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ULBP3胞外段分子伴侣10融合蛋白的构建与表达
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作者 王宏 王玲 +2 位作者 徐莘香 王丽颖 于永利 《大连医科大学学报》 CAS 2004年第4期244-246,255,共4页
[目的 ]研究ULBP3基因的功能 ,构建、表达ULBP3胞外段分子伴侣 10重组融合蛋白。 [方法 ]将ULBP3胞外段cDNA连接在重组原核表达质粒 pET2 8a -chaperonin10中chaperonin10基因的下游 ,构建chaperonin10 -ULBP3融合基因的 pET2 8a原核表... [目的 ]研究ULBP3基因的功能 ,构建、表达ULBP3胞外段分子伴侣 10重组融合蛋白。 [方法 ]将ULBP3胞外段cDNA连接在重组原核表达质粒 pET2 8a -chaperonin10中chaperonin10基因的下游 ,构建chaperonin10 -ULBP3融合基因的 pET2 8a原核表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,以IPTG诱导表达 ,Westernblot鉴定。 [结果 ]酶切鉴定证实 ,chaperonin10 -ULBP3融合基因的 pET2 8a原核表达载体构建正确 ,该原核表达载体转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后 ,经筛选获得的阳性重组菌稳定表达chaperonin10 -ULBP3重组融合蛋白。 [结论 ]成功表达了ULBP3胞外段重组融合蛋白 ,可进一步用于ULBP3功能实验研究。 展开更多
关键词 ulbp3 重组蛋白 融合蛋白
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ULBP3基因转染提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性
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作者 王宏 王玲 +3 位作者 李建军 徐莘香 王丽颖 于永利 《中国骨肿瘤骨病》 CAS 2004年第3期167-171,共5页
目的 观察ULBP3基因转染对人外周血NK细胞对Saos -2细胞杀伤活性的影响。方法 用RT -PCR方法从人成骨肉瘤组织中提取ULBP3基因 ,构建pcDNA3真核表达质粒 ,以Lipofectamine为载体转染人成骨肉瘤Saos-2细胞 ,用percoll密度梯度离心法分... 目的 观察ULBP3基因转染对人外周血NK细胞对Saos -2细胞杀伤活性的影响。方法 用RT -PCR方法从人成骨肉瘤组织中提取ULBP3基因 ,构建pcDNA3真核表达质粒 ,以Lipofectamine为载体转染人成骨肉瘤Saos-2细胞 ,用percoll密度梯度离心法分离人外周血NK细胞作为效应细胞 ,以Saos -2细胞和转染ULBP3基因的Saos-2细胞作为靶细胞 ,进行体外杀伤实验 ,比较两组的特异性杀伤率。结果 在效靶比为 3 0∶1时人外周血NK细胞对转染ULBP3基因的Saos-2细胞的特异性杀伤率明显高于对照组。结论 ULBP3基因转染能提高人外周血NK细胞对人成骨肉瘤Saos-2细胞的杀伤活性。 展开更多
关键词 ulbp3 基因转染 外周血NK细胞 成骨肉瘤 SAOS-2 细胞活性
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ULBP3胞外段基因的克隆与表达
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作者 王玲 王宏 +2 位作者 徐莘香 王丽颖 于永利 《中国骨肿瘤骨病》 CAS 2004年第6期355-357,365,共4页
目的 为了研究ULBP3刺激NK细胞增殖分化的功能 ,首先需构建、表达ULBP3胞外段重组蛋白。方法 用RT -PCR方法从人结肠癌组织中钓取ULBP3胞外段基因 ,构建pET3 2a原核表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1 ,以IPTG诱导表达 ,Westernblot鉴定。... 目的 为了研究ULBP3刺激NK细胞增殖分化的功能 ,首先需构建、表达ULBP3胞外段重组蛋白。方法 用RT -PCR方法从人结肠癌组织中钓取ULBP3胞外段基因 ,构建pET3 2a原核表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1 ,以IPTG诱导表达 ,Westernblot鉴定。结果 经测序证实 ,所获得的cDNA克隆为ULBP3胞外段基因 ,其序列与genebank中已经发表的序列完全一致 ,pET3 2a原核表达载体转化大肠杆菌BL2 1后 ,经筛选获得的阳性重组菌稳定表达ULBP3胞外段重组蛋白。结论 成功表达了ULBP3胞外段重组蛋白 ,可用于进一步研究ULBP3刺激NK细胞增殖分化的功能。 展开更多
关键词 胞外段 基因 RT-PCR方法 细胞增殖分化 原核表达载体 Western 重组蛋白 人结肠癌组织 cDNA克隆 BL21 大肠杆菌 诱导表达 BLOT 稳定表达 重组菌 步研究 NK 转化 序列
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人UL16结合蛋白3的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量:4
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作者 秦伟 毛朝明 +4 位作者 王胜军 吴蔚 牟笑 许化溪 包丹霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期520-523,共4页
目的:表达和纯化人UL16结合蛋白3(ULBP3)胞外段融合蛋白,制备兔抗人ULBP3多克隆抗体。方法:利用PCR技术获得人ULBP3分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建出重组表达质粒pQE30-ULBP3(aa30-171)。测序鉴定正确... 目的:表达和纯化人UL16结合蛋白3(ULBP3)胞外段融合蛋白,制备兔抗人ULBP3多克隆抗体。方法:利用PCR技术获得人ULBP3分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建出重组表达质粒pQE30-ULBP3(aa30-171)。测序鉴定正确后转化入大肠杆菌感受态细胞M15,经IPTG 30℃诱导4 h后,SDS-PAGE显示融合蛋白(表达产物)以包涵体形式存在。用镍柱对融合蛋白进行纯化,将纯化的蛋白免疫新西兰白兔,采用流式细胞术(FCM)、Western blot法和免疫组化染色对所得多克隆抗体的生物学特性进行鉴定。结果:成功表达及纯化了人ULBP3(aa30-171)重组蛋白。结果显示该多克隆抗体能够识别大肠癌细胞株COLO205表面表达的天然构象ULBP3分子,而且能与结直肠癌组织细胞的ULBP3分子结合。结论:成功构建了原核表达载体pQE30-ULBP3(aa30-171),并获得高纯度的人pQE30-ULBP3(aa30-171)重组蛋白;成功制备了兔抗人ULBP3分子的多克隆抗体。 展开更多
关键词 ulbp3 NKG2D 多克隆抗体
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食管鳞状细胞癌组织UL16结合蛋白3的表达和临床意义及与自然杀伤细胞的相关性 被引量:1
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作者 陈德玉 汪茜茜 毛朝明 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期679-683,共5页
目的研究UL16结合蛋白3(ULBP3)在食管鳞状细胞癌组织中的表达和临床意义及与NK细胞的相关性。方法应用实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色法以及Western印迹技术检测40份食管鳞状细胞癌组织和相应癌旁组织中ULBP3的相对表达,并运用... 目的研究UL16结合蛋白3(ULBP3)在食管鳞状细胞癌组织中的表达和临床意义及与NK细胞的相关性。方法应用实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色法以及Western印迹技术检测40份食管鳞状细胞癌组织和相应癌旁组织中ULBP3的相对表达,并运用流式细胞术检测同一患者外周血中NK细胞的百分比,Pearson法分析NK细胞百分比与ULBP3之间的关系。结果40份食管鳞状细胞癌组织中,ULBP3mRNA的相对表达量显著高于相应癌旁组织[(4.96±6.11)×10^-3比(1.64±2.96)×10^-3,t=3.656,P〈0.01]。免疫组织化学结果显示ULBP3蛋白在60%(24/40)的食管鳞状细胞癌组织中呈阳性而在癌旁组织中仅有32.5%(13/40)阳性(t=3.921,P〈0.01)。Western印迹结果显示食管鳞状细胞癌组织中ULBP3蛋白表达量较相应癌旁组织丰富;淋巴结有转移者和TNMIII期患者肿瘤组织的ULBP3mRNA相对表达量高于无转移及Ⅰ和Ⅱ期组织(t=4.839,4.192,P〈0.05),而与年龄、性别、肿瘤位置、分化程度无明显相关性(P〉0.05)。在肿瘤的早中期,ULBP3mRNA的表达量与外周血NK细胞的含量呈正相关(r=0.5233,P〈0.05),但在晚期肿瘤中无明显相关性。结论ULBP3在食管鳞状细胞癌中高表达,并可能参与了NK细胞的免疫调节。 展开更多
关键词 食管肿瘤 鳞状细胞 ulbp3蛋白 核糖核酸 信使 杀伤细胞 天然
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