利用核酸适配体封闭Tth DNA聚合酶突变体实现温启动一步法RT-qPCR 被引量：1

1

作者 张雅琪 张建 +4 位作者 唐雨婷 黄庆媛 季璐 卢辰 罗志丹 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期51-58,共8页

目的:Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶。为消除其在一步法逆转录-实时荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative real-time PCR,RT-qPCR)反应时的非特异性扩增,筛选可在较低温度下抑制其活性... 目的:Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶。为消除其在一步法逆转录-实时荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative real-time PCR,RT-qPCR)反应时的非特异性扩增,筛选可在较低温度下抑制其活性的核酸适配体,从而实现温启动一步法RT-qPCR。方法:在前期获得不依赖Mn2+的Tth DNA聚合酶突变体的基础上,检验四种DNA适配体及其对应的RNA适配体对Tth DNA聚合酶突变体的DNA聚合酶活性和逆转录酶活性的封闭效果以及解离温度,并通过分子对接模拟适配体与聚合酶的结合模式。结果:TQ21-11和TQ21-11-RNA两种适配体在40℃可有效抑制Tth DNA聚合酶的DNA聚合酶活性和逆转录酶活性,抑制率达到97%以上;两种适配体在50℃可几乎完全解离。这两种适配体均可用于温启动一步法RT-qPCR,其中TQ21-11-RNA的非特异性扩增更低。结论:利用TQ21-11和TQ21-11-RNA两种适配体在室温下封闭Tth DNA聚合酶突变体活性,可以实现温启动一步法RT-qPCR。 展开更多

关键词 核酸适配体 tth DNA聚合酶突变体 温启动 一步法RT-qPCR

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重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定 被引量：1

2

作者 李华 杨玲玲 杜红旗 《河南大学学报（自然科学版）》 CAS 2019年第3期311-317,共7页

Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99... Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99b/Tth并转化表达菌E.coli DH5α,利用IPTG诱导Tth基因表达,并采用热处理、Ni2+柱纯化融合His-tag的Tth DNA聚合酶,最后利用PCR、RT-PCR鉴定其活性.结果显示,本研究获得Tth DNA聚合酶基因全长2 505bp,成功表达并获得高纯度高活性的重组Tth DNA聚合酶,1L发酵液所得粗酶液中,酶活性约有800 000U,酶的比活约为6 315U/mg.本研究最终实现了Tth DNA聚合酶的高效国产化并降低了实验成本. 展开更多

关键词 tth 基因克隆 Ni2+柱 THERMUS THERMOPHILUS 酶活

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一种快速精确测定Tth DNA聚合酶活性的方法

3

作者 陈晓雨 张建 +4 位作者 张新亚 唐雨婷 邵钰晨 罗志丹 卢辰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期281-286,共6页

Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶,但在生产和改造过程中,缺乏准确、快速、简便测定酶活的方法。利用高灵敏度双链特异性核酸染料PicoGreen和特殊设计的发夹型探针,建立了一种测定Tth DNA聚合酶活性... Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶,但在生产和改造过程中,缺乏准确、快速、简便测定酶活的方法。利用高灵敏度双链特异性核酸染料PicoGreen和特殊设计的发夹型探针,建立了一种测定Tth DNA聚合酶活性的新方法。该方法的标准曲线线性关系良好,决定系数R^(2)达到0.99以上,灵敏度和准确度高,操作简单,测定结果与商业化产品标定的活力相符,经荧光定量PCR验证能够反映真实使用环境下的酶活。该方法还可推广到测定其他DNA聚合酶活性,将为DNA聚合酶的生产和改造提供有效的检测手段。 展开更多

关键词 tth DNA聚合酶 酶活性测定 荧光染料 发夹型探针

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Tth DNA聚合酶基因的分段PCR克隆及其表达载体构建 被引量：3

4

作者 蒋永强 蒙健宗 +1 位作者 黄鲲 黄日波 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 1999年第1期33-38,共6页

利用计算机软件对取自ＧｅｎＢａｎｋ的嗜热栖热菌ＴｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓＨＢ－８的ＤＮＡ聚合酶基因（Ｔｔｈ）进行分析，并设计了两组引物进行ＰＣＲ，分段克隆该基因。将两个ＰＣＲ产物同时连接到另一个克隆载体上... 利用计算机软件对取自ＧｅｎＢａｎｋ的嗜热栖热菌ＴｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓＨＢ－８的ＤＮＡ聚合酶基因（Ｔｔｈ）进行分析，并设计了两组引物进行ＰＣＲ，分段克隆该基因。将两个ＰＣＲ产物同时连接到另一个克隆载体上，使之成为完整基因，最后将完整基因克隆到表达载体上，构建了Ｔｔｈ基因的表达质粒，使之适合在以大肠杆菌为寄主的细胞中进行表达。 展开更多

关键词 嗜热栖热菌 DNA聚合酶 基因克隆 表达载体

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丹佛斯天磁~?高压比TTH/TGH系列屡获国际殊荣

5

《制冷技术》 2018年第2期50-50,共1页

在2018年度中国制冷展＂创新产品＂评选结果中,丹佛斯天磁~？磁悬浮无油压缩机再次榜上有名,全新丹佛斯天磁~？TTH/TGH高压比系列无油压缩机在继2016年的天磁TT700与2017年的TG系列之后,连续第三年获得中国制冷展制冷部件类别＂创新产... 在2018年度中国制冷展＂创新产品＂评选结果中,丹佛斯天磁~？磁悬浮无油压缩机再次榜上有名,全新丹佛斯天磁~？TTH/TGH高压比系列无油压缩机在继2016年的天磁TT700与2017年的TG系列之后,连续第三年获得中国制冷展制冷部件类别＂创新产品奖＂。2018年4月9日上午,2018制冷展创新奖丹佛斯奖项颁奖典礼在制冷展丹佛斯展台举行。 展开更多

关键词 tth/TGH 高压比 无油压缩机 丹佛斯

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运用Tth聚合酶的快速非放射性差异展示方法

6

《国外医学（遗传学分册）》 1998年第4期215-216,共2页

运用Ｔｔｈ聚合酶的快速非放射性差异展示方法目前，在已有的鉴定基因表达差异的方法中，随机引物ＰＣＲ得出的ＲＮＡ指纹图通常用于检测不同来源的ＲＮＡ表达差异。而引物结合位点的不同，可导致模板指纹图之间的差异。差异展示在生物... 运用Ｔｔｈ聚合酶的快速非放射性差异展示方法目前，在已有的鉴定基因表达差异的方法中，随机引物ＰＣＲ得出的ＲＮＡ指纹图通常用于检测不同来源的ＲＮＡ表达差异。而引物结合位点的不同，可导致模板指纹图之间的差异。差异展示在生物学中有许多不同的应用，包括肿瘤形成... 展开更多

关键词 RNA指纹图谱 非放射性 差异展示 tth聚合酶

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NH90 TTH运输直升机

7

《环球军事》 2004年第09S期32-33,共2页

关键词 NH90tth运输直升机 结构设计 功能 武器装备

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不同机体状态即时揿针针刺“四关穴”的脑功能活动响应异同研究

8

作者 张心悦 周俊 +4 位作者 蒋楠楠 黎信陵 胡胜婕 李政杰 曾芳 《中华中医药杂志》 北大核心 2025年第5期2123-2128,共6页

目的:比较不同机体状态受试者即时揿针针刺“四关穴”的中枢响应特征异同。方法:20例紧张型头痛(TTH)患者和40名健康受试者均进行静息态功能磁共振(rs-fMRI)扫描及即时揿针针刺“四关穴”fMRI扫描,基于低频振幅比率(fALFF)分析方法比较... 目的:比较不同机体状态受试者即时揿针针刺“四关穴”的中枢响应特征异同。方法:20例紧张型头痛(TTH)患者和40名健康受试者均进行静息态功能磁共振(rs-fMRI)扫描及即时揿针针刺“四关穴”fMRI扫描,基于低频振幅比率(fALFF)分析方法比较两者即时揿针针刺“四关穴”的脑功能活动响应异同。结果:TTH患者揿针针刺“四关穴”可靶向性下调右侧中央前回的fALFF值,且引起边缘-旁边缘系统更广泛的功能活动。针刺后两组受试者均出现额上回、额中回的fALFF值升高,舌回、枕中回/枕下回、中央前回/中央后回的fALFF值降低。结论:疼痛调节相关脑区、边缘-旁边缘系统的广泛功能活动改变可能是TTH疾病状态揿针针刺“四关穴”相对特异性的特征,认知、视觉、感觉运动皮层功能活动的改变是TTH疾病状态与健康状态揿针针刺“四关穴”的共同中枢响应特征。 展开更多

关键词 机体状态 四关穴 中枢响应 紧张型头痛 即时针刺 脑功能 功能性磁共振成像

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求证紧张型头痛与风湿头痛全等的研究 被引量：5

9

作者 伍志勇 陈宝田 +1 位作者 聂玲辉 许慧 《热带医学杂志》 CAS 2011年第4期404-407,共4页

目的研究紧张型头痛与中医风湿头痛的对等关系。方法从理论和临床两个方面论证:①理论研究:734例头痛患者的中医舌脉调查及138例TTH患者中医证型的分布情况;②临床研究:随机选取2007年3月至2010年10月在广州南方医科大学南方医院中医科... 目的研究紧张型头痛与中医风湿头痛的对等关系。方法从理论和临床两个方面论证:①理论研究:734例头痛患者的中医舌脉调查及138例TTH患者中医证型的分布情况;②临床研究:随机选取2007年3月至2010年10月在广州南方医科大学南方医院中医科头痛专科门诊就诊的TTH患者138例,将此138名患者随机分为头痛新1号组、羌活胜湿汤组、盐酸乙哌立松片组各46例,分别给予头痛新1号方、羌活胜湿汤方、盐酸乙哌立松片治疗,疗程3个月。结果 734例头痛患者,按8型分证,仅舌脉而论,573例为舌质暗红或者红,苔薄白,脉缓或弦缓;138例TTH患者中医证型分布如下:风湿头痛101例(73.18%),风湿兼血瘀头痛26例(18.84%),风湿兼肝阳上亢头痛11例(7.98%)。临床治疗:头痛新1号组总有效率为93.4%,羌活胜湿汤组总有效率为76.0%,西药组为65.3%,头痛新1号组疗效明显优于两对照组。结论中医头痛的分型是症状学诊断与中医的舌脉没有明显相关性,TTH属于中医的风湿头痛范畴,TTH的两个亚型分别对应于风湿兼血瘀头痛、风湿兼肝阳上亢头痛,临床上也进一步论证TTH的中医治疗当以祛风、活血、除湿立法,兼以养肝、平肝、安神之法疗效更佳。 展开更多

关键词 tth 风湿头痛 全等 头痛新1号

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养血清脑颗粒治疗紧张性头痛32例 被引量：4

10

作者 何平 杨桂华 陈建南 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期933-934,共2页

关键词 养血清脑颗粒 治疗 紧张性头痛 tth

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紧张型头痛的治疗进展 被引量：8

11

作者 张颖 王振海 《医学教育探索》 2010年第12期1724-1728,共5页

紧张型头痛（Tension-type headache,TTH）是最常见的一种头痛类型,一般认为其患病率高于偏头痛,约占门诊头痛病人的半数。流行病学调查显示女性中患病率更高,而且TTH的患病率在两性中随着年龄增高而下降[1]。

关键词 紧张型头痛 治疗 流行病学调查 患病率 头痛病人 头痛类 偏头痛 tth

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按摩治疗紧张型头痛380例 被引量：2

12

作者 刘立明 朱才兴 +1 位作者 成忠实 孙碧莲 《人民军医》 2002年第11期670-671,共2页

关键词 手法治疗 tth 中医疗法 按摩 紧张型头痛

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紧张型头痛患者的生活事件、心身症状及其相关关系 被引量：2

13

作者 黄秀琴 张倩 +3 位作者 杨小柳 何晓冰 骆利 苑宏 《中国健康心理学杂志》 2005年第3期168-169,共2页

目的探讨紧张型头痛(TTH)住院患者的生活事件、心身症状及其相关关系。方法将35例诊断为TTH的住院军人作为患者组,以35名正常军人作为对照组,分别用生活事件量表及症状自评量表(SCL—90)对他们的生活事件及心身症状进行评定,并对二者进... 目的探讨紧张型头痛(TTH)住院患者的生活事件、心身症状及其相关关系。方法将35例诊断为TTH的住院军人作为患者组,以35名正常军人作为对照组,分别用生活事件量表及症状自评量表(SCL—90)对他们的生活事件及心身症状进行评定,并对二者进行相关分析。结果TTH患者所经历的正性生活事件分值低于对照组(P<0.01)、而负性生活事件分值高于对照组(P<0.01),两组间生活事件总值无差异(P>0.05)。TTH患者SCL—90的躯体化、人际敏感、抑郁、焦虑、恐怖、偏执及精神病性因子分均高于对照组(P<0.05),强迫、敌对因子分与对照组无差别(P>0.05)。SCL-90总分及阳性项目数与正性生活事件之间呈负相关关系(P<0.01),与负性生活事件之间呈正相关关系(P<0.01),与生活事件总值之间无明显相关关系(P>0.05)。结论TTH住院军人经历了较多的不良生活事件,也出现较多的心身症状。 展开更多

关键词 相关关系 心身症状 紧张型头痛 症状自评量表(SCL-90) 负性生活事件 生活事件量表 不良生活事件 住院军人 对照组 阳性项目数 tth 住院患者 相关分析 人际敏感 精神病性 因子分 躯体化 分值 正性

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紧张型头痛研究新进展 被引量：5

14

作者 于学英 《继续医学教育》 2006年第6期31-36,共6页

关键词 紧张型头痛 研究新进展 RASMUSSEN 生活质量 原发性头痛 常见症状 效率降低 神经科 偏头痛 tth

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紧张型头痛颅周肌肉研究 被引量：1

15

作者 李英杰 郎森阳 《国外医学（物理医学与康复学分册）》 2002年第2期52-53,72,共3页

紧张型头痛的病理机制仍不完全清楚 ,颅周肌肉障碍在其发病中的作用有待深入研究。本文综述了颅周肌肉紧张程度与肌肉压痛和紧张型头痛的关系 ,紧张型头痛患者颅周肌肉电生理学改变及针对颅周肌肉障碍机理治疗的临床效果。

关键词 紧张型头痛 颅周肌肉 肌肉压痛 tth 电生理学 颅周肌肉紧张程度

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紧张型头痛发病机制的研究 被引量：9

16

作者 刘晓慧 高慧中 薛国芳 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2023年第1期64-66,F0003,共4页

紧张型头痛(tension type headache,TTH)是最常见的头痛疾病,全球的每年患病率为26%~38%,大多数紧张型头痛为发作性,且具有自限性。目前,TTH主要的发病机制涉及到外周机制、中枢机制及遗传机制等方面,本文将对TTH发病机制的相关文献做... 紧张型头痛(tension type headache,TTH)是最常见的头痛疾病,全球的每年患病率为26%~38%,大多数紧张型头痛为发作性,且具有自限性。目前,TTH主要的发病机制涉及到外周机制、中枢机制及遗传机制等方面,本文将对TTH发病机制的相关文献做一综述。 展开更多

关键词 紧张型头痛 中枢机制 发病机制 发作性 遗传机制 自限性 患病率 tth

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偏头痛和紧张型头痛患者就诊因素分析 被引量：9

17

作者 王运锋 周冀英 +3 位作者 柳华 杜鑫 张珊珊 刘若伟 《西部医学》 2013年第6期835-837,共3页

目的探讨影响偏头痛和紧张型头痛(TTH)的就诊因素。方法通过横断面调查,收集就诊于普通神经内科门诊的偏头痛和TTH患者,分别分析不同就诊状态的偏头痛和TTH的人口学特征与临床特征。结果共纳入偏头痛患者389例,TTH患者390例,68.6%(267/... 目的探讨影响偏头痛和紧张型头痛(TTH)的就诊因素。方法通过横断面调查,收集就诊于普通神经内科门诊的偏头痛和TTH患者,分别分析不同就诊状态的偏头痛和TTH的人口学特征与临床特征。结果共纳入偏头痛患者389例,TTH患者390例,68.6%(267/389例)的偏头痛患者和64.9%(253/390例)的TTH患者既往曾因头痛就诊过(P>0.05)。与未就诊过的人群比较,曾因头痛就诊过医疗机构的偏头痛患者年龄偏大,程度较重,病程较长,头痛频率频繁(P<0.05);曾就诊过的TTH患者的频率较频繁,病程也较长(P<0.05)。不同就诊状态的偏头痛和TTH患者的教育程度也有明显差异(P<0.05)。结论年长、中重度头痛、频繁头痛、长病程、低教育水平是影响偏头痛患者就诊的主要因素,频繁头痛、长头痛病程及低教育水平是影响紧张型头痛就诊的主要因素。 展开更多

关键词 偏头痛 紧张型头痛 临床特征 就诊因素

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希望特质量表在中学生群体中的信、效度检验 被引量：13

18

作者 石国兴 田莉娟 《心理与行为研究》 CSSCI 2009年第3期203-206,共4页

通过对770名中学生施测,检验Snyder的希望特质量表(TTHS)的信度和效度。结果表明,总量表的重测信度、量表的结构效度和效标效度符合心理测量学要求。TTHS可以作为测量中国中学生希望特质的工具。在中国文化背景下,Snyder提出的希望特质... 通过对770名中学生施测,检验Snyder的希望特质量表(TTHS)的信度和效度。结果表明,总量表的重测信度、量表的结构效度和效标效度符合心理测量学要求。TTHS可以作为测量中国中学生希望特质的工具。在中国文化背景下,Snyder提出的希望特质仍然是一种积极的心理品质,希望特质也从某方面代表着中国中学生的心理健康水平。 展开更多

关键词 中学生 希望特质问卷 信度 效度

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紧张型头痛患者促肾上腺皮质激素释放激素的改变 被引量：2

19

作者 杨启纲 虞金霞 +1 位作者 陈贵海 张琼 《安徽医学》 2011年第5期571-573,共3页

目的探讨紧张型头痛的中枢性发病机制。方法用酶联免疫吸附实验检测受试者血清中肾上腺皮质激素释放激素的含量。结果与对照组相比,紧张型头痛患者血清中促肾上腺皮质激素释放激素含量显著升高。结论紧张型头痛患者下丘脑-垂体-肾上腺... 目的探讨紧张型头痛的中枢性发病机制。方法用酶联免疫吸附实验检测受试者血清中肾上腺皮质激素释放激素的含量。结果与对照组相比,紧张型头痛患者血清中促肾上腺皮质激素释放激素含量显著升高。结论紧张型头痛患者下丘脑-垂体-肾上腺轴功能亢进,其发病机制可能涉及下丘脑功能失调。 展开更多

关键词 紧张型头痛 促肾上腺皮质激素释放激素 发病机制

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原发性头痛的发病机制和临床神经电生理特点 被引量：6

20

作者 吴美娜（综述） 季晓林（审校） 《癫痫与神经电生理学杂志》 2010年第2期116-121,共6页

头痛是常见神经系统症候，2004年国际头痛学会发布了修订的第2版《头痛的国际分类ICHDⅡ》，仍将头痛分为原发性和继发性两大类。原发性头痛包括偏头痛、紧张性头痛（TTH）、丛集性头痛（CH）和其他三叉神经自主神经性头痛、其他原发性... 头痛是常见神经系统症候，2004年国际头痛学会发布了修订的第2版《头痛的国际分类ICHDⅡ》，仍将头痛分为原发性和继发性两大类。原发性头痛包括偏头痛、紧张性头痛（TTH）、丛集性头痛（CH）和其他三叉神经自主神经性头痛、其他原发性头痛4种类型。当前原发性头痛的诊断主要是临床诊断，缺乏客观评价的指标和检测方法。本文结合文献复习探讨原发性头痛的发病机制及临床神经电生理检测方法在诊断偏头痛、TTH、CH中的应用价值。 展开更多

关键词 偏头痛 紧张性头痛(tth) 丛集性头痛(cH) 三叉神经 皮质扩散性抑制(CSD) 导水管周围灰质(PAG) 降钙素基因相关肽(CGRP) 神经激肽A(NKA) 三叉神经一颈反射(TCR) 外感受抑制模式(ESP) 一氧化氮合成酶(SOS)

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