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转座酶TN3体外定向进化研究概况 被引量:1
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作者 马围围 曾素先 +5 位作者 宋尚桥 王睿敏 严瑾 孙翠翠 李鑫 黎宗强 《动物医学进展》 北大核心 2020年第2期109-113,共5页
Tn3是存在于生物体内的一种非常重要的转座酶,其是基因组中具有一段特异的转位特性的独立的DNA序列,从而对目的基因起调控作用。转座酶Tn3具有基因敲除的功能,Gal4能识别DNA启动子上游两端保守的17bp长的一段序列,因此将Tn3与Gal4相组合... Tn3是存在于生物体内的一种非常重要的转座酶,其是基因组中具有一段特异的转位特性的独立的DNA序列,从而对目的基因起调控作用。转座酶Tn3具有基因敲除的功能,Gal4能识别DNA启动子上游两端保守的17bp长的一段序列,因此将Tn3与Gal4相组合,实现靶向敲除目的基因的目的。论文综述了转座酶Tn3的结构及其转座机制、Gal4的结构及其机制、Tn3-Gal4系统的简介和酶分子的定向进化,旨在为今后靶向基因的敲除以及靶向基因的修复提供研究思路。 展开更多
关键词 tn3 转座酶 Gal4 基因敲除 定向进化
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转座酶Tn3体外定向进化和酶活力提高方法的建立
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作者 宋尚桥 马围围 +5 位作者 李晓剑 曾素先 李鑫 严瑾 孙翠翠 黎宗强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第4期984-991,共8页
试验旨在对转座酶Tn3的酶活力提高和进化进行初步探索。采用PCR扩增、限制性酶切、DNA连接、重组质粒的转化、易错PCR的优化及构建、D值的测定、酶切鉴定方法对转座酶Tn3进行体外定向进化研究。结果表明,用SacⅠ和XbaⅠ对重组质粒进行酶... 试验旨在对转座酶Tn3的酶活力提高和进化进行初步探索。采用PCR扩增、限制性酶切、DNA连接、重组质粒的转化、易错PCR的优化及构建、D值的测定、酶切鉴定方法对转座酶Tn3进行体外定向进化研究。结果表明,用SacⅠ和XbaⅠ对重组质粒进行酶切,得到了450 bp的酶切产物;在含有卡那霉素的LB培养基培养菌体24 h,测量其D值,经过3轮重复性的研究,其D值和增殖能力从开始的0上升至0.18、0.42、0.60,说明Tn3活性有了明显的提高;将筛选得到的进化型重组质粒进行质粒抽提,用内切酶XhoⅠ和XbaⅠ进行双酶切鉴定,发现进化型重组质粒酶切产物条带相对较小;之后对进化型重组质粒进行基因测序分析,发现Tn 3基因序列的多个位点发生了突变以及Tn3-Gal4靶向序列中间的CCR5-delta32基因被切除。说明成功完成了转座酶Tn 3基因的克隆;确立了易错PCR的最优反应体系;选择卡那霉素作为筛选标记对进化型Tn3进行筛选,初步验证利用含有卡那霉素的LB培养基和对菌液D值的测定来进行筛选是可行的;Tn 3基因序列突变和基因敲除,说明不论是在功能上还是在基因序列上Tn3都发生了改变,这种变化正是向着需要的方向进行的。 展开更多
关键词 tn3 易错PCR DNA重排 定向进化 酶切产物 基因序列
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五倍子分离组分抑制无乳链球菌的热动力学研究 被引量:3
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作者 郑梦珍 佟延南 +4 位作者 翟少伟 林茂 江兴龙 赖晓健 李忠琴 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期947-952,共6页
为评价五倍子各分离组分对无乳链球菌的抑制作用,以期在实践中更高效地利用五倍子,利用已优化过的乙酸乙酯—乙醇—水(5∶1∶5,体积比)分离溶剂体系,应用高速逆流色谱法分离五倍子各组分。通过微量量热法检测五倍子粗提物和各分离组分... 为评价五倍子各分离组分对无乳链球菌的抑制作用,以期在实践中更高效地利用五倍子,利用已优化过的乙酸乙酯—乙醇—水(5∶1∶5,体积比)分离溶剂体系,应用高速逆流色谱法分离五倍子各组分。通过微量量热法检测五倍子粗提物和各分离组分对无乳链球菌TN3L的热动力学作用,计算得出五倍子各分离组分对无乳链球菌的半数抑制质量浓度。试验结果表明,五倍子可分离出5个组分(W1、W2、W3、W4、W5);组分W1对无乳链球菌无抑制作用,五倍子粗提物及其他分离组分的半数抑制质量浓度分别为0.1234、2.2294、0.2570、0.6687、0.1750 mg/mL,抑菌强度依次为W2<W4<W3<W5<粗提物,其中组分W5和W3抑菌效果明显,推测W5和W3为五倍子对无乳链球菌的主要抑制成分。 展开更多
关键词 五倍子 高速逆流色谱法 无乳链球菌tn3L 微量量热法 半数抑制质量浓度
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黄贮玉米秸秆中玉米浆添加水平对其发酵品质主要指标的影响 被引量:18
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作者 李红宇 许丽 +2 位作者 方美琪 刘文娟 王楠 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期137-143,共7页
采用单因子试验设计,旨在研究添加不同比例玉米浆对玉米秸秆黄贮发酵过程中pH、乳酸菌数量、粗蛋白(CP)、氨态氮(NH3-N)和氨态氮比总氮(NH3-N/TN)动态变化的影响。结果表明,随着玉米浆添加比例的升高,pH降低幅度缓慢(P<0.05),CP含量... 采用单因子试验设计,旨在研究添加不同比例玉米浆对玉米秸秆黄贮发酵过程中pH、乳酸菌数量、粗蛋白(CP)、氨态氮(NH3-N)和氨态氮比总氮(NH3-N/TN)动态变化的影响。结果表明,随着玉米浆添加比例的升高,pH降低幅度缓慢(P<0.05),CP含量依次升高(P<0.01),LAB的数量依次降低(P<0.05),NH3-N和NH3-N/TN有明显降低趋势。结果显示,综合分析各项指标,黄贮玉米秸秆中,玉米浆适宜添加比例为25%~30%。 展开更多
关键词 玉米秸秆黄贮 PH LAB NH3-N NH3-N/TN
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添加干饲草对湿玉米纤维饲料发酵品质的影响 被引量:2
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作者 潘春方 李洋 +1 位作者 张立阳 张永根 《饲料工业》 北大核心 2017年第1期51-57,共7页
由于湿玉米纤维饲料(WCGF)含水量高存贮难,试验研究分别将WCGF与苜蓿干草和羊草进行混合贮存发酵试验,以期延长WCGF的贮存时间,为科学利用WCGF提供理论依据,同时避免因烘干使用而造成的营养物质损失和对空气污染。试验在一个塑料模型筒... 由于湿玉米纤维饲料(WCGF)含水量高存贮难,试验研究分别将WCGF与苜蓿干草和羊草进行混合贮存发酵试验,以期延长WCGF的贮存时间,为科学利用WCGF提供理论依据,同时避免因烘干使用而造成的营养物质损失和对空气污染。试验在一个塑料模型筒仓系统中进行(密封,体积:2 754 cm^3),共分为2部分,第一部分:WCGF单独贮存以及与羊草混合贮存,WCGF与羊草的混合比例设定为70:30,80:20和90:10,塑料模型筒仓存放密度为1 000 kg/m^3;第二部分:WCGF单独贮存以及与苜蓿混合贮存,WCGF与苜蓿干草的混合比例设定为70:30,80:20和90:10,塑料模型筒仓存放密度为1 100 kg/m^3。试验结果表明:WCGF单独贮存时发酵强度较低,不同比例混合苜蓿干草或羊草后pH值和氨态氮浓度升高(P<0.05)。WCGF与苜蓿干草混合比例为90:10以及与WCGF与羊草混合比例为70:30时均增加乙酸的含量,提高有氧稳定性(P<0.05)。因此,选用WCGF与苜蓿干草混合贮存适宜比例90:10,WCGF与羊草的适合混合比例为70:30。 展开更多
关键词 湿玉米纤维饲料 pH值 NH3-N/TN 有氧稳定性
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撒坝猪TNS3基因CDS序列生物信息分析及组织表达检测 被引量:1
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作者 肖莹 李明丽 +5 位作者 马黎 兰国湘 严达伟 王孝义 鲁绍雄 董新星 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第23期5-10,167,共7页
为了研究撒坝猪张力蛋白3(tensin3,TNS3)基因的结构和功能,以及在不同组织中的表达情况,试验对撒坝猪TNS3基因外显子区域进行了PCR扩增,所得序列与NCBI中序列进行比较分析,利用生物信息学软件对撒坝猪TNS3基因的结构、理化性质及其编码... 为了研究撒坝猪张力蛋白3(tensin3,TNS3)基因的结构和功能,以及在不同组织中的表达情况,试验对撒坝猪TNS3基因外显子区域进行了PCR扩增,所得序列与NCBI中序列进行比较分析,利用生物信息学软件对撒坝猪TNS3基因的结构、理化性质及其编码蛋白信号肽、跨膜结构、亚细胞定位、磷酸化位点、糖基化位点、二级结构、三级结构和CpG岛等进行了分析,并讨论撒坝猪TNS3基因与其他物种氨基酸序列的进化关系;采用实时荧光定量PCR法检测TNS3基因在不同组织中的表达情况。结果表明:撒坝猪TNS3基因序列与NCBI上公布的野猪TNS3基因序列中的CDS区相比存在4个碱基突变;撒坝猪TNS3蛋白是疏水蛋白,也是不稳定蛋白;该蛋白不存在信号肽,无跨膜结构,主要在细胞外膜上发挥生物学作用,存在磷酸化位点和糖基化位点;该蛋白的三级结构由α-螺旋(17.87%)、β-转角(4.62%)、延伸链(14.22%)和无规则卷曲(63.29%)构成;TNS3基因在不同物种进化过程中分化明显;撒坝猪TNS3基因有6个CpG岛和3种高度保守的结构功能域;撒坝猪TNS3基因在肝脏中的表达量最高,其次为大脑、背脂、肾脏脏、脾脏、肺脏,而在大白猪背最长肌中的表达量比撒坝猪高(P<0.05)。说明TNS3基因与猪生长性状相关. 展开更多
关键词 撒坝猪 TNS3基因 生物信息 预测 组织表达 生长发育
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炉渣在农村生活污水净化中的应用试验 被引量:1
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作者 张文丽 马鹏真 张雨辰 《环境科学导刊》 2021年第4期62-65,共4页
人工模拟农村生活污水,通过添加炉渣和不添加炉渣,并设置不同温度(15℃、25℃和35℃)下静滞和摇动处理,探讨炉渣净化农村生活污水的条件和效果。结果表明,污水经过炉渣静滞净化吸附后,污水中的TN、NH_(3)-N、TP以及COD都有一定的降低,... 人工模拟农村生活污水,通过添加炉渣和不添加炉渣,并设置不同温度(15℃、25℃和35℃)下静滞和摇动处理,探讨炉渣净化农村生活污水的条件和效果。结果表明,污水经过炉渣静滞净化吸附后,污水中的TN、NH_(3)-N、TP以及COD都有一定的降低,且随温度的升高,炉渣去除污水中TN、NH_(3)-N、TP以及COD的作用越大,在35℃下去除率分别达到了4.9%、63.2%、94.5%和64.7%。如果加炉渣的生活污水再以一定的频率摇动,能有效地提高炉渣对污水中NH_(3)-N的去除,去除率达到了90.0%,但对TN、TP以及COD的去除率有所下降。 展开更多
关键词 炉渣 农村生活污水 吸附 净化 TN、NH_(3)-N、TP、COD去除率
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