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马立克病毒UL36^(USP)蛋白的表达及其抗体制备 被引量：6
1
作者 郑海南 邓晨 +5 位作者 王梦云 金雯 吴山力 吕岩 于子阳 艾永兴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期712-716,共5页
UL36USP是马立克病毒UL36基因编码的蛋白UL36上具有去泛素化酶活性的N-端部分片段(UL36USP),本试验以提取MDCC-MSB1细胞的基因组为模板通过PCR获得目的基因,将UL36USP基因克隆入pMD18T载体,测序正确并酶切鉴定后,将目的基因亚克隆到pET... UL36USP是马立克病毒UL36基因编码的蛋白UL36上具有去泛素化酶活性的N-端部分片段(UL36USP),本试验以提取MDCC-MSB1细胞的基因组为模板通过PCR获得目的基因,将UL36USP基因克隆入pMD18T载体,测序正确并酶切鉴定后,将目的基因亚克隆到pET28a原核表达载体,构建重组质粒pET28a-UL36USP。将重组质粒转化BL21(DE3)E.coli中,IPTG诱导表达并使用Ni-NTA Agarose亲和层析进行纯化得到目的蛋白。应用纯化后的UL36USP免疫獭兔制备多克隆抗体。使用昆虫细胞表达系统表达的UL36片段检测多克隆抗体的特异性。结果显示成功制备特异性的UL36USP抗体。 展开更多
关键词 ul36基因 马立克病毒 去泛素化 多克隆抗体
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去泛素化酶UL36的抑制剂LDN57444抑制马立克氏病病毒的增殖 被引量：3
2
作者 王文婧 范青松 +7 位作者 刘宇航 王婷 邓国辉 谢知航 王梦涵 吕岩 许家翠 艾永兴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1949-1957,共9页
马立克氏病病毒(MDV)引起的鸡马立克氏病(MD)可用疫苗进行防御,但疫苗无法阻止MDV对鸡的感染以及MDV的传播和毒力的增强,MD仍为养禽业的重要威胁。而抑制细胞内MDV增殖是增强疫苗防御效果的重要策略,化学药物无疑是重要的选择之一。本... 马立克氏病病毒(MDV)引起的鸡马立克氏病(MD)可用疫苗进行防御,但疫苗无法阻止MDV对鸡的感染以及MDV的传播和毒力的增强,MD仍为养禽业的重要威胁。而抑制细胞内MDV增殖是增强疫苗防御效果的重要策略,化学药物无疑是重要的选择之一。本研究在前期研究基础上,以MDV编码的去泛素化酶UL36为靶点,经高通量筛选,从蛋白酶抑制剂库中筛选出对UL36去泛素化酶的活性具有抑制作用的化合物LDN57444,应用酶抑制动力学方法揭示,LDN57444以非竞争性方式抑制UL36去泛素化酶活性,IC_(50)为3.10μmol/L。同源建模结合分子对接分析发现,LDN57444结合于UL36-480的C末端口袋中,通过氢键、Pi-Sigma作用、Pi-Pi堆积作用、Pi-Alkyl作用等方式与UL36-480互作,进而抑制UL36-480的活性。进一步在细胞水平,应用MDV致CEF的CPE模型分析LDN57444对MDV在CEF细胞中的增殖的抑制作用,结果发现,5,20μmol/L的LDN57444可显著抑制CPE的形成,并抑制MDV在CEF细胞内的增殖(P<0.01)。同时,应用MD鸡模型分析LDN57444是否可以抑制MDV在鸡体内的增殖,结果发现,每日高于0.5 mg/kg给药可显著抑制MDV在鸡体内的增殖(P<0.01)。本研究结果表明,化合物LDN57444可以抑制MDV在细胞及动物体内增殖,为进一步研制抗MD药物提供了可靠的依据。 展开更多
关键词 去泛素化酶ul36 马立克氏病病毒 抑制剂LDN57444 CEF细胞
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伪狂犬病病毒UL36蛋白单克隆抗体的制备和鉴定 被引量：1
3
作者 陈玲超 王兴娅 +11 位作者 李俊波 李佳佳 王晨 李松楠 王安铖 孟鑫 童武 孔宁 于海 单同领 童光志 郑浩 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期373-378,共6页
伪狂犬病病毒UL36基因编码的皮层蛋白VP1/2在病毒粒子组装过程中发挥重要作用。本试验以UL36基因为研究对象,将截短的UL36基因克隆入载体pCold I,构建了重组原核表达质粒pCold I-UL36。经诱导表达,将包涵体形式表达的重组蛋白经过变性... 伪狂犬病病毒UL36基因编码的皮层蛋白VP1/2在病毒粒子组装过程中发挥重要作用。本试验以UL36基因为研究对象,将截短的UL36基因克隆入载体pCold I,构建了重组原核表达质粒pCold I-UL36。经诱导表达,将包涵体形式表达的重组蛋白经过变性、亲和层析及复性后获得了纯度较高的蛋白。将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合和间接ELISA方法筛选出1株能稳定分泌针对UL36蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,被命名为UL36-6,抗体亚型鉴定结果为Ig G1和κ,制备的腹水抗体中和效价及纯度高,Western-blot和间接免疫荧光试验结果表明单克隆抗体具有很好的特异性。综上所述,本研究成功制备出1株针对PRV UL36蛋白的单克隆抗体,为深入研究UL36蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 ul36基因 VP1/2 单克隆抗体
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鸡马立克氏病毒UL36^(USP)的pTYB1表达载体的构建及表达分析
4
作者 金雯 王梦云 +3 位作者 余致君 郑海南 邓晨 艾永兴 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期223-227,共5页
UL36USP是马立克氏病毒UL36基因编码的蛋白UL36上具有去泛素化酶活性的N-端部分片段(UL36USP),为获取无冗余氨基酸残基的纯净UL36USP蛋白。试验采用p TYB1表达载体与目的基因UL36USP构建重组表达质粒,并诱导融合蛋白表达,在含有还原剂DT... UL36USP是马立克氏病毒UL36基因编码的蛋白UL36上具有去泛素化酶活性的N-端部分片段(UL36USP),为获取无冗余氨基酸残基的纯净UL36USP蛋白。试验采用p TYB1表达载体与目的基因UL36USP构建重组表达质粒,并诱导融合蛋白表达,在含有还原剂DTT的缓冲液中利用Intein发挥内含肽的剪切活性,将UL36USP从融合蛋白上分离出来,实现目的蛋白UL36USP的单柱纯化,纯化后的蛋白不带有冗余的氨基酸残基,并利用UL36和Intein的特异性抗体进行了Western Blot鉴定。该研究尝试了一种能有利于难表达蛋白的可溶性表达的方法,并利用Intein标签的剪切活性分离产生纯净的目的蛋白,如一些难表达的病毒蛋白,为抗病毒和抗肿瘤疫苗的研究提供材料。 展开更多
关键词 鸡马立克氏病毒 内涵肽 P TYB1 ul36 去泛素化酶 病毒蛋白
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鸭瘟病毒UL36基因的生物信息分析
5
作者 戴碧红 杨文 李福泉 《兽医导刊》 2021年第6期13-13,共1页
鸭瘟病毒UL36蛋白是该病毒皮层结构的主要成分,也是主要的抗原蛋白。本文利用生物信息学方法就基因序列与蛋白组分分析、信号肽预测、跨膜区预测与亚细胞定位等方面对该基因及编码蛋白序列进行分子特性分析,以便为后期实验研究提供参考... 鸭瘟病毒UL36蛋白是该病毒皮层结构的主要成分,也是主要的抗原蛋白。本文利用生物信息学方法就基因序列与蛋白组分分析、信号肽预测、跨膜区预测与亚细胞定位等方面对该基因及编码蛋白序列进行分子特性分析,以便为后期实验研究提供参考依据。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 ul36 生物信息
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单纯疱疹病毒UL36蛋白生物特性分析
6
作者 戴碧红 《内江科技》 2016年第6期84-84,共1页
单纯疱疹病毒是自然界中常见的疱疹病毒,其基因组约编码70多种蛋白质。本文对其中一种重要的编码蛋白UL36,利用生物信息学相关软件及在线网站,对该编码蛋白进行生物特性分析。分析结果表明,该蛋白不含信号肽切割位点,不含跨膜区,预测为... 单纯疱疹病毒是自然界中常见的疱疹病毒,其基因组约编码70多种蛋白质。本文对其中一种重要的编码蛋白UL36,利用生物信息学相关软件及在线网站,对该编码蛋白进行生物特性分析。分析结果表明,该蛋白不含信号肽切割位点,不含跨膜区,预测为一种膜外蛋白。亚细胞定位显示该蛋白主要定位于质膜与细胞核。 展开更多
关键词 编码蛋白 单纯疱疹病毒 ul36 在线网站 切割位点 亚细胞定位 信号肽序列 特性分析 原核表达载体 SIMPLEX
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马立克氏病毒UL36蛋白的表达及其去泛素化酶活性分析 被引量：1
7
作者 王梦云 周宏达 +3 位作者 韦美甜 吕岩 吴山力 艾永兴 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第5期77-82,共6页
选取马立克氏病毒(MDV)去泛素化酶UL36蛋白N端具有蛋白酶活性的一段氨基酸序列,表达纯化并分析UL36的去泛素化酶活性特点。利用p Cold TF为表达载体,并在UL36-323的C端连接Strep tagⅡ作为纯化标签,构建重组质粒p Cold TF-UL36-Strep。... 选取马立克氏病毒(MDV)去泛素化酶UL36蛋白N端具有蛋白酶活性的一段氨基酸序列,表达纯化并分析UL36的去泛素化酶活性特点。利用p Cold TF为表达载体,并在UL36-323的C端连接Strep tagⅡ作为纯化标签,构建重组质粒p Cold TF-UL36-Strep。应用大肠杆菌表达体系,低温诱导表达,并对该段蛋白进行纯化,得到可溶且纯度较高的蛋白后,通过Western blot确定所纯化的蛋白即是UL36蛋白。应用Di-Ub(K48)和SUMO1-GST作为底物鉴定其去泛素化酶活性。最终得到了可溶且纯度较高的UL36-323-Strep蛋白,并且通过酶切反应确定了其去泛素化酶活性,为进一步探究UL36在MDV感染及复制中的作用奠定前期基础,也为探究MDV的致病机理提供了必要的前提条件。 展开更多
关键词 MDV ul36 蛋白纯化 去泛素化酶
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MDV被膜蛋白UL36的去泛素化活性研究
8
作者 郑海南 赵程程 +3 位作者 吴涵 吴山力 张玉静 艾永兴 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第S1期377-377,共1页
许多病毒的被膜在病毒的结构组成及病毒入侵宿主细胞的过程中起着重要的作用。应用HA-Ub VEM探针发现疱疹病毒的大被膜蛋白UL36的氨基端约300~500个氨基酸残基部分具有去泛素化蛋白水解酶(USP)活性,并且其活性与C-端结合结构域部分无关... 许多病毒的被膜在病毒的结构组成及病毒入侵宿主细胞的过程中起着重要的作用。应用HA-Ub VEM探针发现疱疹病毒的大被膜蛋白UL36的氨基端约300~500个氨基酸残基部分具有去泛素化蛋白水解酶(USP)活性,并且其活性与C-端结合结构域部分无关。生物信息学分析发现在α-疱疹病毒中,UL36的去泛素化蛋白水解酶(UL36USP)的部分非常保守,甚至在β-、γ- 展开更多
关键词 泛素化 蛋白水解酶 MDV ul36 生物信息学分析 宿主细胞 结构域 氨基酸残基 细胞周期调控 氨基端
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去泛素化酶抑制剂b-AP15抑制马立克氏病病毒的复制 被引量：1
9
作者 于翀 王文婧 +7 位作者 谢知航 周正轩 王婷 范青松 王梦涵 吕岩 许家翠 艾永兴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1894-1901,共8页
为了探寻对马立克氏病病毒(MDV)增殖具有靶向抑制作用的药物,本研究以MDV编码的去泛素化酶UL36为靶点,利用去泛素化反应体系,对2448个化合物进行筛选,应用泛素荧光底物分析抑制物对UL36的抑制动力学,并应用MDV致鸡胚成纤维细胞(CEF)病... 为了探寻对马立克氏病病毒(MDV)增殖具有靶向抑制作用的药物,本研究以MDV编码的去泛素化酶UL36为靶点,利用去泛素化反应体系,对2448个化合物进行筛选,应用泛素荧光底物分析抑制物对UL36的抑制动力学,并应用MDV致鸡胚成纤维细胞(CEF)病变模型(CPE)和MDV致鸡马立克氏病(MD)模型分析抑制物对MDV在鸡细胞中复制的影响。结果发现,化合物b-AP15在高于5μmol/L浓度时可显著地非竞争性抑制3 nmol/L UL36的酶活性(P<0.01)。b-AP15对CEF的安全浓度小于1μmol/L,0.25,0.50μmol/L的b-AP15可以显著抑制MDV在CEF上的CPE形成以及在CEF细胞内的复制(P<0.01)。以2,5 mg/(kg·d)b-AP15对MDV攻毒雏鸡通过腹腔给药治疗,可显著抑制MDV在鸡T细胞内的复制(P<0.01)。这些结果说明,去泛素化酶抑制剂b-AP15可抑制MDV在鸡细胞内的复制。 展开更多
关键词 去泛素化酶ul36 马立克氏病病毒 抑制剂b-AP15
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与自噬相关蛋白Becline 1相互作用的猪伪狂犬病毒蛋白的筛选与鉴定
10
作者 侯琳琳 孙明霞 +7 位作者 王海明 汤艳东 刘永刚 涂亚斌 姜成刚 王淑杰 王刚 蔡雪辉 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期14-17,287,共5页
为了对与自噬相关蛋白Becline 1相互作用的猪伪狂犬病毒蛋白进行筛选和鉴定,试验进行了pull-down、Shotgun质谱分析和免疫共沉淀(Co-IP)以及激光共聚焦检测。结果表明:病毒蛋白UL36与Becline 1之间可能存在相互作用关系;UL36-1与Beclin... 为了对与自噬相关蛋白Becline 1相互作用的猪伪狂犬病毒蛋白进行筛选和鉴定,试验进行了pull-down、Shotgun质谱分析和免疫共沉淀(Co-IP)以及激光共聚焦检测。结果表明:病毒蛋白UL36与Becline 1之间可能存在相互作用关系;UL36-1与Becline 1蛋白之间具有稳定的相互作用关系,相互作用区域位于UL36的去泛素酶区域;UL36-1与Becline 1共定位于胞浆中。说明自噬相关蛋白Becline 1与猪伪狂犬病毒蛋白UL36的去泛素酶区域存在相互作用。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 自噬 Becline 1 ul36 pull—down 蛋白相互作用
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