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伪狂犬病病毒变异株UL43和UL56基因失活株的构建与生物学特性分析
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作者 吕家轩 张传健 +3 位作者 王志胜 何青 王继春 费荣梅 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第6期34-41,共8页
为探究UL43与UL56基因失活对伪狂犬病病毒(PRV)变异株毒力的影响,本研究基于伪狂犬病病毒(PRV)变异株AH02LA细菌人工染色体(BAC)BACPRV-G,应用En Passant操作技术,分别将UL43与UL56基因的起始密码子进行点突变,获得两株重组BAC株:BACPRV... 为探究UL43与UL56基因失活对伪狂犬病病毒(PRV)变异株毒力的影响,本研究基于伪狂犬病病毒(PRV)变异株AH02LA细菌人工染色体(BAC)BACPRV-G,应用En Passant操作技术,分别将UL43与UL56基因的起始密码子进行点突变,获得两株重组BAC株:BACPRV-G-UL43^(mut)与BACPRV-G-UL56^(mut)。之后将携带同源臂的PRV AH02LA gE/gI基因分别于BACPRV-G-UL43^(mut)和BACPRV-G-UL56^(mut)共转染猪睾丸(ST)细胞,从而获得重组病毒PRV-UL43^(mut)和PRV-UL56^(mut)。生长动力学试验显示PRV-UL43^(mut)病毒滴度在感染后12 h有升高趋势,表明UL43基因可能在感染细胞早期抑制病毒增殖;PRV-UL56^(mut)与亲本毒株PRV AH02LA生长动力学相似,表明UL56基因对病毒生长性能无显著影响。荧光定量PCR试验发现UL56基因可抑制感染细胞早期主要组织相容性复合物Ⅰ类分子的转录。此外,小鼠致病力试验显示,相较于亲本毒PRV AH02LA(LD_(50)=10-3.26/0.2 mL),PRV-UL43^(mut)(LD_(50)=10-2.63/0.2 mL)与PRV-UL56^(mut)(LD_(50)=10-2.19/0.2 mL)对小鼠的致病力均降低,表明UL43基因与UL56基因可能介导病毒对小鼠的致病性。本研究成功构建了PRV变异株UL43、UL56基因失活株,为进一步揭示PRV免疫逃逸的机制奠定基础,也为研制更加安全有效的PRV弱毒疫苗提供理论依据。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 细菌人工染色体 ul43 UL56 点突变 生物学特性
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猪伪狂犬病病毒四川株的分离鉴定及UL43基因序列分析 被引量：6
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作者 王小玉 李小欢 +7 位作者 郭万柱 左健 韩国全 李宇 徐志文 王印 朱玲 Xiao-yu Xiao-huan Wan-zhu Guo-quan Zhi-wen 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第10期10-14,共5页
从四川某猪场发病仔猪体内分离到1株病毒,该毒株能在Vero、MDBK、PK15、ST、MDCK、BHK21、Marc145、鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖并产生细胞病变。通过蚀斑克隆对其进行纯化,克隆毒株在Vero细胞上为3.0×107TC ID50/0.1mL。该病毒在V... 从四川某猪场发病仔猪体内分离到1株病毒,该毒株能在Vero、MDBK、PK15、ST、MDCK、BHK21、Marc145、鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖并产生细胞病变。通过蚀斑克隆对其进行纯化,克隆毒株在Vero细胞上为3.0×107TC ID50/0.1mL。该病毒在Vero细胞上连传15代,其TCID50变化很小。病毒对5-溴脱氧尿核苷、氯仿敏感。用该病毒接种家兔和仔猪均出现典型的伪狂犬病症状,gE-ELISA检测接种分离毒的仔猪血清,伪狂犬病毒(PRV)抗体阳性。电镜观察可见直径110～140 nm的典型疱疹病毒粒子。上述结果表明分离株为PRV,并命名为SE株。根据已发表的UL43序列设计1对引物,以分离毒株基因组DNA为模板进行PCR扩增,对目的产物进行克隆及测序分析,结果与GenBank收录的其他PRV毒株(Becker、Ea)的UL43核苷酸序列同源性为98.8%,氨基酸同源性分别为95.2%、97.3%。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 四川 分离鉴定 基因序列分析 sequence analysis 毒株基因组 Vero细胞 鸡胚成纤维细胞 仔猪 蚀斑克隆 分离毒 氨基酸同源性 TCID50 序列同源性 伪狂犬病毒 脱氧尿核苷 PRV 序列设计 细胞病变 抗体阳性
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