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UBC9介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用研究
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作者 马凌桔 迟宏扬 +9 位作者 吴昕雪 马福军 田彦成 赵彩齐 何天宇 彭红建 姜怡邓 杨力 黄晖 马胜超 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期11-17,共7页
目的探讨泛素结合酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用。方法首先采用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)法和Western blot检测不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μm... 目的探讨泛素结合酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用。方法首先采用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)法和Western blot检测不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L和200μmol/L)同型半胱氨酸对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)的活力及焦亡的影响;采用Western blot检测不同组细胞中UBC9、SUMO化修饰蛋白SUMO-1、炎症因子IL-1β的表达水平;qRT-PCR检测干扰前后UBC9的mRNA表达,同时检测干扰UBC9后,UBC9、焦亡相关蛋白、IL-1β及SUMO-1相关表达。结果当采用100μmol/L的Hcy刺激后,巨噬细胞的活力影响最小且焦亡蛋白NLRP3、Caspase-1表达最明显(P<0.001);与Control组相比,Hcy组IL-1β的表达水平升高(P<0.01),SUMO-1表达升高(P<0.01);与Control组相比,Hcy组中UBC9蛋白水平及mRNA水平表达均增高(P<0.05);转染si-UBC9后,与si-NC+Hcy组相比,si-UBC9+Hcy组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、UBC9、SUMO-1表达降低(P<0.01)。结论同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡的发生,其机制与上调泛素结合酶9发生SUMO化修饰有关。 展开更多
关键词 ubc9 SUMO化 巨噬细胞 同型半胱氨酸 细胞焦亡
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冠突曲霉UBC与MAT1-2-1互作关系验证及功能研究
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作者 张胜花 费正林 +3 位作者 杨胡艳 孙冰 张锐 葛永怡 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1573-1582,共10页
【目的】验证冠突曲霉泛素结合酶(UBC)与交配型蛋白(MAT1-2-1)的互作关系,对UBC基因进行功能研究,为深入解析冠突曲霉有性产孢机制提供理论参考。【方法】采用实时荧光定量PCR检测UBC基因在冠突曲霉有性发育阶段的表达水平,酵母双杂交... 【目的】验证冠突曲霉泛素结合酶(UBC)与交配型蛋白(MAT1-2-1)的互作关系,对UBC基因进行功能研究,为深入解析冠突曲霉有性产孢机制提供理论参考。【方法】采用实时荧光定量PCR检测UBC基因在冠突曲霉有性发育阶段的表达水平,酵母双杂交试验验证MAT1-2-1与UBC的互作关系,利用无缝克隆方法构建pDHt/sk-hyg-UBC过表达载体,并转化冠突曲霉获得UBC过表达菌株,对过表达菌株进行表达量检测、形态学观察及氧和盐胁迫的耐受性测定。【结果】PCR克隆获得UBC基因的编码区(CDS)序列,长度为474 bp,编码157个氨基酸残基,相对分子质量为39587.24 Da,理论等电点为5.16,为疏水的不稳定蛋白,含跨膜结构域,定位于细胞核,属于UBCc超家族成员。有性发育阶段(闭囊壳形成期和子囊孢子大量形成期)UBC基因的相对表达量显著高于营养菌丝体阶段(P<0.05,下同)。自激活检测结果显示,UBC无自激活作用;酵母双杂交验证结果显示,UBC与MAT1-2-1存在互作关系。通过构建过表达载体pDHt/sk-hyg-UBC成功获得UBC过表达菌株(OE::UBC)。与野生型菌株相比,UBC和MAT1-2-1基因在UBC过表达菌株的相对表达量均显著升高。UBC过表达菌株与野生型菌株在MYA、MYA+5%NaCl和MYA+17%NaCl固体培养基上的菌落形态无明显差异。过表达菌株能分别在含18 mmol/L过氧化氢和25%NaCl的培养基中生长,而野生型菌株不能生长,说明UBC基因的过表达提高冠突曲霉对氧胁迫和盐胁迫的耐受性。【结论】UBC基因可能与冠突曲霉的有性发育相关,且与MAT1-2-1基因存在共表达特征。由于UBC与MAT1-2-1存在互作关系,且UBC基因的过表达可明显增强冠突曲霉的抗氧化和抗盐能力,故推测UBC通过与MAT1-2-1发生互作共同参与冠突曲霉的氧胁迫和盐胁迫应答过程。 展开更多
关键词 冠突曲霉 MAT1-2-1 ubc 酵母双杂交 过表达
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大豆UBC基因家族鉴定及GmUBC46基因的功能初步分析 被引量:5
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作者 陈超 乔艳花 +3 位作者 井常煦 卢文秀 金晓霞 于丽杰 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期154-163,共10页
泛素/26S蛋白酶体途径在植物响应非生物胁迫反应中起着重要的作用。E2(泛素结合酶,UBC)是蛋白质泛素化中重要的泛素结合酶,与E1和E3共同参与蛋白降解途径。本研究通过构建隐马尔可夫模型,鉴定了54个大豆UBC基因,通过进化树分析将该家族... 泛素/26S蛋白酶体途径在植物响应非生物胁迫反应中起着重要的作用。E2(泛素结合酶,UBC)是蛋白质泛素化中重要的泛素结合酶,与E1和E3共同参与蛋白降解途径。本研究通过构建隐马尔可夫模型,鉴定了54个大豆UBC基因,通过进化树分析将该家族成员分为11个亚家族(A-K)。蛋白保守结构域分析表明,GmUBC家族蛋白成员大部分含有保守Motif 1、Motif 2与Motif 3,且均属于泛素结合酶保守结构域。组织定位分析表明大部分GmUBC家族基因成员在大豆根、茎、叶、花等组织中有所表达。转录组数据表明有20个GmUBC基因在干旱、盐或冷胁迫下具有不同的表达模式,启动子顺式作用元件分析发现其胁迫响应过程可能与激素信号转导相关。进一步通过qRT-PCR发现GmUBC46基因能积极响应干旱、盐或冷胁迫诱导上调表达。通过酵母功能验证表明,GmUBC46基因降低了对干旱或盐胁迫的耐受性。综上,本研究初步阐明了大豆UBC基因家族的基本特性及GmUBC46基因的耐逆功能,为后续研究提供了重要依据和参考价值。 展开更多
关键词 ubc家族 大豆 Gmubc46 干旱
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日本神户制钢UBC工艺的开发 被引量:4
4
作者 张伟 王再义 +1 位作者 王相力 张宁 《洁净煤技术》 CAS 2010年第4期63-66,共4页
介绍了日本神户制钢公司UBC改质褐煤工艺的开发过程及工艺原理,并对其技术特点进行了简单评述。
关键词 褐煤 ubc工艺 脱水
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大黄鱼ubc9基因的克隆和组织表达 被引量:6
5
作者 周鹏 张子平 +2 位作者 王艺磊 谢芳靖 邹志华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期76-82,共7页
类泛素化(sumoylation)是一种重要的转录后修饰过程。激活的SUMO(small ubiquitin-related modifer)和E2结合酶结合稳定后共价结合到底物上,从而完成对底物的类泛素化。UBC9(ubiquitin-conjugating enzyme)作为惟一的E2结合酶,在完成类... 类泛素化(sumoylation)是一种重要的转录后修饰过程。激活的SUMO(small ubiquitin-related modifer)和E2结合酶结合稳定后共价结合到底物上,从而完成对底物的类泛素化。UBC9(ubiquitin-conjugating enzyme)作为惟一的E2结合酶,在完成类泛素化中起着重要作用。从已构建的大黄鱼性腺线性化cDNA文库中筛选出ubc9同源片段,用SMART-RACE方法克隆得到了846bp的全长cDNA序列。该序列编码一个由158个氨基酸组成的蛋白。该蛋白序列与已知的UBC9高度同源,含UBC保守结构域和UBC9激活位点区域。实时定量PCR分析ubc9基因在各组织器官的表达,结果发现,ubc9基因在大黄鱼的性腺中大量表达。推测UBC9在大黄鱼性腺发育中起重要的生物学作用。 展开更多
关键词 ubc9基因 小泛素相关修饰物 RT-PCR 大黄鱼
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溃结灵含药血清对Caco-2炎症细胞模型泛素系统E1、UBC5和E3RSIB蛋白表达的作用 被引量:4
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作者 柴玉娜 郭珍 +3 位作者 杜群 李燕舞 王汝俊 巫燕莉 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期137-140,共4页
目的:观察溃结灵含药血清对Caco-2炎症细胞模型泛素系统的E1、UBC5、E3RSI B蛋白表达的作用,进一步探讨中药复方溃结灵治疗溃疡性结肠炎的作用机理。方法:将生长融合至70-80%左右的Caco-2细胞分成六个组:正常组、模型组、阳性药组(SASP... 目的:观察溃结灵含药血清对Caco-2炎症细胞模型泛素系统的E1、UBC5、E3RSI B蛋白表达的作用,进一步探讨中药复方溃结灵治疗溃疡性结肠炎的作用机理。方法:将生长融合至70-80%左右的Caco-2细胞分成六个组:正常组、模型组、阳性药组(SASP)、溃结灵高、中、低剂量组;加入对应药物孵育,除正常组外,其余各组加入IL-1β刺激细胞建立炎症细胞模型,收集细胞标本。采用Elisa方法检测Caco-2细胞E1、UBC5和E3RSI B蛋白含量。结果:IL-1β刺激的Caco-2炎症细胞模型中,模型组细胞E1蛋白表达明显高于正常组(P﹤0.05),溃结灵中(10%含药血清)、低剂量组(5%含药血清)E1蛋白表达量低于模型组(P﹤0.05);模型组细胞UBC5蛋白表达高于正常组,但无统计学意义(P﹥0.05),溃结灵高(20%含药血清)、中剂量组(10%含药血清)UBC5蛋白表达量低于模型组(P﹤0.01,P﹤0.05);模型组细胞E3RSI B蛋白表达明显高于正常组(P﹤0.05),溃结灵高(20%含药血清)、中剂量组(10%含药血清)、低剂量组(5%含药血清)E3RSI B蛋白表达量低于模型组(P﹤0.01,P﹤0.05)。结论:溃结灵含药血清对Caco-2炎症细胞模型的E1、UBC5、E3RSI B表达均有下调作用,其抗UC作用的机理可能为抑制泛素蛋白酶体系统来抑制I B的泛素化降解,进而抑制NF-B的活化,减轻溃疡性结肠炎的炎症反应。 展开更多
关键词 溃结灵 溃疡性结肠炎 CACO-2细胞 白介素-1Β E1 ubc5 E3RSIB
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羽衣甘蓝泛素结合酶ubc7基因分离、原核表达及纯化 被引量:3
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作者 蓝兴国 李晓屿 +2 位作者 杨佳 王艳红 李玉花 《中国农学通报》 CSCD 2013年第34期76-80,共5页
为分离羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)自交不亲和系(S13-b S13-b)泛素结合酶7(ubc7)基因,探讨Ubc7重组蛋白的原核表达及纯化。利用CTAB的方法提取羽衣甘蓝柱头总RNA,通过RT-PCR的方法分离ubc7基因,将编码ubc7基因的cDNA序列... 为分离羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)自交不亲和系(S13-b S13-b)泛素结合酶7(ubc7)基因,探讨Ubc7重组蛋白的原核表达及纯化。利用CTAB的方法提取羽衣甘蓝柱头总RNA,通过RT-PCR的方法分离ubc7基因,将编码ubc7基因的cDNA序列亚克隆到pET-14b原核表达载体中,将阳性重组表达质粒转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)pLysS中,利用IPTG进行诱导表达,并通过Ni2+-NTA树脂进行亲和层析的方法纯化重组蛋白。结果表明,获得的Boubc7含有一个长度为501 bp的开放读码框,编码一个含有166个氨基酸残基的蛋白质。预测BoUbc7的相对分子质量约为18.7 kDa,理论等电点(pI)为5.35。利用IPTG诱导的细菌蛋白中,SDS-PAGE显示出在分子量大小23 kDa处有蛋白特异性的表达,这与预测的His6融合的BoUbc7蛋白分子量相符;利用Ni2+-NTA树脂进行亲和层析纯化后,成功获得了BoUbc7融合蛋白。该试验分离了羽衣甘蓝ubc7基因,并通过原核表达系统获得了BoUbc7重组蛋白,为进一步分析其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 羽衣甘蓝 泛素结合酶 ubc7 原核表达
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重组UBC13对RAW264.7炎症因子mRNA表达的影响 被引量:4
8
作者 张亮 扆妍妍 +2 位作者 陶佳丽 段马魁 姜俊兵 《动物医学进展》 北大核心 2017年第6期20-24,共5页
为了研究重组蛋白UBC13对RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症因子mRNA表达量的影响,采用噻唑蓝(MTT)法检测UBC13对RAW264.7细胞活力的影响,qPCR法检测不同浓度UBC13(20、10、5μg/mL)在不同时间点(3、6、9、12、24h)对RAW264.7细胞产生的IL-6、I... 为了研究重组蛋白UBC13对RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症因子mRNA表达量的影响,采用噻唑蓝(MTT)法检测UBC13对RAW264.7细胞活力的影响,qPCR法检测不同浓度UBC13(20、10、5μg/mL)在不同时间点(3、6、9、12、24h)对RAW264.7细胞产生的IL-6、IL-1β、TNF-α和COX-2 4种炎症因子mRNA表达量的影响。结果表明,在整个试验时间范围内IL-6、IL-1β、TNF-α和COX-2mRNA表达量呈现逐步降低的趋势;与细胞对照组组相比,在24h时IL-6、IL-1β、TNF-α和COX-2mRNA表达量显著降低(P<0.05)。说明重组蛋白UBC13作用于RAW264.7细胞24h时能够明显抑制RAW264.7细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α和COX-2的mRNA表达,并且具有药物剂量依赖性。 展开更多
关键词 ubc13 小鼠巨噬细胞 炎症因子 基因表达
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加拿大高校道德教育的核心理念与途径——以英属哥伦比亚大学(UBC)为个案 被引量:3
9
作者 高地 刘航 《外国教育研究》 CSSCI 北大核心 2013年第12期108-114,共7页
英属哥伦比亚大学(UBC)作为加拿大高校的典型代表,其道德教育以"六项价值标准"为核心理念与目标,强调学术自由与责任、知识增长与广泛分享、追求卓越、正直诚实、相互尊重和平等待人以及重视公共利益。在这一理念指导下,学校... 英属哥伦比亚大学(UBC)作为加拿大高校的典型代表,其道德教育以"六项价值标准"为核心理念与目标,强调学术自由与责任、知识增长与广泛分享、追求卓越、正直诚实、相互尊重和平等待人以及重视公共利益。在这一理念指导下,学校积极将道德教育融入专业课程,利用场馆教育开展隐性德育,构建以服务学习为主体的实践教育平台,探索形成了独具特色的高校道德教育模式。 展开更多
关键词 加拿大 高校 道德教育 理念 途径 ubc
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类泛素家族SUMO-1和UBC9的克隆、融合表达及纯化 被引量:2
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作者 韦玮 丁丽华 +6 位作者 张浩 杨智洪 崔家骏 周岩 李勤操 毛建平 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2008年第4期509-511,共3页
目的:克隆类泛素化家族SUMO-1和UBC9基因,表达并纯化二者与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增SUMO-1和UBC9的编码序列,分别将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,得到重组质粒pGST-SUMO-1和p... 目的:克隆类泛素化家族SUMO-1和UBC9基因,表达并纯化二者与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增SUMO-1和UBC9的编码序列,分别将其以正确相位与pGEX-KG载体中的GST编码序列融合,得到重组质粒pGST-SUMO-1和pGST-UBC9,分别转化大肠杆菌DH5α,表达融合蛋白GST-SUMO-1和GST-UBC9;用谷胱甘肽-Sepharose4B亲和纯化融合蛋白;用Western印迹检测融合蛋白的表达及纯化。结果:分别构建了SUMO-1和UBC9的融合表达载体;Western印迹检测表明,GST-SUMO-1和GST-UBC9融合蛋白获得表达;纯化得到了融合蛋白。结论:克隆、表达并纯化了SUMO-1和UBC9与GST的融合蛋白。 展开更多
关键词 SUMO-1 ubc9 克隆 表达 融合蛋白
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国内JB/T 4710—2005和美国UBC-97标准中基本风参数的转换 被引量:3
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作者 赵思珍 张迎恺 《石油化工设备技术》 CAS 2010年第2期20-22,共3页
阐述了国内标准JB/T 4710—2005和美国标准UBC-97中关于基本风速和风压的定义;分析了两种标准体系下该参数的差异;提出了一种转换方法,国内标准体系中的基本风速和风压值,经过转换便可更合理地采用UBC-97标准的计算方法对国内项目中的... 阐述了国内标准JB/T 4710—2005和美国标准UBC-97中关于基本风速和风压的定义;分析了两种标准体系下该参数的差异;提出了一种转换方法,国内标准体系中的基本风速和风压值,经过转换便可更合理地采用UBC-97标准的计算方法对国内项目中的塔器进行风弯矩的求解。 展开更多
关键词 JB/T 4710 2005 ubc 97 基本风速 基本风压 转换
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Ubc9在肺癌组织中的表达及意义 被引量:1
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作者 李慧 吴宝刚 +2 位作者 牛慧彦 彭扬 何平 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第10期2343-2346,共4页
目的:探讨Ubc9在人肺癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测143例肺癌组织及同源非癌变组织中Ubc9的表达情况,并对临床病理资料进行分析。结果:与癌旁组织相... 目的:探讨Ubc9在人肺癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测143例肺癌组织及同源非癌变组织中Ubc9的表达情况,并对临床病理资料进行分析。结果:与癌旁组织相比,Ubc9在肺癌组织中呈高表达(P<0.05),Ubc9的表达与年龄、淋巴结转移、TNM分期及预后密切相关,有统计学意义(P<0.05);而与性别、病理学类型、组织分化程度无关。结论:小细胞肺癌、肺鳞癌和肺腺癌中均有Ubc9阳性表达,均高于正常的肺组织,并且与肺癌淋巴结转移程度相关,提示Ubc9可能与肺癌细胞的转移特性有关。 展开更多
关键词 ubc9 肺癌 转移
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UBC与中国规范的地震力之比较研究 被引量:2
13
作者 杨眉 《武汉大学学报(工学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S1期116-118,共3页
本文针对具体工程,对UBC与中国规范的地震力进行比较研究,以解决涉外工程中,国内部分软件不能按UBC规范进行地震验算的问题.通过反应谱的比较分析,对中国规范中特征周期进行调整以改变水平地震影响系数,从而达到用中国软件进行地震力分... 本文针对具体工程,对UBC与中国规范的地震力进行比较研究,以解决涉外工程中,国内部分软件不能按UBC规范进行地震验算的问题.通过反应谱的比较分析,对中国规范中特征周期进行调整以改变水平地震影响系数,从而达到用中国软件进行地震力分析也可满足UBC规范的要求. 展开更多
关键词 ubc1997 GB50011-2001 反应谱 设防标准
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巴西橡胶树HbUBC22基因克隆与表达分析 被引量:4
14
作者 覃碧 《中国农学通报》 CSCD 2013年第19期1-8,共8页
泛素蛋白酶体途径(UPP)广泛参与植物生长发育相关过程的调控,巴西橡胶树UPP关键酶-泛素结合酶UBC/E2基因的克隆及其表达分析,将为进一步研究UPP在橡胶树中的功能奠定基础。本研究通过同源克隆法,根据巴西橡胶树UBC22同源EST序列进行拼... 泛素蛋白酶体途径(UPP)广泛参与植物生长发育相关过程的调控,巴西橡胶树UPP关键酶-泛素结合酶UBC/E2基因的克隆及其表达分析,将为进一步研究UPP在橡胶树中的功能奠定基础。本研究通过同源克隆法,根据巴西橡胶树UBC22同源EST序列进行拼接设计特异引物,利用RT-PCR扩增从橡胶树中克隆UBC22基因,利用生物信息学的方法对基因的结构进行分析,进一步采用Q-PCR技术分析基因表达模式,并在大肠杆菌中表达目标蛋白。将克隆的基因命名为HbUBC22,该基因的开放阅读框(ORF)共807bp,编码268个氨基酸,编码蛋白含有1个保守的UBC结构域和半胱氨酸催化位点。HbUBC22蛋白与蓖麻、杨树、油茶和葡萄的UBC蛋白同源性最高,分别为89%、85%、85%和81%。HbUBC22受乙烯利和茉莉酸甲酯诱导显著上调表达。经IPTG诱导后,HbUBC22能够在大肠杆菌中表达出目标蛋白。通过对HbUBC22的克隆及其序列分析可知,该基因属于泛素结合酶UBC/E2家族成员,以上研究结果为进一步研究HbUBC22的生物学功能奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 泛素结合酶 Hbubc22 基因克隆 表达分析
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加拿大UBC大学教学借鉴与启示 被引量:5
15
作者 高书丽 杨艳芳 《全国商情》 2011年第6X期93-95,共3页
加拿大不列颠哥伦比亚大学(UBC)是一所蜚声全球的综合性大学,其教学科研实力雄厚。本文从教学管理、教学理念、教学模式、大班上课特色等方面介绍了UBC的教学特点,在此基础上总结出了对我国高等教育的几点启示。
关键词 ubc 教学模式 启示
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哈茨木霉UBc基因的克隆及表达
16
作者 刘丕钢 杨谦 赵云飞 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1426-1430,共5页
筛选哈茨木霉的cDNA文库,克隆到泛素结合酶基因的cDNA全长序列,并对其进行生物信息学分析,该序列的长度为951 bp,包含一个455 bp的完整开放阅读框,编码157个氨基酸,其理论分子量为17.64ku.在氨基酸水平上,具有较高的保守性.以克隆载体pB... 筛选哈茨木霉的cDNA文库,克隆到泛素结合酶基因的cDNA全长序列,并对其进行生物信息学分析,该序列的长度为951 bp,包含一个455 bp的完整开放阅读框,编码157个氨基酸,其理论分子量为17.64ku.在氨基酸水平上,具有较高的保守性.以克隆载体pBK5313为模板,设计含有XhoI和BamH I酶切位点的引物,成功地获得包含完整阅读框的目的基因;将目的基因连接到表达载体pET28上,构建出含有泛素结合酶基因的重组子pET28-UBc,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,成功地获得了大量的大肠杆菌转化子.通过对大肠杆菌转化子菌落PCR检验、质粒双酶切鉴定及测序分析,证实了成功转化.通过IPTG诱导,优化了泛素结合酶原核表达的条件,最佳诱导时间为4 h,诱导剂浓度对蛋白表达量影响不大.本研究为进一步研究哈茨木霉的生物防治作用机制,诠释蛋白质代谢途径提供基本技术支持. 展开更多
关键词 哈茨木霉 ubc基因 原核表达 优化
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UBC料保级再生的工艺研究 被引量:1
17
作者 龚燃 《有色金属加工》 CAS 2023年第5期6-10,共5页
文章定义了UBC料的含义,介绍了UBC料回收的现状及意义,并根据UBC料的特点,提出了其保级再生的目标;通过分析UBC料的预处理、脱漆、配料和熔炼铸造这几个关键工艺,指出了其保级再生的关键控制点。
关键词 ubc 再生铝 预处理 脱漆 配料 熔炼铸造
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Pmscv-Ubc9逆转录病毒表达载体的构建及产毒细胞系的建立(英文)
18
作者 李薇 刘晓萍 +4 位作者 徐祥 谭艳 于业军 王苗苗 任书亭 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第14期2628-2631,共4页
目的:构建含Ubc9的逆转录病毒表达载体,筛选建立携带该基因的高滴度产毒细胞系,深入研究SUMO化修饰的作用。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增获取目的基因Ubc9,定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVneo,形成重组质粒pMSCV-Ubc9;脂质体法将pMSCV-U... 目的:构建含Ubc9的逆转录病毒表达载体,筛选建立携带该基因的高滴度产毒细胞系,深入研究SUMO化修饰的作用。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增获取目的基因Ubc9,定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVneo,形成重组质粒pMSCV-Ubc9;脂质体法将pMSCV-Ubc9转染逆转录病毒包装细胞PT67;G418筛选产毒细胞克隆,扩大培养产毒细胞克隆,收获病毒感染NIH3T3细胞。结果:限制性酶切和测序鉴定证实Ubc9正确插入逆转录病毒表达载体。G418筛选获得稳定产毒的抗性细胞克隆,收获病毒能有效感染NIH3T3细胞。结论:携带Ubc9基因的重组逆转录病毒表达载体pMSCV-Ubc9构建成功,转染PT67细胞后包装出重组逆转录病毒,进而筛选获得了能转录表达Ubc9的产毒细胞系PT67-Ubc9。 展开更多
关键词 ubc9基因 逆转录病毒载体pMSCVneo PT67细胞
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真核表达载体pEGFP-N1-Ubc9的构建及表达
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作者 李慧 彭扬 +1 位作者 牛慧彦 何平 《现代肿瘤医学》 CAS 2011年第5期863-866,共4页
目的:克隆人类Ubc9基因cDNA全长,构建Ubc9的真核表达载体并表达。方法:采用RT-PCR技术从人小细胞肺癌NCI-H446细胞总RNA中扩增Ubc9 cDNA基因片段,经过酶切鉴定后,克隆至pUCM-T载体,测序证实碱基序列无误后,再克隆至真核绿色荧光蛋白表... 目的:克隆人类Ubc9基因cDNA全长,构建Ubc9的真核表达载体并表达。方法:采用RT-PCR技术从人小细胞肺癌NCI-H446细胞总RNA中扩增Ubc9 cDNA基因片段,经过酶切鉴定后,克隆至pUCM-T载体,测序证实碱基序列无误后,再克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1)上,并转染到真核细胞,观察其在真核细胞中的表达。结果:测序证实克隆的Ubc9全长cDNA阅读框正确完整,酶切和序列测定证实Ubc9正确插入pEGFP-N1载体中,该重组载体能够在真核细胞中表达。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-Ubc9。 展开更多
关键词 ubc9 真核表达 基因克隆 载体构建
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