蛋白(hs-CRP)水平。借助酶联免疫吸附法(ELISA)对其单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)以及细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的血清含量进行测定;④待实验至第8周,即对部分小鼠行动脉放置套环干预后的第4周,用过量水合氯醛将全部小鼠处死,分别提取各组小鼠的颈动脉组织,同时完成总RNA与蛋白质的提取,借助逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)对MCP-1、VCAM-1与ICAM-1在颈动脉内的mRNA表达强度进行测定,用Western blotting对上述3种因子于颈动脉内的蛋白表达强度进行测定。⑤此外,通过苏木精-伊红染色法对四组小鼠颈动脉血管的中膜面积与厚度进行分析。⑥利用免疫组化法(IHC)对巨噬细胞于颈动脉中浸润状况以及细胞核增殖抗原(PCNA)于血管平滑肌细胞(VSMC)内的表达状况进行测定。结果①在SUA、TG与HDL-C水平上,对比KO组和KO套环组,未发现明显不同,然而在这3项指标上,这两组相比WT组和WT套环组均处存在明显提高表现(P<0.05);在hs-CRP水平上,对比KO套环组和WT套环组,未见明显不同,但在此项指标上,这两组相比KO组和WT组均存在显著升高表现(P<0.05)。在LDL-C水平上,四组间未见明显不同。②经ELISA测定发现,在MCP-1含量上,相较于另3组,KO套环组显著较高(P<0.01);且在VCAM-1与ICAM-1含量上,该组相比WT组与WT套环组也明显较高(P<0.05),然而对比KO组未见明显不同。由RT-PCR法对ICAM-1、MCP-1与VCAM-1在颈动脉内mRNA表达强度的测定结果相符于ELISA法。经Western blotting测定发现,在颈动脉VCAM-1与ICAM-1蛋白表达强度上,相较于WT组与WT套环组,KO套环组均存在显著上升表现(P<0.05),然而对比KO组未发现明显不同。在MCP-1蛋白水平上,KO套环组有所上调,且相较于另3组表现为明显偏高(P<0.05)。③经苏木精-伊红染色实验发现,在中膜面积与厚度方面,相较于WT小鼠,UOX-/-小鼠存在明显升高表现(P<0.05),且相较于WT组和KO组,套环组明显偏高(P<0.05)。④经IHC检测发现,KO组与KO套环组,颈总动脉斑块中存在数量可观的F4/80+巨噬细胞浸润表现,但在WT组和WT套环组中,颈总动脉斑块中未见或只见小部分巨噬细胞浸润表现。⑤IHC检测结果表明,UOX-/-小鼠可见PCNA于颈动脉内皮细胞内表达明显,在内膜下可观察到明显增多的棕褐色颗粒。针对切片,借助图像分析软件实施分析计算,结果为,在PCNA表达方面,相较于WT组、WT套环组,另两组显著较高(P<0.01)。结论在HUA小鼠(UOX-/-小鼠)制备的AS模型中,高尿酸血症可使黏附分子表达上调、巨噬细胞浸润加剧、PCNA表达提升等,由此对AS的产生与加剧发挥促进作用。 展开更多
关键词 小鼠 尿酸氧化酶基因敲除 动脉粥样硬化 高尿酸血症 颈总动脉套环 细胞核增殖抗原
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