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线粒体外膜转位因子Tom40在大肠杆菌中的表达和重新折叠的研究
1
作者 纪志娜 梁艳俊 +2 位作者 李唐宁 徐筠 李树杰 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期98-103,共6页
位于线粒体外膜上的TOM转运复合体负责转运在胞质中合成的蛋白进入线粒体,而Tom40蛋白是TOM转运复合体的核心组分,它构成该复合体的蛋白质转运孔道.尽管多年来对TOM复合体及其亚基转运蛋白的功能进行了大量的研究,然而由于核心亚基Tom4... 位于线粒体外膜上的TOM转运复合体负责转运在胞质中合成的蛋白进入线粒体,而Tom40蛋白是TOM转运复合体的核心组分,它构成该复合体的蛋白质转运孔道.尽管多年来对TOM复合体及其亚基转运蛋白的功能进行了大量的研究,然而由于核心亚基Tom40的三维空间结构尚未解析出来,其转运蛋白的机理还不清楚.尝试用大肠杆菌大量表达大鼠Tom40蛋白,并对其包涵体进行了纯化和重新折叠的研究.圆二色谱(CD)和高灵敏度微热量分析(VP-DSC)结果表明重新折叠的蛋白具有紧凑的二级和三级结构.该实验结果为Tom40的结晶化和三维空间结构解析奠定了重要的物质基础. 展开更多
关键词 线粒体 TOM复合体 tom40 重新折叠
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炎症微环境中TOM40对牙髓成纤维细胞线粒体呼吸功能的影响
2
作者 李兆扬 刘肖晨 张旗 《口腔生物医学》 2024年第3期123-130,共8页
目的:探究炎症微环境中线粒体外膜转位酶(TOM)复合体亚基TOM40对牙髓成纤维细胞线粒体呼吸功能的影响。方法:开髓暴露法构建大鼠磨牙牙髓炎模型,苏木精-伊红染色观察牙髓坏死面积;免疫组化染色观察牙髓组织促炎因子白介素(IL)-1β、抗... 目的:探究炎症微环境中线粒体外膜转位酶(TOM)复合体亚基TOM40对牙髓成纤维细胞线粒体呼吸功能的影响。方法:开髓暴露法构建大鼠磨牙牙髓炎模型,苏木精-伊红染色观察牙髓坏死面积;免疫组化染色观察牙髓组织促炎因子白介素(IL)-1β、抗肿瘤坏死因子(TNF)-α及DNA氧化损伤标志物8-OHDG的表达情况;TUNEL法检测牙髓组织细胞凋亡情况。体外培养人牙髓成纤维细胞(hDPFs),分别以1、5、10μg/mL脂多糖(LPS)炎性刺激,实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞促炎因子IL-1β、TNF-α及促凋亡因子Bax、Bak的表达情况;通过TMRE、DCFH-DA探针及腺苷三磷酸(ATP)含量检测试剂盒检测hDPFs线粒体呼吸功能变化;实时荧光定量PCR筛选TOM复合体中表达下调亚基,并通过免疫荧光染色加以验证;基于筛选结果构建TOM40过表达hDPFs细胞株,并加入LPS刺激,检测线粒体呼吸功能变化。结果:大鼠磨牙牙髓炎模型中,随着暴露时间延长,牙髓坏死面积增大,IL-1β、TNF-α及8-OHDG表达升高,细胞凋亡增多(P<0.05)。炎症hDPFs模型中,LPS浓度增加,IL-1β、TNF-α、Bax及Bak蛋白和基因表达升高,线粒体呼吸功能受损,TOM40表达特异性下调(P<0.05);而过表达TOM40可有效改善LPS刺激导致的hDPFs线粒体膜电位下降、活性氧积累与ATP含量下降(P<0.05)。结论:牙髓炎的发展过程伴随牙髓组织氧化应激与hDPFs线粒体呼吸功能障碍,过表达TOM40可挽救hDPFs受损的线粒体呼吸功能。 展开更多
关键词 tom40 牙髓炎 牙髓成纤维细胞 线粒体 细胞呼吸
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家蚕微孢子虫NbTom40的原核表达及定位 被引量：1
3
作者 罗洁 林立鹏 +3 位作者 潘国庆 刘婷 刘显林 周泽扬 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期30-36,共7页
线粒体外膜易位酶是由Tom40基因编码的位于线粒体外膜上的转位酶复合体,能够将外界蛋白质转位运输到线粒体基质中.最近有研究称在一类仅具有简缩进化的线粒体——纺锤剩体的感染家蚕微孢子虫的基因组鉴定到一个NbTom40基因.本文首先通... 线粒体外膜易位酶是由Tom40基因编码的位于线粒体外膜上的转位酶复合体,能够将外界蛋白质转位运输到线粒体基质中.最近有研究称在一类仅具有简缩进化的线粒体——纺锤剩体的感染家蚕微孢子虫的基因组鉴定到一个NbTom40基因.本文首先通过克隆了长度为839bp的NbTom40基因,通过构建重组载体pET30a(+)-NbTom40,转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,经过HIS抗体的免疫印迹对表达的目的蛋白——31～43kDa间存在一条单一条带进行验证,结果显示该条带即为分子量大小正确的带有HIS标签的目的蛋白,然后将其进行Ni-NTA亲和层析以及聚丙烯酰胺凝胶纯化并制备多克隆抗体.NbTom40抗体与家蚕微孢子虫总蛋白的Western Blotting结果显示,在32kD处有明显杂交信号,与理论分子大小一致.最后,通过间接免疫荧光(IFA)对该基因编码的蛋白进行细胞定位,观察到NbTom40以散点状荧光信号分布在孢子内部.本研究为深入了解纺锤剩体的蛋白组成及其膜转运的分子机制奠定了分子生物学基础. 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 线粒体外膜易位酶 原核表达 间接免疫荧光
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