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U2AF65蛋白表达水平影响基因UBQLN1的可变剪接
被引量:
1
1
作者
瞿秀华
刘萱
+3 位作者
李晓明
李平
马清钧
曹诚
《生物技术通讯》
CAS
2010年第4期470-473,共4页
目的:研究U2AF65蛋白的表达水平对基因UBQLN1可变剪接的影响。方法:应用pSR-GFP/Neo载体构建2个U2AF65-siRNA干扰载体,转染293T细胞,通过Western印迹、QRT-PCR检测干扰效果,RT-PCR验证基因UBQLN1的可变剪接。结果:利用设计的U2AF65-siRN...
目的:研究U2AF65蛋白的表达水平对基因UBQLN1可变剪接的影响。方法:应用pSR-GFP/Neo载体构建2个U2AF65-siRNA干扰载体,转染293T细胞,通过Western印迹、QRT-PCR检测干扰效果,RT-PCR验证基因UBQLN1的可变剪接。结果:利用设计的U2AF65-siRNA能够干扰细胞中U2AF65的表达;RT-PCR结果显示U2AF65表达水平的下降促使UBQLN1第8外显子的跳跃增加。结论:U2AF65可以通过表达水平的变化参与调控基因UBQLN1的可变剪接。
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关键词
u2af65
蛋白
RNA干扰
UBQLN1基因
可变剪接
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职称材料
剪接因子1N端1-320氨基酸片段的原核表达及纯化
2
作者
瞿秀华
刘萱
+3 位作者
李晓明
李平
马清钧
曹诚
《生物技术通讯》
CAS
2010年第5期628-631,共4页
目的:通过扩增剪接因子1(SF1)的N端1-320氨基酸(aa)片段对应的cDNA,构建His融合蛋白原核表达质粒pET-28a(+)/SF1(1-320aa),在大肠杆菌中诱导表达并进行亲和纯化。方法:PCR扩增SF1的1-320 aa片段对应的cDNA,扩增产物和载体pET-28a(+)经...
目的:通过扩增剪接因子1(SF1)的N端1-320氨基酸(aa)片段对应的cDNA,构建His融合蛋白原核表达质粒pET-28a(+)/SF1(1-320aa),在大肠杆菌中诱导表达并进行亲和纯化。方法:PCR扩增SF1的1-320 aa片段对应的cDNA,扩增产物和载体pET-28a(+)经酶切回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒,转化大肠杆菌DH5α,挑取克隆、酶切鉴定、测序,将测序正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和West-ern印迹分析蛋白表达情况,亲和纯化His-SF1(1-320aa)。结果:SF1片段以正确的读框插入pET-28a(+),IPTG可以诱导大肠杆菌表达重组蛋白,SDS-PAGE和Western印迹证实得到相对分子质量约为40×103的蛋白,亲和纯化得到高纯度蛋白质。结论:构建了His融合蛋白原核表达质粒pET-28a(+)/SF1(1-320aa),并获得His-SF1(1-320aa)融合蛋白,为进一步研究SF1和U2AF65之间的相互作用及对剪接体形成的影响提供了基础。
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关键词
剪接因子1
原核表达
纯化
u2af65
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职称材料
题名
U2AF65蛋白表达水平影响基因UBQLN1的可变剪接
被引量:
1
1
作者
瞿秀华
刘萱
李晓明
李平
马清钧
曹诚
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2010年第4期470-473,共4页
文摘
目的:研究U2AF65蛋白的表达水平对基因UBQLN1可变剪接的影响。方法:应用pSR-GFP/Neo载体构建2个U2AF65-siRNA干扰载体,转染293T细胞,通过Western印迹、QRT-PCR检测干扰效果,RT-PCR验证基因UBQLN1的可变剪接。结果:利用设计的U2AF65-siRNA能够干扰细胞中U2AF65的表达;RT-PCR结果显示U2AF65表达水平的下降促使UBQLN1第8外显子的跳跃增加。结论:U2AF65可以通过表达水平的变化参与调控基因UBQLN1的可变剪接。
关键词
u2af65
蛋白
RNA干扰
UBQLN1基因
可变剪接
Keywords
u2af65
protein
RNA interference
UBQLN1 gene
alternative splicing
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
剪接因子1N端1-320氨基酸片段的原核表达及纯化
2
作者
瞿秀华
刘萱
李晓明
李平
马清钧
曹诚
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2010年第5期628-631,共4页
文摘
目的:通过扩增剪接因子1(SF1)的N端1-320氨基酸(aa)片段对应的cDNA,构建His融合蛋白原核表达质粒pET-28a(+)/SF1(1-320aa),在大肠杆菌中诱导表达并进行亲和纯化。方法:PCR扩增SF1的1-320 aa片段对应的cDNA,扩增产物和载体pET-28a(+)经酶切回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒,转化大肠杆菌DH5α,挑取克隆、酶切鉴定、测序,将测序正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和West-ern印迹分析蛋白表达情况,亲和纯化His-SF1(1-320aa)。结果:SF1片段以正确的读框插入pET-28a(+),IPTG可以诱导大肠杆菌表达重组蛋白,SDS-PAGE和Western印迹证实得到相对分子质量约为40×103的蛋白,亲和纯化得到高纯度蛋白质。结论:构建了His融合蛋白原核表达质粒pET-28a(+)/SF1(1-320aa),并获得His-SF1(1-320aa)融合蛋白,为进一步研究SF1和U2AF65之间的相互作用及对剪接体形成的影响提供了基础。
关键词
剪接因子1
原核表达
纯化
u2af65
Keywords
splicing factor 1
prokaryotic expression
purification
u2af65
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
U2AF65蛋白表达水平影响基因UBQLN1的可变剪接
瞿秀华
刘萱
李晓明
李平
马清钧
曹诚
《生物技术通讯》
CAS
2010
1
在线阅读
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职称材料
2
剪接因子1N端1-320氨基酸片段的原核表达及纯化
瞿秀华
刘萱
李晓明
李平
马清钧
曹诚
《生物技术通讯》
CAS
2010
0
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引证文献
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