枸橘苷对人骨肉瘤U-2 OS细胞的抑制作用

1

作者 唐捷 张丕军 +1 位作者 林维 李超艺 《中国药业》 CAS 2022年第4期37-43,共7页

目的探讨枸橘苷对人骨肉瘤U-2 OS细胞的抑制作用。方法分别以0,5,10,20,40,80,160μmol/L的枸橘苷处理U-2 OS细胞,检测细胞活力并计算枸橘苷对U-2 OS细胞的半数抑制浓度(IC_(50));U-2 OS细胞实验分为空白对照组[等体积磷酸盐缓冲液(PBS)... 目的探讨枸橘苷对人骨肉瘤U-2 OS细胞的抑制作用。方法分别以0,5,10,20,40,80,160μmol/L的枸橘苷处理U-2 OS细胞,检测细胞活力并计算枸橘苷对U-2 OS细胞的半数抑制浓度(IC_(50));U-2 OS细胞实验分为空白对照组[等体积磷酸盐缓冲液(PBS)]和枸橘苷高、低剂量组(52,26μmol/L),慢病毒转染细胞实验分为枸橘苷组(A组,52μmol/L)、空白对照组(B组,等体积PBS)、枸橘苷对照组(C组,52μmol/L+50 MOI pLVX-EGFP-C1)、枸橘苷+FBXO2组(D组,52μmol/L+50 MOI pLVX-EGFP-C1-FBXO2)。采用CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖情况,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞FBXO2 mRNA表达水平,Western blot法检测细胞FBXO2,LC3Ⅰ,LC3Ⅱ,Beclin1,p62,p-STAT3,STAT3蛋白表达水平。结果枸橘苷对U-2 OS细胞的IC_(50)为52.08μmol/L。与空白对照组比较,枸橘苷高、低剂量组细胞在24,48,72 h时的细胞活力显著减弱(P<0.05),克隆形成数显著减少(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),p62蛋白表达水平、FBXO2 mRNA和蛋白表达水平、p-STAT3/STAT3均显著降低(P<0.05);与C组比较,D组细胞在24,48,72 h时的活力显著增强(P<0.05),克隆形成数显著增加(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),p62蛋白表达水平、FBXO2 mRNA和蛋白表达水平、p-STAT3/STAT3均显著升高(P<0.05)。结论枸橘苷可抑制U-2 OS细胞的增殖,并促进其自噬,其机制可能与抑制FBXO2的表达从而抑制STAT3通路激活有关。 展开更多

关键词 骨肉瘤细胞 u-2 os细胞 枸橘苷 FBXO2 增殖 自噬

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U-2 OS细胞/CCK-8法测定1型单纯疱疹病毒溶瘤活性 被引量：5

2

作者 胡金盼 李永红 +4 位作者 史新昌 李响 于雷 郑红梅 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期31-36,共6页

目的:建立U-2 OS细胞/CCK-8比色法,用于测定1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)溶瘤活性。方法:选择3株对HSV-1敏感的的细胞株,在细胞培养板上以梯度浓度的HSV-1感染一定时间后,加入CCK-8进行显色,用酶标仪检测后采用... 目的:建立U-2 OS细胞/CCK-8比色法,用于测定1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)溶瘤活性。方法:选择3株对HSV-1敏感的的细胞株,在细胞培养板上以梯度浓度的HSV-1感染一定时间后,加入CCK-8进行显色,用酶标仪检测后采用四参数曲线法进行量效关系拟合。在选择出量效关系最好的细胞株基础上,对方法的各项实验条件进行优化,并采用活性测定标准品对结果进行校正分析。对建立的方法初步验证准确性和精密度,并用上述方法对3批样品的溶瘤活性进行检测。结果:优化后的实验采用U-2 OS细胞株,1∶4的样品系列稀释比例,5×10^4 PFU·mL^-1的样品系列稀释初始浓度,每孔2.5×10^4个细胞的铺板数量,72 h感染时间和4 h CCK-8试剂反应时间等条件进行样品测定,得到的四参数方程拟合的量效关系曲线R^2大于0.99,信噪比较高,初步验证结果显示该方法的回收率为113.4%,日间精密度分析的几何变异系数(GCV)为21.8%。3批测试样品的溶瘤活性分别为3.52×10^3、3.93×10^4和1.61×10^5 U·mL^-1。结论:建立的U-2 OS细胞/CCK-8法可用于以HSV-1为载体的基因治疗药物溶瘤活性测定。 展开更多

关键词 1型单纯疱疹病毒(HSV-1) 溶瘤活性 标准品校正 量效关系拟合 四参数曲线法 u-2 os细胞 CCK-8显色法

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HTLV-1病毒蛋白Tax对U-2 OS骨肉瘤细胞有丝分裂的影响 被引量：2

3

作者 蒋贤杰 高林枫 +1 位作者 武敏 张渝君 《兰州大学学报（医学版）》 CAS 2017年第3期7-12,共6页

目的研究人1型T淋巴细胞白血病病毒(HTLV-1)所编码的病毒蛋白Tax对骨肉瘤细胞生长周期的影响。方法通过构建慢病毒表达载体在人骨肉瘤细胞株U-2 OS中表达Tax;荧光显微镜检测表达Tax所引起的骨肉瘤细胞形态和细胞分裂的变化;流式细胞方... 目的研究人1型T淋巴细胞白血病病毒(HTLV-1)所编码的病毒蛋白Tax对骨肉瘤细胞生长周期的影响。方法通过构建慢病毒表达载体在人骨肉瘤细胞株U-2 OS中表达Tax;荧光显微镜检测表达Tax所引起的骨肉瘤细胞形态和细胞分裂的变化;流式细胞方法分析表达Tax对骨肉瘤细胞周期产生的影响。结果与亲本骨肉瘤细胞比较,表达Tax的骨肉瘤细胞形态由正常的椭圆形转化为长梭形;出现了胞质分裂异常;有双核或多核细胞形成;细胞的生长周期在G2/M期发生了停滞。结论 Tax的表达破坏了骨肉瘤细胞有丝分裂的胞质分裂过程,造成异倍体现象的出现,使细胞停滞在有丝分裂的晚期。这或许是HTLV-1感染导致正常细胞转化为癌细胞的原因之一。 展开更多

关键词 人1型T淋巴细胞白血病病毒 u-2 os骨肉瘤细胞 TAX 胞质分裂异常

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槲皮素对人骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300增殖和凋亡的影响及其机制研究 被引量：12

4

作者 尹军强 谢显彪 +4 位作者 贾强 王晋 黄纲 邹昌业 沈靖南 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期611-614,共4页

目的:研究槲皮素(quercetin,Qu)对骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300增殖和凋亡的作用及其机制。方法:MTT法观察细胞增殖活性;Annexin V/PI染色检测凋亡;线粒体膜电位及细胞色素C的Western blot检测线粒体凋亡途径;持续活化Akt瞬时转染、Western... 目的:研究槲皮素(quercetin,Qu)对骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300增殖和凋亡的作用及其机制。方法:MTT法观察细胞增殖活性;Annexin V/PI染色检测凋亡;线粒体膜电位及细胞色素C的Western blot检测线粒体凋亡途径;持续活化Akt瞬时转染、Western blot检测Akt通路相关蛋白表达水平变化。结果:槲皮素可明显抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300生长,并呈时间和剂量依赖性;Annexin V/PI可明显检测到细胞凋亡;进一步发现其作用机制是通过下调线粒体膜电位,促进细胞色素C向胞浆释放及抑制Akt磷酸化来实现。结论:槲皮素可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300细胞增殖并诱导其凋亡,其机制与线粒体凋亡途径及抑制Akt活性有关。 展开更多

关键词 槲皮素 u-2os/MTX300细胞 凋亡

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中药片仔癀胶囊对骨肉瘤U-2OS细胞诱导凋亡的作用 被引量：14

5

作者 张俐 于波 林建华 《中国骨伤》 CAS 2009年第4期265-268,共4页

目的:研究中药片仔癀对骨肉瘤U-2OS细胞的诱导凋亡作用。方法:①采用1月龄SD大鼠16只,雌雄各半,体重120g左右,随机分为2组(空白血清组和片仔癀治疗组),每组8只。空白血清组大鼠灌服PBS,片仔癀治疗组大鼠灌服中药片仔癀溶液。②人骨肉瘤U... 目的:研究中药片仔癀对骨肉瘤U-2OS细胞的诱导凋亡作用。方法:①采用1月龄SD大鼠16只,雌雄各半,体重120g左右,随机分为2组(空白血清组和片仔癀治疗组),每组8只。空白血清组大鼠灌服PBS,片仔癀治疗组大鼠灌服中药片仔癀溶液。②人骨肉瘤U-2OS细胞培养于含10%胎牛血清,青霉素100IU/ml,链霉素100μg/ml的RPMI1640培养液中,置于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养。用MTT法检测不同含药血清浓度对骨肉瘤U-2OS细胞增殖的影响,筛选对骨肉瘤U-2OS细胞作用最佳的片仔癀含药血清浓度。③在倒置相差显微镜和电镜下观察骨肉瘤U-2OS细胞形态。④TUNEL原位末端标记法检测细胞的凋亡。⑤提取基因DNA,琼脂糖凝胶电泳,以DNA琼脂糖凝胶电泳和透射电镜检测细胞凋亡。结果:①20%片仔癀含药血清对骨肉瘤细胞的增殖抑制作用最佳。②倒置相差显微镜观察可见空白血清组细胞呈梭形贴壁生长,在20%片仔癀胶囊含药血清组,可见部分细胞体积变小、变圆,细胞膜完整但出现发泡现象,折光性增强。随作用时间延长,变圆细胞逐渐增多,部分贴壁细胞皱缩、变圆、脱落,可见坏死细胞及碎片。③20%片仔癀胶囊含药血清组TUNEL检测阳性。④DNALadder电泳结果:含药血清组细胞基因DNA凝胶电泳出现明显的梯状带。⑤透射电镜观察染色质沿皱缩的核膜下凝聚,细胞表面出现凋亡小体。结论:中药片仔癀胶囊对骨肉瘤U-2OS细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用。 展开更多

关键词 细胞凋亡 中药 片仔癀 骨肉瘤u-2os细胞

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紫草素通过内质网应激蛋白抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞增殖的研究 被引量：6

6

作者 缪明星 黄莉莉 王欣 《现代药物与临床》 CAS 2019年第10期2899-2904,共6页

目的研究紫草素对人骨肉瘤U-2 OS细胞存活的抑制和对内质网应激蛋白的调控机制。方法采用CCK-8法检测0.156 25~4μmol/L紫草素对人骨肉瘤U-2 OS细胞抑制率;取对数生长期U-2 OS细胞,分别给予0~4μmol/L紫草素诱导U-2 OS细胞凋亡,24 h后... 目的研究紫草素对人骨肉瘤U-2 OS细胞存活的抑制和对内质网应激蛋白的调控机制。方法采用CCK-8法检测0.156 25~4μmol/L紫草素对人骨肉瘤U-2 OS细胞抑制率;取对数生长期U-2 OS细胞,分别给予0~4μmol/L紫草素诱导U-2 OS细胞凋亡,24 h后用流式细胞术检测细胞凋亡率;通过Western blotting检测紫草素对内质网应激蛋白ATF6、IRE1α、ATF4、GRP78的表达调控作用;将混有质粒或小干扰RNA的Lipofectamine 2000试剂处理U-2 OS细胞6 h换液,加入紫草素处理,检测ATF4或GRP78对紫草素处理的细胞活力的影响;将ATF4或空白质粒(3μg)、GRP78报告质粒(3μg)和海肾内参质粒(4μg)均匀混合,用Lipofectamine 2000试剂对人骨肉瘤U-2 OS细胞进行转染,6 h换液,加入0.8μmol/L紫草素继续孵育24h,实验结果用各孔海肾荧光做参比进行校正,检测紫草素对ATF4介导的GRP78转录的调控作用。结果紫草素显著抑制人骨肉瘤细胞的活力并能浓度相关性促进细胞凋亡;Westernblotting结果显示,紫草素能特异性增加ATF4和GRP78蛋白的表达;过表达ATF4能显著抑制U-2 OS细胞活力(P<0.01);敲低ATF4能部分逆转紫草素对细胞活力的抑制(P<0.01);过表达GRP78并不影响紫草素对细胞存活的抑制效果,但敲低GRP78可以显著增加紫草素对U-2 OS细胞活力的抑制(P<0.01);报告基因结果显示紫草素能增加ATF4对GRP78基因的转录调控。结论紫草素能显著抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞活力,诱导内质网应激蛋白的表达,敲低GRP78能进一步增加紫草素的细胞毒性。 展开更多

关键词 紫草素 u-2 os细胞 凋亡率 内质网应激 ATF6 IRE1α ATF4 GRP78

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华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的影响及作用机制研究 被引量：4

7

作者 曹飞 康小红 王立芳 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期349-353,共5页

目的通过观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的影响,探讨其诱导细胞凋亡的可能机制。方法以人骨肉瘤细胞株U-2OS作为实验细胞,MTT法检测采用10、20、50、100、200、400 nmol/L华蟾酥毒基培养24、48、72 h后细胞增殖情况,以单纯U-2O... 目的通过观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的影响,探讨其诱导细胞凋亡的可能机制。方法以人骨肉瘤细胞株U-2OS作为实验细胞,MTT法检测采用10、20、50、100、200、400 nmol/L华蟾酥毒基培养24、48、72 h后细胞增殖情况,以单纯U-2OS细胞作为对照组;流式细胞仪检测分别采用100 nmol/L华蟾酥毒基(实验组)及100 nmol/L华蟾酥毒基联合泛半胱氨酸蛋白酶(Caspase)抑制剂Z-VAD-FMK(对照组)培养48 h后细胞凋亡情况,以单纯U-2OS细胞作为空白对照组;用Caspase-3活性检测试剂盒检测20、50、100 nmol/L华蟾酥毒基培养48 h后对细胞Caspase-3活性的影响,以单纯U-2OS细胞作为对照组;Western blot法检测20、50、100 nmol/L华蟾酥毒基培养48 h后对细胞凋亡通路相关蛋白(cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bcl-2、Bax)表达的影响,以单纯U-2OS细胞作为对照组。结果 MTT法检测示,同一时间点细胞存活率随华蟾酥毒基浓度增加而显著降低,同一浓度组细胞存活率随时间延长亦显著下降,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,实验组细胞凋亡率为46.87%±11.23%,显著高于对照组的2.34%±0.98%及空白对照组的1.04%±0.25%(P<0.05)。20、50、100 nmol/L组Caspase-3活性分别为1.14±0.32、1.31±0.41、1.92±0.54,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);100 nmol/L组与20、50 nmol/L组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组相比,各浓度组促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bax均显著上调,抗凋亡蛋白Bcl-2下调,Bax/Bcl-2提高,差异均有统计学意义(P<0.05);各浓度组随浓度增加也呈相同变化趋势,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论华蟾酥毒基可抑制人骨肉瘤细胞U-2OS的增殖,促使细胞凋亡;其作用机制可能与线粒体介导的凋亡途径有关。 展开更多

关键词 华蟾酥毒基 人骨肉瘤细胞u-2os 细胞凋亡 半胱氨酸蛋白酶3

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八宝丹对骨肉瘤细胞U-2OS的抑制增殖和诱导凋亡实验研究 被引量：8

8

作者 周忠 林建华 《中国中医骨伤科杂志》 CAS 2006年第S2期93-95,共3页

目的:探讨八宝丹(BBD)对骨肉瘤U-2OS细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:应用形态学观察、Ki-67染色、MTT实验检测八宝丹对细胞增殖的抑制,原位末端标记、电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡。结果:MTT实验显示八宝丹抑... 目的:探讨八宝丹(BBD)对骨肉瘤U-2OS细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:应用形态学观察、Ki-67染色、MTT实验检测八宝丹对细胞增殖的抑制,原位末端标记、电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡。结果:MTT实验显示八宝丹抑制U-2OS细胞的增殖呈时间、浓度依赖的方式,实验组Ki-67指数降低,TUNEL检测阳性,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,随着作用时间延长和浓度增加,凋亡率增高;电镜观察染色质沿皱缩的核膜下凝聚,细胞表面出现凋亡小体。结论:八宝丹对骨肉瘤细胞U-2OS有抑制增殖和诱导凋亡作用,其作用表现出时间和剂量依赖关系。 展开更多

关键词 增殖抑制 诱导凋亡 八宝丹 骨肉瘤u-2os细胞

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siRNA沉默ERK-1基因对骨肉瘤细胞U-2OS基质金属蛋白酶-9表达的影响 被引量：1

9

作者 胡俊 李卫 +2 位作者 袁忠 陶阳 沈云峰 《当代医学》 2019年第4期4-7,共4页

目的研究ERK-1基因对骨肉瘤细胞U-2OS基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及细胞迁移侵袭的影响,探讨ERK-1基因在骨肉瘤细胞侵袭过程中的作用机制。方法通过siRNA技术沉默骨肉瘤细胞U-2OS中ERK-1基因表达,采用RT-PCR和Western blot分别检测... 目的研究ERK-1基因对骨肉瘤细胞U-2OS基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及细胞迁移侵袭的影响,探讨ERK-1基因在骨肉瘤细胞侵袭过程中的作用机制。方法通过siRNA技术沉默骨肉瘤细胞U-2OS中ERK-1基因表达,采用RT-PCR和Western blot分别检测空白对照组、阴性对照组、siRNA沉默组中ERK-1、MMP-9的mRNA水平和蛋白水平,Transwell细胞迁移和侵袭能力实验,验证细胞迁移和侵袭能力。结果骨肉瘤细胞U-2OS转染ERK-1 siRNA后,ERK-1、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达受到明显抑制,细胞迁移和侵袭能力显著下降。结论 ERK-1可通过诱导细胞发生MMP-9的表达来促进骨肉瘤细胞U-2OS侵袭和转移。 展开更多

关键词 SIRNA技术 ERK-1基因 骨肉瘤细胞u-2os 基质金属蛋白酶-9

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薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-2OS细胞周期调控蛋白表达的影响 被引量：2

10

作者 洪振强 林建华 张俐 《福建中医药》 2009年第5期46-48,共3页

目的研究薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-2OS细胞周期调控蛋白表达的影响,探讨薯蓣皂苷元的药理机制。方法采用RT-PCR方法检测U-2OS细胞CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK6和P27 mRNA的表达。结果用药后细胞周期正调控因子CyclinD1、CyclinE、CDK2、... 目的研究薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-2OS细胞周期调控蛋白表达的影响,探讨薯蓣皂苷元的药理机制。方法采用RT-PCR方法检测U-2OS细胞CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK6和P27 mRNA的表达。结果用药后细胞周期正调控因子CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK6 mRNA的表达减弱,负调控因子P27 mRNA的表达增强。结论薯蓣皂苷元可能通过影响细胞周期调控蛋白的表达,诱导U-2OS细胞周期阻滞于G1期,抑制其增殖。 展开更多

关键词 薯蓣皂苷元 u-2os细胞 CyclinD1/CDK6 CyclinE/CDK2 P27 MRNA

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薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的透射电镜观察 被引量：1

11

作者 洪振强 张俐 +1 位作者 王和鸣 吴广文 《福建中医药》 2009年第4期39-41,共3页

目的探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-2OS细胞的作用机制。方法采用四氮唑盐还原法观察薯蓣皂苷元对U-2OS细胞体外生长的作用,透射电镜观察U-2OS细胞超微结构的变化。结果薯蓣皂苷元对U-2OS细胞的生长具有明显抑制作用,半抑制率为87μmol/L;... 目的探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-2OS细胞的作用机制。方法采用四氮唑盐还原法观察薯蓣皂苷元对U-2OS细胞体外生长的作用,透射电镜观察U-2OS细胞超微结构的变化。结果薯蓣皂苷元对U-2OS细胞的生长具有明显抑制作用,半抑制率为87μmol/L;薯蓣皂苷元作用后U-2OS细胞出现核染色质浓缩成块状、边集等典型的凋亡形态学改变,同时,薯蓣皂苷元也诱导U-2OS细胞胀亡。结论薯蓣皂苷元通过诱导U-2OS细胞凋亡或胀亡而抑制其生长。 展开更多

关键词 薯蓣皂苷元 u-2os细胞 凋亡 胀亡 透射电镜

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薯蓣皂苷元对U-2OS细胞MMP-9／TIMP-1 mRNA的影响 被引量：2

12

作者 洪振强 林建华 《福建中医学院学报》 2006年第3期21-24,共4页

为探讨薯蓣皂苷元抗肿瘤作用,采用四氮唑盐还原法(MTT法)观察薯蓣皂苷元对人骨肉瘸U-2OS 细胞体外生长的作用,运用RT-PCR方法探讨人骨肉瘤U-2OS细胞在薯蓣皂苷元作用后,其基质金属蛋白酶- 9(MMP-9)和基质金属酶组织抑制剂-1(TIMP-1)mRN... 为探讨薯蓣皂苷元抗肿瘤作用,采用四氮唑盐还原法(MTT法)观察薯蓣皂苷元对人骨肉瘸U-2OS 细胞体外生长的作用,运用RT-PCR方法探讨人骨肉瘤U-2OS细胞在薯蓣皂苷元作用后,其基质金属蛋白酶- 9(MMP-9)和基质金属酶组织抑制剂-1(TIMP-1)mRNA所发生的变化,结果薯蓣皂苷元对U-2OS细胞的生长具有明显的抑制作用,IC50(24h)为45 μmol／L:薯蓣皂苷元抑制U-2OS细胞MMP-9基因转录,而TIMP-1基因转录不受影响。说明薯蓣皂苷元明显抑制U-2OS细胞生长,抑制其MMP-9基因转录,对骨肉瘤侵袭和转移有一定抑制作用。 展开更多

关键词 薯蓣皂苷元 u-2os细胞 MMP-9/TIMP-1 MTT RT-PCR

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薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制 被引量：1

13

作者 洪振强 张俐 +1 位作者 王和鸣 洪海森 《福建中医学院学报》 2009年第5期52-54,60,共4页

目的探讨薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制。方法用透射电镜、AO/EB染色法观察U-2OS细胞的形态学变化,用蛋白印迹法检测Caspase-8表达水平。结果经薯蓣皂苷元处理的U-2OS细胞呈典型的凋亡形态学改变,其Caspase-8蛋白表达... 目的探讨薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制。方法用透射电镜、AO/EB染色法观察U-2OS细胞的形态学变化,用蛋白印迹法检测Caspase-8表达水平。结果经薯蓣皂苷元处理的U-2OS细胞呈典型的凋亡形态学改变,其Caspase-8蛋白表达增强。结论薯蓣皂苷元通过Caspase-8途径诱导U-2OS细胞凋亡而抑制其增殖。 展开更多

关键词 薯蓣皂苷元 u-2os细胞凋亡 CASPASE-8

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p16基因对骨肉瘤U-2OS细胞的抑制效应

14

作者 夏羿凡 余娴 +1 位作者 冯丽 袁斌 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期852-854,共3页

目的探讨p16基因对骨肉瘤U-2OS细胞的抑制效应。方法将p16基因真核表达质粒pcDNA3-HA-p16和pcDNA3-HA质粒分别转染U-2OS细胞,并设未转染阴性对照组,采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,PI单染法分析细胞周期的分布,DNA ladder法结合PI单染... 目的探讨p16基因对骨肉瘤U-2OS细胞的抑制效应。方法将p16基因真核表达质粒pcDNA3-HA-p16和pcDNA3-HA质粒分别转染U-2OS细胞,并设未转染阴性对照组,采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,PI单染法分析细胞周期的分布,DNA ladder法结合PI单染法检测细胞的凋亡情况。结果 p16基因可显著抑制U-2OS细胞的增殖(P<0.05),且在一定范围内呈剂量效应关系;p16基因可使U-2OS细胞G1期比例显著升高(P<0.05),S期比例显著降低(P<0.05);p16基因可使U-2OS细胞凋亡率明显上升(P<0.05),细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳后呈典型的DNA ladder。结论 p16基因可显著抑制U-2OS细胞增殖,使细胞阻滞于G1期,并促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 基因 p16 骨肉瘤 u-2os细胞 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡

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沉默Sema6A基因对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和转移的影响

15

作者 赵书杰 蒋羽清 +2 位作者 丁寅 张强 周栋 《实用临床医药杂志》 CAS 2016年第9期88-91,96,共5页

目的检测信号素6A(Sema6A)基因在骨肉瘤细胞系中的表达情况,探讨RNA干扰Sema6A基因对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨肉瘤细胞株U-2OS、Saos-2及MG-63中Sema6A的mRNA表达水平。... 目的检测信号素6A(Sema6A)基因在骨肉瘤细胞系中的表达情况,探讨RNA干扰Sema6A基因对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨肉瘤细胞株U-2OS、Saos-2及MG-63中Sema6A的mRNA表达水平。设计并合成针对Sema6A的小干扰RNA(siRNA)3条及阴性对照siRNA,在Lipofectamine RNAi MAX介导下转染U-2OS细胞,通过qRT-PCR检测Sema6A mRNA水平表达及蛋白质印迹法检测Sema6A蛋白水平,进而筛选出转染效率高的siRNA,CCK-8检测各组细胞活力,Transwell细胞侵袭和迁移实验检测各组细胞的侵袭及迁移能力。结果骨肉瘤细胞株中,Sema6A mRNA在U-2OS中表达最高。瞬时转染Sema6A siRNA的U-2OS细胞中Sema6A的mRNA及蛋白水平较阴性对照组均下降,与阴性对照组相比,实验组细胞的增殖、侵袭及迁移能力均增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默Sema6A基因可以增强U-2OS细胞的增殖、侵袭及迁移能力。 展开更多

关键词 Sema6A基因 RNA干扰 u-2os细胞 增殖 转移

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Notch-1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U-2OS存活率的影响 被引量：4

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作者 齐磊 段永刚 +4 位作者 丁英奇 张龙 刘玉章 唐晓龙 伍骥 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2120-2125,共6页

目的:探讨Notch-1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U-2OS细胞存活率的影响及其作用机制。方法:双氢青蒿素(5、10、15和20μmol/L)孵育U-2OS细胞后,采用免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应检测骨肉瘤细胞中Notch-1、基质金属蛋白酶(MMP... 目的:探讨Notch-1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U-2OS细胞存活率的影响及其作用机制。方法:双氢青蒿素(5、10、15和20μmol/L)孵育U-2OS细胞后,采用免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应检测骨肉瘤细胞中Notch-1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和Notch-1通路下游基因Hes-1的蛋白和mRNA的表达水平。下调Notch-1表达后,采用MTT法、免疫印迹法和细胞迁移实验检测在双氢青蒿素作用下U-2OS细胞的存活率,MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表达以及U-2OS细胞的迁移能力。结果:免疫印迹法与逆转录聚合酶链反应结果显示双氢青蒿素呈剂量依赖性降低U-2OS细胞中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白和mRNA的表达水平(P<0.05);下调Notch-1表达后,增强了双氢青蒿素抑制U-2OS细胞生长的作用,MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表达及细胞迁移能力进一步降低,显著低于加药组(P<0.05)。结论:双氢青蒿素可抑制U-2OS细胞中Notch-1通路的活性;下调Notch-1的表达可增强双氢青蒿素抗骨肉瘤的作用。 展开更多

关键词 NOTCH-1 双氢青蒿素 人骨肉瘤细胞株u-2os 细胞存活率

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白芦藜醇对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响及其分子机制 被引量：2

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作者 王浩 唐宁曼 +1 位作者 张雄 王进 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期39-44,共6页

目的观察白芦藜醇(resveratrol,Res)对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞U-2OS,用不同浓度的Res(5、10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测Res对U-2OS细胞增... 目的观察白芦藜醇(resveratrol,Res)对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞U-2OS,用不同浓度的Res(5、10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测Res对U-2OS细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对细胞周期和凋亡的影响;应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶活性;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达水平。结果 Res作用24 h时,与空白对照组及DMSO组比较,20和40μmol/L Res组的细胞增殖抑制率、G0/G1和G2/M期的细胞比例、细胞凋亡率、Caspase-3酶活性显著升高(P<0.05),S期细胞比例显著降低(P<0.05);20μmol/L Res组U-2OS细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论 Res通过诱导提高Caspase-3酶活性,上调促凋亡基因Bax、Caspase-3及下调抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,从而抑制U-2OS细胞的增殖,促进其凋亡,为Res治疗骨肉瘤提供了实验依据。 展开更多

关键词 白芦藜醇 骨肉瘤细胞u-2os 细胞增殖 细胞凋亡

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异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS生长的影响 被引量：2

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作者 王小侠 张珏 +2 位作者 李建 夏咏梅 潘红 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期230-237,共8页

背景与目的:骨肉瘤恶性程度高、发展迅速、易转移且致残致死率高;其常用化疗药物的长期应用不良反应较大,存在着一定的局限性。异甜菊醇具有四环二萜结构,是很多抗癌药的合成起始剂,但其自身的抗癌活性鲜有报道。该研究旨在考察异甜菊... 背景与目的:骨肉瘤恶性程度高、发展迅速、易转移且致残致死率高;其常用化疗药物的长期应用不良反应较大,存在着一定的局限性。异甜菊醇具有四环二萜结构,是很多抗癌药的合成起始剂,但其自身的抗癌活性鲜有报道。该研究旨在考察异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS生长的影响,并初步探讨其作用机制。方法:通过MTT实验检测异甜菊醇对U-2OS细胞生长的影响;分别通过Hoechst 33342和PI染色分析细胞状态,检测细胞活性氧和细胞膜电位;用流式细胞术分析异甜菊醇处理细胞后细胞周期;通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的差异表达。结果:异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS的抑制呈现出时间和剂量依赖性;染色和流式细胞术实验显示,异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS作用24 h观察到细胞S期周期阻滞,48 h时观察到细胞凋亡;随着药物浓度升高活性氧显著增多,细胞膜电位逐渐降低,促凋亡相关蛋白Bax的表达上调,抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达下调。结论:异甜菊醇对人骨肉瘤U-2OS细胞有抑制生长作用,其作用机制可能与上调Bax及下调Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达有关。 展开更多

关键词 异甜菊醇 u-2os 生长抑制 凋亡

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FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤U-2OS细胞顺铂耐药中的作用 被引量：1

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作者 张玲 邵华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期716-720,共5页

目的:探讨FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药中的作用。方法:利用RT-PCR和Western blotting方法检测人骨肉瘤细胞U-2OS在常氧及缺氧条件下FOXO3a的表达水平,Western blotting检测转染FOXO3a-si RNA和HIF-1α-si RNA对... 目的:探讨FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药中的作用。方法:利用RT-PCR和Western blotting方法检测人骨肉瘤细胞U-2OS在常氧及缺氧条件下FOXO3a的表达水平,Western blotting检测转染FOXO3a-si RNA和HIF-1α-si RNA对细胞内FOXO3a和HIF-1α表达的影响,CCK-8和Annexin V/PI染色法检测FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤细胞DDP耐药中的作用。结果:缺氧可使人骨肉瘤细胞U-2OS中FOXO3a mRNA和蛋白表达升高(均P<0.05)。FOXO3a的表达受HIF-1α调控,与正常细胞组和转染阴性序列HIF-1α-NC组相比,HIF-1α-siRNA组FOXO3a蛋白表达量均显著降低[(0.38±0.03)vs(0.89±0.08),(0.91±0.07),均P<0.01]。在缺氧条件下,FOXO3a-si RNA可降低U-2OS细胞对DDP的耐受性[(38.50±2.83)%vs(61.75±5.73)%,P<0.01],增加DDP诱导的U-2OS细胞凋亡[(73.41±6.13)%vs(32.38±2.23)%,(55.89±4.46)%,均P<0.05]。结论:缺氧通过HIF-1α依赖的方式诱导骨肉瘤细胞内FOXO3a表达,从而增强瘤细胞对DPP的耐药性。 展开更多

关键词 叉头转录因子O亚型3a 缺氧 骨肉瘤 u-2os细胞 顺铂 耐药

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片仔癀对骨肉瘤U-2OS细胞MMP-9表达的影响 被引量：3

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作者 关君一 张俐 《福建中医药》 2011年第6期48-50,共3页

骨肉瘤是严重影响青壮年身体健康的恶性肿瘤,在原发性骨恶性肿瘤中发病率最高,约占所有癌症的0.3%。男女比例为1.5∶1。骨肉瘤可发生于骨骼的任何部位,尤其是股骨远端、胫骨与肱骨近端。该病病情进展迅速,恶性程度高,常常在早期发生血... 骨肉瘤是严重影响青壮年身体健康的恶性肿瘤,在原发性骨恶性肿瘤中发病率最高,约占所有癌症的0.3%。男女比例为1.5∶1。骨肉瘤可发生于骨骼的任何部位,尤其是股骨远端、胫骨与肱骨近端。该病病情进展迅速,恶性程度高,常常在早期发生血行或淋巴转移,预后很差,恶性程度高。 展开更多

关键词 片仔癀 骨肉瘤 u-2os细胞 MMP-9

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