降落PCR技术检测环状RNA表达量的方法评价

1

作者 刘洋 李亚奇 +4 位作者 刘越 李雪莹 龙奕妃 郑志坚 孟春燕 《中国煤炭工业医学杂志》 2024年第2期220-224,共5页

目的 通过扩增低丰度表达的环状RNA,与常规PCR反应程序比较,评价降落PCR扩增环状RNA的定性定量结果。方法 人肝癌细胞系HepG2细胞中运用Trizol法提取RNA,普通PCR和降落PCR程序扩增circHDAC2片段,琼脂糖凝胶电泳比较两种PCR产物的电泳结... 目的 通过扩增低丰度表达的环状RNA,与常规PCR反应程序比较,评价降落PCR扩增环状RNA的定性定量结果。方法 人肝癌细胞系HepG2细胞中运用Trizol法提取RNA,普通PCR和降落PCR程序扩增circHDAC2片段,琼脂糖凝胶电泳比较两种PCR产物的电泳结果。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对连续5倍稀释的cDNA进行降落PCR程序扩增,比较定量准确度并计算扩增效率。结果 相较于普通PCR,降落PCR程序法能够在不同丰度样本中扩增出circHDAC2,且熔解曲线结果显示单一熔解峰。Sanger测序结果证明扩增产物正确。5倍梯度浓度稀释样本进行降落PCR程序结果显示条带单一,说明降落PCR程序具有良好的敏感性,能够对低丰度circHDAC2进行有效扩增,增效率可达93.27%。结论 降落PCR程序法较普通PCR法扩增circHDAC2基因特异性更高,降落PCR方法在灵敏度、特异度上均优于普通PCR。 展开更多

关键词 降落RT-PCR 环状RNA 实时荧光定量PCR

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不同对虾种间共用微卫星DNA引物的研究 被引量：20

2

作者 张天时 刘萍 +3 位作者 孟宪红 王伟继 孔杰 王清印 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第11期80-85,共6页

采用已发表的斑节对虾的30对微卫星引物,对部分微卫星引物在中国对虾、凡纳对虾、日本对虾中的通用性进行了研究。通过所建立的降温PCR(Touchdown PCR)方法对3种对虾的DNA进行PCR扩增,筛选出3对引物在3种对虾中均能产生清晰谱带。根据... 采用已发表的斑节对虾的30对微卫星引物,对部分微卫星引物在中国对虾、凡纳对虾、日本对虾中的通用性进行了研究。通过所建立的降温PCR(Touchdown PCR)方法对3种对虾的DNA进行PCR扩增,筛选出3对引物在3种对虾中均能产生清晰谱带。根据上述结果适当调整PCR反应体系中各试剂的量及反应条件,达到了理想的结果。利用这3对引物对3种对虾进行遗传标记分析,结果显示,PCR扩增产物条带清晰,特异性强,每对引物在3种对虾间扩增出的特异性片段大小几乎一致。研究表明,3种对虾基因组间存在一定程度的相似性,引物W15-16、W21-22和W45-46可直接应用于中国对虾、凡纳对虾、日本对虾、斑节对虾分子标记的基因组比较作图,也为图谱克隆法提供了新的思路。 展开更多

关键词 对虾养殖 图谱克隆法 聚合酶链式反应 PCR 分子标记技术

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改良的降落PCR与普通PCR结果比较 被引量：11

3

作者 张贵星 袁保梅 +1 位作者 许培荣 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第3期352-354,共3页

目的 :设计并验证一改良的降落ＰＣＲ(ＭＴＤ ＰＣＲ)程序。方法 :自盐藻ｂａｒｄａｗｉｌ中提取基因组ＤＮＡ作为ＰＣＲ模板 ,使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶及ｐｆｕＤＮＡ聚合酶 ,运用普通ＰＣＲ和ＭＴＤ ＰＣＲ程序 ,扩增胡萝卜素生物合成... 目的 :设计并验证一改良的降落ＰＣＲ(ＭＴＤ ＰＣＲ)程序。方法 :自盐藻ｂａｒｄａｗｉｌ中提取基因组ＤＮＡ作为ＰＣＲ模板 ,使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶及ｐｆｕＤＮＡ聚合酶 ,运用普通ＰＣＲ和ＭＴＤ ＰＣＲ程序 ,扩增胡萝卜素生物合成相关基因 (ｃｂｒ)上游启动子序列 ,并电泳比较ＰＣＲ扩增产物的特异性。结果 :使用普通Ｔａｑ酶进行ＰＣＲ ,普通ＰＣＲ程序产生2 0 0ｂｐ , 50 0ｂｐ和 1 2 72ｂｐ的 3条带 ,而ＭＴＤ ＰＣＲ程序仅克隆出 1 2 72ｂｐ的特异带 ;利用高保真的ｐｆｕＤＮＡ聚合酶作ＰＣＲ ,在ＭＴＤ ＰＣＲ泳道中也仅有 1 2 72ｂｐ 1条带 ,而普通ＰＣＲ除了产生 1 2 72ｂｐ的特异带外 ,还出现 1条 50 0ｂｐ的非特异带。结论 :无论使用普通Ｔａｑ酶或高保真酶ｐｆｕ,改良的ＭＴ ＰＣＲ程序均明显提高ＰＣＲ的特异性 ,提示它可用于克隆普通ＰＣＲ难以克隆的基因片段 。 展开更多

关键词 改良降落PCR PCR PCR特异性 PFU DNA聚合酶

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应用降落PCR和正交设计优化甘蔗“割手密”SSR-PCR反应体系 被引量：8

4

作者 杨绍林 王先宏 +4 位作者 李苏洁 胡德分 娄红波 肖关丽 杨清辉 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期431-436,共6页

甘蔗野生种割手密抗逆性强,在甘蔗抗逆育种中具有较好的应用前景;割手密SSR分子标记技术体系的建立及优化可为割手密指纹图谱绘制、种质鉴定、遗传多样性及亲缘关系分析提供技术支持。本研究以21份割手密材料用改良CTAB法提取DNA,采用降... 甘蔗野生种割手密抗逆性强,在甘蔗抗逆育种中具有较好的应用前景;割手密SSR分子标记技术体系的建立及优化可为割手密指纹图谱绘制、种质鉴定、遗传多样性及亲缘关系分析提供技术支持。本研究以21份割手密材料用改良CTAB法提取DNA,采用降落PCR和正交试验设计对扩增反应体系主要成分的浓度(DNA模板,引物,Mg2+,d NTPs,Taq聚合酶)进行了优化。结果表明建立的割手密Touchdown SSR-PCR分子标记技术体系操作简便,扩增条带清晰且多态性丰富,有较强的稳定性和可重复性,可为割手密资源的相关研究提供技术支持。 展开更多

关键词 甘蔗 割手密 降落PCR SSR 正交设计

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苹果不同HRM反应体系分析效果评价 被引量：6

5

作者 白牡丹 王彩虹 +2 位作者 殷豪 田义轲 李节法 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期115-120,共6页

高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析是一种新型的DNA多态性快速筛查技术。本研究以苹果品种"富士"和"舞姿"为试材,用来自苹果基因组的SSR标记CH03d11对不同反应体积、不同DNA浓度以及不同PCR退火... 高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析是一种新型的DNA多态性快速筛查技术。本研究以苹果品种"富士"和"舞姿"为试材,用来自苹果基因组的SSR标记CH03d11对不同反应体积、不同DNA浓度以及不同PCR退火程序下的HRM分型效果进行了测试与评估。结果表明:采用5μL反应体积可以获得与10μL或20μL反应体积相同的检测效果。在5μL反应体积中,DNA浓度小到0.25ng/μL时,PCR扩增及随后的HRM分析效果依然良好。另外,研究表明,采用降落PCR扩增模式也能取得良好的HRM多态性检测结果。 展开更多

关键词 苹果(Malus domestica) HRM 反应体积 DNA模板浓度 降落PCR

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水稻花药绒毡层特异表达启动子的分离与表达载体构建 被引量：4

6

作者 马沁沁 张金辉 +2 位作者 陈荣军 邓光兵 余懋群 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期399-403,共5页

从籼稻川75A(OryzasativaL.)黄化苗叶片中直接提取基因组总DNA.根据文献报道的水稻花药绒毡层特异启动子Osg6B序列设计引物,采用TouchdownPCR技术获得水稻花药绒毡层特异表达的启动子Tsp1,将该片段克隆在载体pMD18-TVector上转化到大肠... 从籼稻川75A(OryzasativaL.)黄化苗叶片中直接提取基因组总DNA.根据文献报道的水稻花药绒毡层特异启动子Osg6B序列设计引物,采用TouchdownPCR技术获得水稻花药绒毡层特异表达的启动子Tsp1,将该片段克隆在载体pMD18-TVector上转化到大肠杆菌JM109,并酶切和PCR验证.序列分析发现,该片段与Osg6B启动子同源性为96%,且具有真核生物启动子的多种特征序列,表明启动子Tsp1为来源于籼稻川75A中的水稻花药绒毡层特异表达的启动子.利用该启动子对本实验室保存的质粒pIB467和pIB009进行改造,构建了一个可产生新型雄性不育系的双元植物表达载体pJH401. 展开更多

关键词 绒毡层 启动子 Touchdown PCR 克隆 载体构建

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J亚群禽白血病病毒TD-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：7

7

作者 杭柏林 秦爱建 +4 位作者 钱琨 金文杰 沈海玉 吴晓平 仇钰 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期40-44,共5页

采用J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染DF1细胞提取的总DNA作为模板,以H5和H7为特异性引物,建立检测ALV-J的降落PCR(TD-PCR)方法,并对反应体系进行优化。结果表明:建立TD-PCR方法灵敏度高、特异性强,可检测0.105 ng的DNA,该方法与网状内皮... 采用J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染DF1细胞提取的总DNA作为模板,以H5和H7为特异性引物,建立检测ALV-J的降落PCR(TD-PCR)方法,并对反应体系进行优化。结果表明:建立TD-PCR方法灵敏度高、特异性强,可检测0.105 ng的DNA,该方法与网状内皮组织增生症病毒、马立克病病毒、鸡贫血病毒及I群禽腺病毒没有交叉反应。运用TD-PCR、ELISA以及病毒分离对临床病料进行检测,TD-PCR方法与ELISA检测结果一致(100%),均比病毒分离检出率(75%)高。证明TD-PCR检测ALV-J的方法具有快速、灵敏、特异等优点,可满足临床、生产实际检测的需要。 展开更多

关键词 J亚群禽白血病病毒 降落PCR 病毒检测

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一种改良的扩增cDNA5′末端的方法 被引量：7

8

作者 夏瑞 陆旺金 李建国 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1533-1538,共6页

介绍一种改良的扩增基因5′cDNA序列的方法(改良TdT加尾扩增法)。以龙眼为材料,采用TdT(末端脱氧核苷酸转移酶)加尾、锚定PCR、巢式PCR、降落PCR等多种策略。通过与常规方法(用TaKaRa试剂盒)对比试验,发现该方法原理简单,操作性强;扩增... 介绍一种改良的扩增基因5′cDNA序列的方法(改良TdT加尾扩增法)。以龙眼为材料,采用TdT(末端脱氧核苷酸转移酶)加尾、锚定PCR、巢式PCR、降落PCR等多种策略。通过与常规方法(用TaKaRa试剂盒)对比试验,发现该方法原理简单,操作性强;扩增特异性高,结果真实可靠;同时还具有快速低廉的特点,适合在一般实验室中推广使用。 展开更多

关键词 TDT RACE 降落PCR Dl—Expl

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冠突散囊菌有性孢子发育基因veAcDNA片段的克隆 被引量：6

9

作者 马权 刘永翔 刘作易 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第3期25-27,共3页

为从冠突散囊菌中克隆到与有性发育相关的veA基因片段,根据genbank中不同种真菌的veA相关蛋白质序列同源性,设计简并引物,运用touchdown PCR技术,研究了从冠突散囊菌总RNA中克隆有性孢子发育基因veAcDNA片段。结果表明:克隆得到长度为55... 为从冠突散囊菌中克隆到与有性发育相关的veA基因片段,根据genbank中不同种真菌的veA相关蛋白质序列同源性,设计简并引物,运用touchdown PCR技术,研究了从冠突散囊菌总RNA中克隆有性孢子发育基因veAcDNA片段。结果表明:克隆得到长度为558 pb的cDNA片段。该cDNA片段与棒曲霉veA基因相似性最高,为77%;与构巢曲霉ve A相似性67%。确定为冠突散囊菌veA基因片段。 展开更多

关键词 冠突散囊菌 ve A touchdown PCR

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降落-重叠PCR法四重融合构建平菇同源重组片段 被引量：10

10

作者 柴冉 孙强 邱立友 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期375-379,共5页

对多个长片段的基因融合目前仍缺少有效的方法.本文提出一种新的融合PCR策略,即在常规的重叠PCR的第1步和第2步均增加1个降落PCR程序,减少不适当的退火温度和PCR产物3'端额外碱基A对片段融合、扩增的影响,提高正确融合与扩增的效率... 对多个长片段的基因融合目前仍缺少有效的方法.本文提出一种新的融合PCR策略,即在常规的重叠PCR的第1步和第2步均增加1个降落PCR程序,减少不适当的退火温度和PCR产物3'端额外碱基A对片段融合、扩增的影响,提高正确融合与扩增的效率.结果表明,为构建平菇葡聚糖合成酶启动子的同源重组序列,在4个长度分别是1 015 bp、2 822 bp、2 206 bp和1 008 bp的片段进行融合时,在重叠PCR的第1步加上退火温度61.5℃～57.5℃、每降落0.5℃进行1个循环的降落PCR程序,在重叠PCR的第2步加上退火温度60℃～56℃、每降落0.5℃进行1个循环的降落PCR程序,经过1次PCR即获得顺序正确的全长融合片段.测序结果与4个片段序列的一致性达到98.5%,降落-重叠PCR法对多个长片段的基因融合具有较高的应用价值. 展开更多

关键词 基因融合 重叠PCR 降落PCR 同源重组

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Touchdown PCR检测野生中缅树鼩伯氏疏螺旋体感染 被引量：5

11

作者 柳爱华 程玲 +8 位作者 张才军 陈芳 施明 陈亮 沈培清 刘汝文 角建林 李玛琳 宝福凯 《中国热带医学》 CAS 2009年第4期621-622,734,共3页

目的用Touchdown PCR检测野生中缅树鼩的伯氏疏螺旋体感染。方法从昆明及其周边地区捕获30只野生中缅树鼩,乙醚深度麻醉后处死,取内脏-30℃保存备用。用总DNA提取试剂盒提取组织总DNA,用紫外可见光分光光度计测定样品的DNA含量,用热启动... 目的用Touchdown PCR检测野生中缅树鼩的伯氏疏螺旋体感染。方法从昆明及其周边地区捕获30只野生中缅树鼩,乙醚深度麻醉后处死,取内脏-30℃保存备用。用总DNA提取试剂盒提取组织总DNA,用紫外可见光分光光度计测定样品的DNA含量,用热启动Touchdown PCR技术检测野生中缅树鼩的伯氏疏螺旋体flaB基因。对PCR产物做凝胶电泳,凝胶成像仪观察并照相。结果Touchdown PCR有良好的特异性和敏感性。实验重复3次,结果一致,野生树鼩的伯氏疏螺旋体DNA阳性率为63.33%(19/30)。结论野生树鼩存在伯氏疏螺旋体感染,并且感染率较高。 展开更多

关键词 树鼩 伯氏疏螺旋体 Touchdown PCR 莱姆病

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非编码基因MALAT1功能性序列真核表达载体的构建及其在SW620细胞中的表达 被引量：4

12

作者 杨敏慧 王双双 +2 位作者 王晓燕 徐川 李祖国 《热带医学杂志》 CAS 2010年第3期248-252,257,F0003,共7页

目的构建人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)功能性序列重组真核荧光表达载体,并在人大肠癌SW620细胞株中表达。方法采用RT-touchdown PCR方法,从人正常大肠黏膜组织中提取总RNA,扩增MALAT1功能性序列,将扩增产物克隆至pTA2载体,测序证实... 目的构建人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)功能性序列重组真核荧光表达载体,并在人大肠癌SW620细胞株中表达。方法采用RT-touchdown PCR方法,从人正常大肠黏膜组织中提取总RNA,扩增MALAT1功能性序列,将扩增产物克隆至pTA2载体,测序证实后,克隆至pEGFP-C1质粒中,构建重组真核荧光表达载体;阳离子脂质体介导下转染人大肠癌SW620细胞,荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达。通过Real-time PCR检测质粒转染前后MALAT1/fgf mRNA表达水平的变化。结果经pTA2载体和pEGFP-C1载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实人MALAT1功能性序列重组真核荧光表达载体构建成功。在荧光显微下观察到带绿色荧光的SW620细胞。pEGFP-C1-MALAT1/fgf转染前后SW620细胞MALAT1/fgf mRNA表达水平倍比关系为2.376±0.573,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了人MALAT1功能性序列真核荧光表达载体pEGFP-C1-MALAT1/fgf,转染SW620细胞后可引起MALAT1/fgf mRNA表达上调,为进一步研究MALAT1的结构、功能及其与人大肠癌的关联奠定了基础。 展开更多

关键词 非编码转录本 MALAT1 真核表达载体 人大肠癌SW620细胞 RT-touchdownPCR

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多重降落PCR检测血流感染产ESBLs肠杆菌科细菌与MRSA方法的建立和应用 被引量：4

13

作者 毕艳妮 隋振耿 +4 位作者 宋宇 曲业敏 马淑青 孙梅 刘海珠 《中国感染控制杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期663-667,共5页

目的探索一种可同时检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的肠杆菌科细菌与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重降落PCR方法。方法收集某院20l3年3月—2014年9月102份住院患者血培养阳性标本,针对产ESBLs肠杆菌科细菌的SHV、TEM、OXA基因和... 目的探索一种可同时检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的肠杆菌科细菌与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重降落PCR方法。方法收集某院20l3年3月—2014年9月102份住院患者血培养阳性标本,针对产ESBLs肠杆菌科细菌的SHV、TEM、OXA基因和MRSA的MecA基因设计4对特异性引物,分别采用单一降落PCR和多重降落PCR对各耐药基因进行扩增,并将结果与药敏纸片法进行比较。结果各单一PCR均可扩增出特异性条带,并用多重降落PCR同时检测了4种耐药基因;建立的多重降落PCR对4种耐药基因(MecA、SHV、TEM、OXA)DNA的检测下限分别为4.37、2.19、4.53和3.59 ng。与药敏纸片法相比,多重降落PCR总灵敏度与特异性分别为100.00%、88.24%,检测ESBLs的灵敏度达100.00%,特异性为87.23%,检测MRSA的灵敏度和特异度均为100.00%。结论该实验建立的多重降落PCR具有高灵敏度与特异性,可用于产ESBLs肠杆菌科细菌和MRSA所致血流感染的快速诊断与流行病学调查,有利于指导临床使用抗菌药物。 展开更多

关键词 超广谱β-内酰胺酶 ESBLS 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MRSA SHV TEM OXA MECA 多重降落PCR

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一种高特异性的改良降落PCR(英文) 被引量：4

14

作者 张贵星 袁保梅 +2 位作者 许培荣 王建民 薛乐勋 《生命科学研究》 CAS CSCD 2002年第4期314-317,共4页

为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性,设计了一种改良的降落PCR程序,并分别用TaqDNA聚合酶及高保真PfuDNA聚合酶进行实验.自盐藻Dunaliellabardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用TaqDNA聚合酶及PfuDNA聚合酶,运用普通PCR和降落PC... 为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性,设计了一种改良的降落PCR程序,并分别用TaqDNA聚合酶及高保真PfuDNA聚合酶进行实验.自盐藻Dunaliellabardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用TaqDNA聚合酶及PfuDNA聚合酶,运用普通PCR和降落PCR程序,扩增胡萝卜素生物合成相关基因(cbr)上游启动子序列,并电泳比较PCR扩增产物的特异性.结果显示,使用普通Taq酶PCR,普通PCR程序产生200bp,500bp和1272bp长的三条带,而TD PCR程序仅克隆出1272bp的特异带;利用高保真的PfuDNA聚合酶作PCR,在TD PCR泳道中仅有1272bp一条带,而普通PCR除了1272bp的特异带外,还出现一条500bp的非特异带.无论使用普通Taq酶或高保真酶Pfu,改良的降落PCR程序均明显提高PCR的特异性,类似的降落PCR程序可望用于克隆用普通PCR难以克隆的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性. 展开更多

关键词 高特异性 改良降落PCR PfuDNA聚合酶

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Diego血型基因分型方法的建立及西安地区多态性分布研究 被引量：10

15

作者 左琴琴 王红 +2 位作者 吴大洲 毛娟 徐华 《中国输血杂志》 北大核心 2017年第9期1010-1012,共3页

目的建立降落PCR技术检测Diego血型基因的方法,并对西安地区献血者Diego血型基因多态性分布进行分析研究,同时建立Diego稀有血型库。方法建立了降落PCR检测Diego血型基因的方法,并采用抗-Dia和商品化基因分型试剂盒进行验证,以及基因测... 目的建立降落PCR技术检测Diego血型基因的方法,并对西安地区献血者Diego血型基因多态性分布进行分析研究,同时建立Diego稀有血型库。方法建立了降落PCR检测Diego血型基因的方法,并采用抗-Dia和商品化基因分型试剂盒进行验证,以及基因测序做进一步确认。对西安地区1068名献血者提取基因组DNA,进行Diego血型基因分型。结果建立了检测Diego血型基因的降落PCR方法,用此方法共检测到Di(a+b-)1例,Di(a+b+)52例,Di(a-b+)1 015例,未检测到Di(a-b-)样本。献血者中Dia抗原的表达频率为0.049 63,Dib抗原的表达频率为0.999 06。结论本研究成功建立了降落PCR技术检测Diego血型基因的方法,并对西安地区献血者的Diego血型进行筛查和分析,获得其多态性分布数据。 展开更多

关键词 Diego血型 降落PCR 基因多态性 基因频率

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尖吻蝮蛇未知C类凝集素蛋白cDNA扩增、克隆与表达 被引量：4

16

作者 查向东 张华远 +2 位作者 肖亚中 刘兢 徐康森 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期752-755,共4页

蛇毒中C类凝集素 (C TLs)超家族蛋白 ,是具有抗凝血等功能的一族蛋白质 .根据测得的蛇毒蛋白的N端氨基酸序列 ,设计PCR引物 ;从湖南尖吻蝮蛇毒腺中提取总RNA ,经反转录 ,再通过温度降落锚式PCR ,在只使用一个特异性引物和一个通用引物... 蛇毒中C类凝集素 (C TLs)超家族蛋白 ,是具有抗凝血等功能的一族蛋白质 .根据测得的蛇毒蛋白的N端氨基酸序列 ,设计PCR引物 ;从湖南尖吻蝮蛇毒腺中提取总RNA ,经反转录 ,再通过温度降落锚式PCR ,在只使用一个特异性引物和一个通用引物、进行一次循环数不超过 30的非巢式反应的条件下 ,即获得两个较为清晰的扩增条带 ;其中之一带经克隆、测序、比较 ,证明其与已知的蛇毒中C类凝集素超家族蛋白质有较高的同源性 .在大肠杆菌中获得高效融合表达 ,融合蛋白占细胞总蛋白的 2 6 %～ 30 % 展开更多

关键词 尖吻腹蛇 C类凝集素超家族 温度降落锚式PCR 融合表达 agkisasin 蛇毒蛋白 扩增 克隆

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重庆地区汉族CD14启动子区多态性分析 被引量：5

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作者 冯凯 刘兴 蒋建新 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第18期1667-1669,共3页

目的　调查CD14 ( 2 60 )多态性在重庆地区汉族中的分布特征 ,及检验该随机样本遗传学研究的可靠性。方法　对 110名重庆汉族个体 ,采用降落式PCR和限制性片段长度多态性法 (RFLP)进行基因型分析。结果　重庆地区汉族CD14 ( 2 60 )多... 目的　调查CD14 ( 2 60 )多态性在重庆地区汉族中的分布特征 ,及检验该随机样本遗传学研究的可靠性。方法　对 110名重庆汉族个体 ,采用降落式PCR和限制性片段长度多态性法 (RFLP)进行基因型分析。结果　重庆地区汉族CD14 ( 2 60 )多态性TT、TC、CC 3种基因型频率分别为 43 6%、3 9 1%和 17 3 %;样本分布符合Hardy Weinberg平衡。结论　重庆汉族CD14 ( 2 60 )多态性基因型分布特征与白种人存在明显差异。样本为H W平衡群体 。 展开更多

关键词 降落式PCR(TD—PCR) 限制性片段长度多态性(RFLP) CD14

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基于兼并引物的PCR扩增特定基因的效果比较 被引量：6

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作者 李志强 何德 李翠新 《湖北民族学院学报（自然科学版）》 CAS 2015年第2期170-173,共4页

根据NCBI上的DNA拓扑异构酶Ⅱ基因序列设计兼并引物,采用常规PCR、降落PCR、巢式PCR三种方法扩增糙皮侧耳和阿魏侧耳的拓扑异构酶Ⅱ部分基因序列,比较三种方法扩增效果的特异性、灵敏度.结果表明,巢式PCR的灵敏度和特异性都优于常规PCR... 根据NCBI上的DNA拓扑异构酶Ⅱ基因序列设计兼并引物,采用常规PCR、降落PCR、巢式PCR三种方法扩增糙皮侧耳和阿魏侧耳的拓扑异构酶Ⅱ部分基因序列,比较三种方法扩增效果的特异性、灵敏度.结果表明,巢式PCR的灵敏度和特异性都优于常规PCR和降落PCR,并且巢式PCR的灵敏度是常规PCR灵敏度的100倍以上,更加适合兼并引物扩增.这对利用兼并引物获取特异基因具有指导意义. 展开更多

关键词 兼并引物 常规PCR 降落PCR 巢式PCR

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运用降落PCR同时快速检测NV、EV71和CoxA16病毒 被引量：2

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作者 罗灿 冀新凤 +8 位作者 李建栋 刘犇 朱红英 潘秋妹 陈伟岚 廖如燕 陈胤瑜 陈清 俞守义 《热带医学杂志》 CAS 2011年第2期126-130,共5页

目的运用降落聚合酶链反应(touchdown PCR,TD-PCR)技术快速从腹泻、手足口病人粪便标本中同时检测诺如病毒(Norovius,NV)、肠道病毒71型(Enterovirus 71 EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsachie virus,CoxA16),并评价该技术用于检测这3种... 目的运用降落聚合酶链反应(touchdown PCR,TD-PCR)技术快速从腹泻、手足口病人粪便标本中同时检测诺如病毒(Norovius,NV)、肠道病毒71型(Enterovirus 71 EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsachie virus,CoxA16),并评价该技术用于检测这3种病毒的效能和敏感性。结论根据touchdown PCR原理设计TD-PCR程序,试验选择最佳反应条件,与普通PCR扩增效果进行评价。用10倍稀释检验TD-PCR方法的灵敏度,并用轮状病毒、札幌病毒、星状病毒、伤寒杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、香港海鸥形菌检测该方法的特异性。结果 TD-PCR能在一个反应条件下同时检测NV、EV71和CoxA16,扩增片段条带清晰,检测效果明显优于普通PCR,测序证实了3组片段的特异性,3种病毒cDNA的最低检测浓度分别为4.775μg/ml、2.360μg/ml、43.273μg/ml。检测该方法特异性时,其他病原体未见特异性条带扩增。结论成功建立的TD-PCR方法可同时检测腹泻和手足口病人粪便中NV、EV71和CoxA163种病毒,为快速检测相关病原体、科学防治腹泻和手足口病疫情暴发提供了可靠手段。 展开更多

关键词 降落聚合酶链反应 诺如病毒 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A组16型 快速检测

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长片段基因FMNL2 PCR实验的体会 被引量：3

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作者 曾元凤 肖移生 +1 位作者 梁莉 丁彦青 《南昌大学学报（医学版）》 CAS 2013年第4期19-21,共3页

目的尝试扩增长片段FMNL2基因。方法采用巢式PCR或和降落PCR相结合的方法进行了FMNL2基因编码区全长及FMNL2-NT、-CT的扩增。结果高效、特异地扩增出FMNL2基因编码区全长及FMNL2-NT、-CT片段。结论巢式PCR或和降落PCR相结合,提高了目的... 目的尝试扩增长片段FMNL2基因。方法采用巢式PCR或和降落PCR相结合的方法进行了FMNL2基因编码区全长及FMNL2-NT、-CT的扩增。结果高效、特异地扩增出FMNL2基因编码区全长及FMNL2-NT、-CT片段。结论巢式PCR或和降落PCR相结合,提高了目的基因的扩增效率和扩增产物的特异性。 展开更多

关键词 巢式PCR 降落PCR 长片段基因 FMNL2

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