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葡萄的两种检疫性病毒的多重RT-PCR检测 被引量：7
1
作者 薛杨 安德荣 李明福 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S1期14-17,共4页
本研究利用多重RT-PCR技术,对葡萄的检疫性病毒中番茄环斑病毒(ToRSV)和烟草环斑病毒(TRSV)进行检测, 并研究了反应体系中各个参数对多重RT-PCR的影响。结果表明:可以在同一反应体系中实现对ToRSV和TRSV的RT- PCR检测,但模板浓度、引物... 本研究利用多重RT-PCR技术,对葡萄的检疫性病毒中番茄环斑病毒(ToRSV)和烟草环斑病毒(TRSV)进行检测, 并研究了反应体系中各个参数对多重RT-PCR的影响。结果表明:可以在同一反应体系中实现对ToRSV和TRSV的RT- PCR检测,但模板浓度、引物浓度、循环数等3个因素对检测结果的准确性有较大的影响,3个参数的增加都会导致非特异性扩增的增多,而dNTP以及Taq酶的浓度对实验结果并无较大影响。 展开更多
关键词 多重RT-PCR 番茄环斑病毒(torsv) 烟草环斑病毒(TRSV)
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从德国鼠尾草中检测出3种危险性病毒 被引量：1
2
作者 孔宝华 陈海如 +7 位作者 蔡红 蒋小龙 沐咏民 魏正 唐惠 曹云华 李凡 刘进元 《植物检疫》 北大核心 2000年第2期76-77,共2页
对世博会来自德国的鼠尾草进行了目检、酶联实验、电镜观察及生物接种实验。初步确证鼠尾草携带番茄环斑病毒 (ToRSV) ,南芥菜花叶病毒 (ArMV)和烟草环斑病毒(TRSV)。
关键词 鼠尾草 torsv ArMV TRSV 诊断 鉴定
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几种危险性病毒抗血清的制备及检测方法的建立 被引量：5
3
作者 陈京 陈燕芳 +2 位作者 宋淑敏 胡伟贞 王树琴 《植物检疫》 北大核心 1997年第4期202-204,共3页
番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和南芥菜花叶病毒用改进的方法提纯后免疫兔子，制备出高质量的抗血清。琼脂扩散效价为１／３２０，用ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ方法检测病汁液可达１０－３～１０－４。３种血清之间无交叉反应，与健康寄主和常见... 番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和南芥菜花叶病毒用改进的方法提纯后免疫兔子，制备出高质量的抗血清。琼脂扩散效价为１／３２０，用ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ方法检测病汁液可达１０－３～１０－４。３种血清之间无交叉反应，与健康寄主和常见的自然寄主蛋白也无反应。应用３种血清分别对２３种植物１００多个采集的样品和进口种子进行了ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测。 展开更多
关键词 抗血清 A蛋白 酶联免疫吸附 番茄 环斑病毒 烟草
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番茄环斑病毒悬钩子分离物复制酶基因的克隆及序列分析
4
作者 白静 陈红运 +1 位作者 傅俊范 朱水芳 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期76-79,共4页
番茄环斑病毒(ToRSV)是一种高风险的检疫性有害生物,可侵染桃、李、葡萄、苹果、樱桃等多种植物。2000—2001年,我国从法国进口的葡萄插条上检出过此病毒。以ToRSV悬钩子分离物(Rasp-2)总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增病毒复制酶基因(Rd... 番茄环斑病毒(ToRSV)是一种高风险的检疫性有害生物,可侵染桃、李、葡萄、苹果、樱桃等多种植物。2000—2001年,我国从法国进口的葡萄插条上检出过此病毒。以ToRSV悬钩子分离物(Rasp-2)总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增病毒复制酶基因(RdRp)的cDNA片断并将其克隆到pMD18-T载体上。序列测定结果表明,Rasp-2RdRp基因由2133个核苷酸组成,编码711个氨基酸;Rasp-2半胱氨酸蛋白酶和RdRp之间的蛋白酶切割位点为Q/V。Rasp-2与其他分离物及株系RdRp基因的核苷酸序列同源性为79%～84%,氨基酸序列同源性为89%～94%。聚类分析结果显示,葡萄黄脉株系(GYV)与其他分离物及株系关系最远,Rasp-2与其他分离物及株系亲缘关系较近。证实Rasp-2与另外2个悬钩子分离物Rasp和Rasp-1的核苷酸序列存在明显变异。 展开更多
关键词 番茄环斑病毒 复制酶基因 克隆 序列分析
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双重胶体金层析法快速检测番茄环斑病毒和烟草环斑病毒RT-PCR扩增子 被引量：3
5
作者 曹成 魏梅生 +2 位作者 张永江 李桂芬 吴兴泉 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第22期197-201,共5页
番茄环斑病毒和烟草环斑病毒是中国进境检疫性有害生物,此研究建立了单个和双重胶体金层析快速检测方法,在15min即可获得对双标记PCR产物的检测结果。单个胶体金层析是在一张层析膜上点上荧光素(或地高辛)的单克隆抗体作为T检测点,经生... 番茄环斑病毒和烟草环斑病毒是中国进境检疫性有害生物,此研究建立了单个和双重胶体金层析快速检测方法,在15min即可获得对双标记PCR产物的检测结果。单个胶体金层析是在一张层析膜上点上荧光素(或地高辛)的单克隆抗体作为T检测点,经生物素-荧光素(或生物素-地高辛)双标记的RT-PCR扩增产物可在T点上被检测到。双重胶体金层析是在一张层析膜上分别点上荧光素和地高辛的单克隆抗体作为T1和T2检测点,经生物素-荧光素和生物素-地高辛双标记的两种病毒的RT-PCR扩增产物可分别在T1和T2点上被检测到。 展开更多
关键词 番茄环斑病毒 烟草环斑病毒 RT-PCR 胶体金 双重检测
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从国外引进的黑奥林葡萄品种上分离出番茄环斑病毒
6
作者 曹为玉 郑燕棠 《天津农林科技》 1998年第2期7-10,共4页
1989年天津某单位从国外引进了黑奥林葡萄品种。从该品种的扦插幼苗上采集标样，用摩擦接种方法接种在容易产生枯斑症状的草本指示植物上，经多次单斑分离，纯化后出现两个分离物，代号分别为89-2和89-3，它们在鉴别寄主上发病快，接种... 1989年天津某单位从国外引进了黑奥林葡萄品种。从该品种的扦插幼苗上采集标样，用摩擦接种方法接种在容易产生枯斑症状的草本指示植物上，经多次单斑分离，纯化后出现两个分离物，代号分别为89-2和89-3，它们在鉴别寄主上发病快，接种第二天病斑可达乒乓球大小。用葡萄卷叶病毒和扇叶病毒等11个抗血清给ELISA和琼脂双扩散的方法检测结果均呈阴性反应。后经美国康奈尔大学Gonsalves教授通过寄主范围和免疫电镜试验确定为番茄环斑病毒（ToRSV）葡萄黄脉株系。 展开更多
关键词 引进 葡萄 分离物 torsv
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