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沉默生物节律基因TIMELESS对卵巢癌SK-OV-3细胞免疫逃逸的抑制作用及其机制
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作者 顾雨玲 郑翠 汤云仙 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期653-662,共10页
目的:探讨沉默生物节律基因TIMELESS (TIM)对卵巢癌细胞免疫逃逸的影响,并阐明其相关作用机制。方法:分离CD8+T淋巴细胞,并采用流式细胞术进行鉴定,检测细胞中CD3+/CD8+细胞亚群比例。体外培养人卵巢癌SK-OV-3细胞,分别转染TIM小干扰RNA... 目的:探讨沉默生物节律基因TIMELESS (TIM)对卵巢癌细胞免疫逃逸的影响,并阐明其相关作用机制。方法:分离CD8+T淋巴细胞,并采用流式细胞术进行鉴定,检测细胞中CD3+/CD8+细胞亚群比例。体外培养人卵巢癌SK-OV-3细胞,分别转染TIM小干扰RNA(siRNA)干扰质粒(si-TIM)、阴性对照质粒(si-NC)、程序性死亡配体1 (PD-L1)过表达质粒(oe-PD-L1)及其阴性对照质粒(oe-NC),分为空白对照组(BC组,不进行转染)、si-NC组(转染si-NC)、 si-TIM组(转染si-TIM)、 si-NC+oe-NC组(转染si-NC和oe-NC)和si-TIM+oe-PD-L1(转染si-TIM和oe-PD-L1)组。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测SK-OV-3细胞中TIM mRNA及蛋白表达水平,验证TIM基因沉默情况。将转染后的SK-OV-3细胞与激活的CD8+T淋巴细胞共培养,分为BC组(单独培养SK-OV-3细胞)、BC/T组、si-NC/T组、si-TIM/T组、si-NC+oe-NC/T组和si-TIM+oe-PD-L1/T组,采用CCK-8法检测各组SK-OV-3细胞存活率,流式细胞术检测各组SK-OV-3细胞凋亡率和细胞表面PD-L1阳性表达率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测共培养上清液中干扰素γ (IFN-γ)和肿瘤坏死因子α (TNF-α)水平,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测各组CD8+T淋巴细胞杀伤力,RT-qPCR法检测各组SK-OV-3细胞中TIM和PD-L1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组SK-OV-3细胞中TIM和PD-L1蛋白表达水平。结果:免疫磁珠法分离后,CD8+T淋巴细胞(CD3+/CD8+)亚群比例为96.56%±0.59%,提示所提取CD8+T淋巴细胞纯度较高。与BC组比较,si-TIM组细胞中TIM mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),提示本研究成功获得TIM基因沉默的卵巢癌SK-OV-3细胞。CCK-8法,与BC组比较,BC/T组SK-OV-3细胞存活率明显降低(P<0.01);与BC/T组比较,si-TIM/T组SK-OV-3细胞存活率明显降低(P<0.01)。流式细胞术,与BC组比较,BC/T组SK-OV-3细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与BC/T组比较,si-TIM/T组SK-OV-3细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与si-TIM/T组比较,si-TIM+oe-PD-L1/T组SK-OV-3细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。与BC组比较,si-TIM组SK-OV-3细胞表面PD-L1阳性表达率明显降低(P<0.01)。ELISA法,与BC/T组比较,si-TIM/T组细胞培养上清液中IFN-γ和TNF-α水平均明显升高(P<0.01);与si-TIM/T组比较,si-TIM+oe-PD-L1/T组细胞培养上清液中IFN-γ和TNF-α水平均明显降低(P<0.01)。LDH释放法,与BC/T组比较,si-TIM/T组CD8+T淋巴细胞杀伤力明显增强(P<0.01);与si-TIM/T组比较,si-TIM+oe-PD-L1/T组CD8+T淋巴细胞杀伤力明显减弱(P<0.01)。RT-qPCR法和Western blotting法,与BC组比较,si-TIM组SK-OV-3细胞中PD-L1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与si-TIM组比较,si-TIM+oe-PD-L1组细胞中PD-L1蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:TIM基因沉默可增强CD8+T淋巴细胞对卵巢癌SK-OV-3细胞的杀伤作用,抑制其免疫逃逸,其作用机制可能与调控PD-L1蛋白表达有关。 展开更多
关键词 卵巢癌 免疫逃逸 timeless基因 CD8+T淋巴细胞 程序性死亡配体1
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TIMELESS、RAB2A、ASPM在乳腺癌组织中的表达及与临床特征相关性 被引量:1
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作者 刘起鹏 张婷 郭婉莹 《广州医药》 2023年第5期80-86,共7页
目的分析TIMELESS、鼠肉瘤病毒家族相关蛋白2A(RAB2A)、异常纺锤体样小头畸形相关基因(ASPM)在乳腺癌组织中的表达及与临床特征相关性。方法选取2019年2月—2021年2月我院乳腺癌组织标本84例作为研究组、正常乳腺组织标本53例作为对照组... 目的分析TIMELESS、鼠肉瘤病毒家族相关蛋白2A(RAB2A)、异常纺锤体样小头畸形相关基因(ASPM)在乳腺癌组织中的表达及与临床特征相关性。方法选取2019年2月—2021年2月我院乳腺癌组织标本84例作为研究组、正常乳腺组织标本53例作为对照组,采用荧光定量聚合酶测定TIMELESS、ASPM,采用Western blot检测RAB2A蛋白表达情况,分析上述三个指标在乳腺癌中表达及与临床特征相关性。结果对比对照组,研究组TIMELESS、ASPM表达较高,RAB2A较低(P<0.05)。TIMELESS、RAB2A、ASPM与乳腺癌淋巴结浸润、TNM分期、分化程度相关(P<0.05)。TIMELESS、RAB2A、ASPM为影响乳腺癌发生的危险因素(P<0.05)。TIMELESS、RAB2A负相关(r=-0.383、P=0.001);TIMELESS、ASPM正相关(r=0.397、P=0.001);RAB2A、ASPM负相关(r=-0.257、P=0.018)。对比TIMELESS、RAB2A、ASPM单一检测,三者联合检测对乳腺癌的诊断价值较高(P<0.05)。结论乳腺癌患者TIMELESS、ASPM呈高表达,RAB2A呈低表达,上述三个指标与乳腺癌高度相关,可作为乳腺癌发生的检测指标。 展开更多
关键词 timeless 异常纺锤体样小头畸形相关基因 乳腺癌 临床特征
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Timeless与生物钟基因 被引量:6
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作者 刘仲敏 张亚平 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期497-501,共5页
综述了timeless基因的发现、多态性和重要功能。timeless是最先被发现的两个生物钟基因之一。生物钟的昼夜节律由PER、TIM、CLOCK和CYCLE 4个生物钟齿轮组成的正负反馈回路进行调节。其中TIM可以受光因子调控 ,它还可以与PER形成异二聚... 综述了timeless基因的发现、多态性和重要功能。timeless是最先被发现的两个生物钟基因之一。生物钟的昼夜节律由PER、TIM、CLOCK和CYCLE 4个生物钟齿轮组成的正负反馈回路进行调节。其中TIM可以受光因子调控 ,它还可以与PER形成异二聚体 。 展开更多
关键词 timeless基因 生物钟基因 分子机制 昼夜节律
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生物钟基因Timeless及与肿瘤关系的研究进展 被引量:2
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作者 张金玲 吴超 杨盛力 《临床与病理杂志》 2017年第5期1062-1065,共4页
生物钟基因的功能不仅局限于调节生物节律,更与细胞内DNA的修复、细胞的增殖等一系列过程相关联,Timeless是生物钟基因成员之一,对Timeless基因的研究起步较晚。近年来研究发现生物钟基因在多种肿瘤中普遍存在表达异常,而对Timeless研... 生物钟基因的功能不仅局限于调节生物节律,更与细胞内DNA的修复、细胞的增殖等一系列过程相关联,Timeless是生物钟基因成员之一,对Timeless基因的研究起步较晚。近年来研究发现生物钟基因在多种肿瘤中普遍存在表达异常,而对Timeless研究较少。 展开更多
关键词 timeless 生物钟 基因 肿瘤
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永恒蛋白基因/周期蛋白基因介导多条通路在昼夜节律中的作用
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作者 王士杰 文登台 +2 位作者 孙国琪 王京峰 高颖晖 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第20期4305-4315,共11页
背景:昼夜节律与大多数哺乳动物及昆虫的生命活动息息相关。永恒蛋白基因作为编码永恒蛋白基因-周期蛋白基因复合物的关键成分在产生昼夜节律过程中起到十分关键的作用,但其在昼夜节律中的作用机制仍不清楚。目的:通过整理永恒蛋白基因... 背景:昼夜节律与大多数哺乳动物及昆虫的生命活动息息相关。永恒蛋白基因作为编码永恒蛋白基因-周期蛋白基因复合物的关键成分在产生昼夜节律过程中起到十分关键的作用,但其在昼夜节律中的作用机制仍不清楚。目的:通过整理永恒蛋白基因、周期蛋白基因、昼夜节律、环境及隐花色素基因之间的关系,更加全面地认识昼夜循环的入核、积累机制及环境对昼夜节律的影响。方法:应用计算机在Web of Science核心合集、PubMed数据库及CNKI中进行检索,以“永恒蛋白基因,周期蛋白基因,昼夜节律,环境”为中文检索词,以“Timeless,Period,circadian rhythm,environment”为英文检索词,通过全文阅读逐步排除非相关文献,最终纳入126篇文献进行综述。结果与结论:在昼夜时钟中,昼夜自发输出周期蛋白kaput和CYCLE激活永恒蛋白基因/周期蛋白基因,永恒蛋白基因调控周期蛋白基因的入核机制及稳定性,而周期蛋白基因也可以通过一些机制单独入核。酪蛋白激酶2、Shaggy蛋白激酶及双倍时间基因都可以通过磷酸化永恒蛋白基因/周期蛋白基因的方式来调节昼夜节律,参与转录。隐花色素基因介导的永恒蛋白基因降解对转录的完整性有十分重要的作用。环境因素、膳食方式等外界因素均可以通过永恒蛋白基因/周期蛋白基因对昼夜节律产生影响,而限时进食可作为一种改善昼夜节律紊乱的有效方法。 展开更多
关键词 昼夜节律 永恒蛋白基因 环境 隐花色素 周期蛋白基因 工程化组织构建
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粘虫生物钟timeless基因的克隆及时空和昼夜表达分析 被引量:1
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作者 冀佳悦 张蕾 +3 位作者 程云霞 罗礼智 仵均祥 江幸福 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期670-678,共9页
为明确生物钟timeless基因对粘虫Mythimna separata迁飞、交配等周期性活动的调节作用,利用PCR技术克隆了粘虫timeless基因,命名为Mstim,采用生物信息方法分析其序列特征,使用实时荧光定量PCR技术检测该基因在不同发育阶段、组织及昼夜... 为明确生物钟timeless基因对粘虫Mythimna separata迁飞、交配等周期性活动的调节作用,利用PCR技术克隆了粘虫timeless基因,命名为Mstim,采用生物信息方法分析其序列特征,使用实时荧光定量PCR技术检测该基因在不同发育阶段、组织及昼夜的表达特征。结果表明,Mstim的c DNA全长为3 132 bp,编码1 043个氨基酸,其预测的蛋白质Ms TIM分子量为117 k D,等电点5.14,具有timeless保守的PIS、NLS等结构域,与甜菜夜蛾Spodoptera exigua及棉铃虫Helicoverpa armigera的氨基酸序列相似性高达97%。荧光定量PCR结果显示成虫期的Mstim表达量最高,卵期和蛹期次之,6龄幼虫的表达量最低;在雌、雄蛾中均以触角及头部中的表达量较高,飞行肌、足及生殖腺中的表达量较低。粘虫雌、雄蛾触角中Mstim的昼夜表达模式相似,均为光期表达量低于暗期,光期5 h的表达量最低,光期末期逐渐升高,至暗期后3 h达到最高值,暗期末期表达量开始下降。说明Mstim基因在粘虫中的表达不仅具有发育时期和组织的时空特异性,而且表现出明显的昼夜特性,推测其可能参与粘虫生长发育和迁飞与生殖等行为、生理节律的调节。 展开更多
关键词 粘虫 永恒蛋白基因 克隆 时空及昼夜表达
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