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患者胃窦黏膜组织幽门螺杆菌real time-PCR检测与分离培养结果的一致性分析 被引量：2
1
作者 杨雅名 何利华 +6 位作者 杨宁敏 宫雅楠 韩秀瑞 范如岳 薛志静 魏永越 张建中 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期641-645,共5页
目的针对胃黏膜组织标本的幽门螺杆菌(HP)感染诊断的real time-PCR检测和分离培养2种最常用方法进行结果一致性分析,为HP感染诊断方法的选择提供科学依据。方法在浙江省4个地区(萧山、温岭、苍南和湖州)各选取1所医院,采集2020年11月16... 目的针对胃黏膜组织标本的幽门螺杆菌(HP)感染诊断的real time-PCR检测和分离培养2种最常用方法进行结果一致性分析,为HP感染诊断方法的选择提供科学依据。方法在浙江省4个地区(萧山、温岭、苍南和湖州)各选取1所医院,采集2020年11月16日至12月7日送至杭州致远检验医学研究所进行HP分离培养和耐药性分析的全部患者胃窦部黏膜活检标本,共1312份。每份样本经研磨匀浆处理后分为2份,分别用于常规HP分离培养和real time-PCR检测(以cagH为检测靶点),2种方法平行双盲进行。检测结果的一致性及不同医院来源样本间的差异用χ^(2)检验、Fisher精确检验以及独立样本t检验等统计学方法进行分析。结果1312份样本中,分离培养法和real time-PCR法的阳性率分别为29.34%(385/1312)、28.51%(374/1312),差异无统计学意义(P=0.636)。来自4所医院的标本,2种方法的检出率差异均无统计学意义(P=0.075),二者在萧山某院、温岭某院、苍南某院、湖州某院样本以及总体样本中的Kappa值分别为0.84、0.89、0.75、0.91、0.85。real time-PCR法的灵敏度和特异度分别为89.26%、100.00%。在real time-PCR法检测阳性而培养阴性的样本中,检测Ct值为25.47~34.97,均值为30.90,90%的Ct值均≤34.46,频数最高组为29.00~30.00组。结论分离培养法和real time-PCR法在临床胃黏膜标本HP诊断中均可达到较高的检测效能,且2种方法检出结果一致性良好,可应用于HP个体化治疗,以便在做出HP感染诊断的同时提供受检者的药敏检测结果。标本中HP菌量及标本的保存运输条件可能对结果产生重要影响。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 胃窦 分离培养 Real time-pcr
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18srDNA为内参照的Real-Time-PCR方法检测半夏病毒 被引量：2
2
作者 何煜波 陈集双 +2 位作者 陈海敏 冯俊丽 高必达 《晓庄学院自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2006年第3期103-106,共4页
利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.... 利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.以带病毒半夏母株为外植体培养的组培苗,其病毒含量以叶片中的相对较高,在块茎和愈伤组织中病毒相对较低.而ELISA方法在检测病毒含量低的样品时有假阴性结果;RT-PCR方法灵敏度可靠但不适宜精确量化. 展开更多
关键词 实时荧光PCR 黄瓜花叶病毒 反转录-PCR 双夹心酶联免疫反应 半夏
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猪肠道病毒和猪捷申病毒双重荧光RT-PCR检测方法的建立
3
作者 莫玲 于新友 +5 位作者 吕素芳 毕艳丽 张颖 李天芝 Ashenafi Kiros Wubshet 王文秀 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期49-53,共5页
为建立同时检测猪肠道病毒(PEV)和猪捷申病毒(PTV)的荧光RT-PCR方法,根据NCBI中PEV VP1(NCBI AF363453)和PTV VP1(NCBI GQ293092)基因序列,分别设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增程序,建立了一种无需提取核酸即可同时检测PEV... 为建立同时检测猪肠道病毒(PEV)和猪捷申病毒(PTV)的荧光RT-PCR方法,根据NCBI中PEV VP1(NCBI AF363453)和PTV VP1(NCBI GQ293092)基因序列,分别设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增程序,建立了一种无需提取核酸即可同时检测PEV和PTV的双重荧光RT-PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性及重复性进行评估,并对临床样品进行检测。结果表明,20μL体系中各引物和探针最适加入量为:PEV-F 0.8μL、PEV-R 1.3μL、PEV-P 0.6μL、PTV-F 1.2μL、PTV-R 1.4μL和PTV-P 0.7μL,优化后的扩增程序为:90℃3 min;60℃反转录5 min;95℃5 s,52℃退火延伸20 s(此处收集荧光),共计40个循环。该对猪常见病原均无扩增,对PEV和PTV检测敏感性分别为5.13 TCID 50/100μL和3.47 TCID 50/100μL,对135份临床样品检测结果与传统核酸提取法结果一致。成功建立了PEV和PTV的免提取核酸双重荧光RT-PCR方法,特异性好,敏感性高,可用于临床两种疑似病例的快速检测。 展开更多
关键词 猪肠道病毒 猪捷申病毒 免提取核酸 荧光PCR
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早期分泌抗原靶标6免疫组织化学联合抗酸染色法检测在结核病病理诊断中的价值
4
作者 童海涛 郑叶 +5 位作者 周静 冯艳玲 石雨涵 曾东 郭文娟 宋曙 《安徽医药》 2026年第1期160-164,I0007,共6页
目的探讨早期分泌抗原靶标6(early secreted antigenic target 6,ESAT-6)联合抗酸染色检测在结核病病理诊断中的意义。方法收集2017年1—8月上海市公共卫生临床中心病理学诊断结核病的病人81例临床资料,评价ESAT-6免疫组织化学法、抗酸... 目的探讨早期分泌抗原靶标6(early secreted antigenic target 6,ESAT-6)联合抗酸染色检测在结核病病理诊断中的意义。方法收集2017年1—8月上海市公共卫生临床中心病理学诊断结核病的病人81例临床资料,评价ESAT-6免疫组织化学法、抗酸染色法、实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)法检测对结核病的诊断效能,分析不同方法检测的一致性关系,并以qRT-PCR法为标准衡量ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测的效果。结果3种检测方法按结核杆菌检出率从高到低分别为qRT-PCR法(87.65%,71/81)、抗酸染色法(72.84%,59/81)、ESAT-6免疫组织化学法(64.20%,52/81)(χ^(2)=12.13,P=0.002)。3种方法在不同病变组织的结核杆菌检出率差异无统计学意义(χ^(2)=7.53、4.94、5.92,P=0.110、0.294、0.210)。ESAT-6免疫组织化学法与抗酸染色法检出率差异无统计学意义(χ^(2)=1.40,P=0.236),3种方法总检出率为93.83%,qRT-PCR法检出率显著高于ESAT-6免疫组织化学法与抗酸染色法(χ^(2)=12.19,P=0.001;χ^(2)=5.61,P=0.018)。抗酸染色和免疫组织化学法联合检测检出率(85.19%,69/81)稍低于单独使用qRT-PCR检测检出率(87.65%,71/81),差异无统计学意义(χ^(2)=0.21,P=0.647)。64例样本ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测与qRT-PCR检测均为阳性,5例样本ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测与qRT-PCR检测均为阴性,检出一致性为93.82%(Kappa=0.37,P=0.028)。结论ESAT-6免疫组织化学联合抗酸染色法检测在结核病病理诊断中有较高价值。 展开更多
关键词 结核病 病理诊断 免疫组织化学 早期分泌抗原靶标6(ESAT-6) 抗酸染色 实时荧光定量PCR
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传染性胰脏坏死病毒(IPNV)检测及区分1、5基因型方法的建立及应用
5
作者 刘威彤 张振 +3 位作者 赵景壮 邵轶智 卢彤岩 徐黎明 《水产学报》 北大核心 2026年第2期221-231,共11页
【目的】建立传染性胰脏坏死病毒(IPNV)鉴定与基因分型一体化检测方法。【方法】基于IPNV VP2基因序列保守片段,设计了用于IPNV高效检测的探针法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)引物;进一步针对IPNV 1型和5型毒株特异性片段设计了用于IPNV基... 【目的】建立传染性胰脏坏死病毒(IPNV)鉴定与基因分型一体化检测方法。【方法】基于IPNV VP2基因序列保守片段,设计了用于IPNV高效检测的探针法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)引物;进一步针对IPNV 1型和5型毒株特异性片段设计了用于IPNV基因分型的聚合酶链式反应(PCR)引物组,并对检测方法进行优化与验证。【结果】本研究建立的RT-qPCR检测方法对IPNV具有较高的特异性,对病毒性出血性败血症病毒(VHSV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的核酸均无扩增;灵敏度高,对IPNV 1型和5型检测限均低至10个/μL拷贝数;稳定性良好,批内和批间重复变异系数均小于1%。利用本研究建立的RT-qPCR和PCR方法对来自不同虹鳟养殖区域的30份已鉴定样本进行IPNV检测与基因分型,结果符合率为100%。【结论】本研究建立的方法能够特异、稳定、灵敏地检测IPNV并准确区分基因1型或5型毒株,实现了病原鉴定与基因分型的高效一体化检测。本研究为我国IPNV的监测提供了有效的工具,为IPN病害的分类防控提供了科学指导。 展开更多
关键词 冷水性鱼类 传染性胰脏坏死病毒(IPNV) 基因型分析 实时荧光定量PCR 快速检测
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基于EVM009基因的鼠痘病毒荧光定量检测方法建立
6
作者 赵立磊 任善会 +11 位作者 王会宝 高小龙 姚威 杨雪 张红强 王小龙 张强蓉 喇萍 叶国荣 陈豪泰 孙跃峰 樊江峰 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期9-14,共6页
为建立一种快速测定鼠痘病毒(ECTV)含量的检测方法,针对鼠痘病毒的基因序列,建立了靶向ECTV EVM009基因的荧光定量PCR检测方法。根据ECTV全基因序列,设计出4对qPCR引物并评价其特异性及敏感性。最终通过筛选得到靶向于ECTV EVM009基因... 为建立一种快速测定鼠痘病毒(ECTV)含量的检测方法,针对鼠痘病毒的基因序列,建立了靶向ECTV EVM009基因的荧光定量PCR检测方法。根据ECTV全基因序列,设计出4对qPCR引物并评价其特异性及敏感性。最终通过筛选得到靶向于ECTV EVM009基因的一对特异性高、灵敏度强的荧光定量PCR引物。利用构建的pCAGGS-EVM009真核表达质粒绘制标准曲线获得标准曲线y=-3.5099 x+41.30,线性相关系数R^(2)=0.9992。扩增效率达到92.7%;对重组质粒标准品的最低检测限为4.91×10^(0)拷贝/μL;组内与组间的重复试验变异系数均小于2%;仅能有效检测ECTV,与VACV、GPTV、SPPV、ORFV和LSDV均无交叉反应。结果表明,建立的荧光定量检测方法特异性强、敏感性高及重复性好,可以用于ECTV感染小鼠模型中病理组织中病毒载量的测定。 展开更多
关键词 鼠痘病毒 EVM009基因 荧光定量PCR 小鼠模型
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猫疱疹病毒Ⅰ型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用
7
作者 刘雅雯 赵广荣 +9 位作者 许丽文 孙亚杰 李双双 刘佳佳 李智杰 张成琪 符建海 张子闯 胡博 白雪 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第1期79-84,共6页
猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方... 猫疱疹病毒I型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病,本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据GenBank上FHV-1 US6保守区域的基因序列,设计合成1对针对FHV-1 gD基因的引物,建立了一种SYBR Green I荧光定量PCR的检测方法,构建标准曲线后分别验证该方法的特异性、敏感性、重复性,并将其进一步应用于人工感染猫产生的临床样本检测。结果:该特异性引物与猫杯状病毒(FCV)、猫细小病毒(FPV)和猫冠状病毒(FCoV)均未出现交叉反应,检测下限为14.78 copies/μL,组内和组间重复试验的变异系数均低于2%;该方法对临床样本的检出率比常规PCR高出25.46%;通过该方法检测人工感染FHV-1强毒后猫的每日排毒量,结果呈现上升趋势,与临床发病程度相符,猫的脏器病毒载量存在个体差异,但集中在心脏、肺脏、肠道和膀胱中检出。综上,该研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法对FHV-1具有较好的特异性、灵敏度和重复性,为FHV-1感染的快速诊断以及疾病的防控提供方法支持。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒Ⅰ型 荧光定量PCR SYBR GreenⅠ US6基因 猫病毒性鼻气管炎
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血清学检测指标及实时荧光定量PCR检测在侵袭性念珠菌病患者中的诊断价值
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作者 MD ALI HOSSAIN 彭亮 +2 位作者 袁余 周晓涵 马莹 《四川大学学报(医学版)》 北大核心 2026年第1期170-176,共7页
目的 评估血清学检测指标1, 3-β-D-葡聚糖试验(G试验)、念珠菌甘露聚糖(Mn)抗原、念珠菌甘露聚糖IgG抗体(Mn-IgG)和实时荧光定量PCR(qPCR)检测在侵袭性念珠菌病(IC)患者中的临床诊断价值。方法 收集四川大学华西医院2022年12月-2024年1... 目的 评估血清学检测指标1, 3-β-D-葡聚糖试验(G试验)、念珠菌甘露聚糖(Mn)抗原、念珠菌甘露聚糖IgG抗体(Mn-IgG)和实时荧光定量PCR(qPCR)检测在侵袭性念珠菌病(IC)患者中的临床诊断价值。方法 收集四川大学华西医院2022年12月-2024年12月期间通过血培养及无菌体液培养确诊为IC患者的血清样本79例作为IC组,排除IC感染患者的血清样本83例作为非IC组,进行G试验(磁微粒化学发光法)、Mn抗原(ELISA法)、Mn-IgG抗体(化学发光法)和qPCR检测。比较分析G试验、Mn抗原、Mn-IgG抗体和qPCR检测及联合检测对IC诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值,绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算ROC曲线下面积(AUC)。结果 3种血清学检测指标单独检测对IC诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为:G试验62.03%、94.87%、92.45%、71.15%;Mn抗原65.63%、86.59%、79.25%、76.34%;Mn-IgG抗体31.65%、87.95%、71.43%、57.48%。G试验、Mn抗原、Mn-IgG三项联合检测敏感性提高至73.44%。基于ROC曲线分析,各血清学检测指标诊断IC的AUC分别为:G试验0.862(95%CI:0.803-0.922)、Mn试验0.853(95%CI:0.790-0.915)、Mn-IgG 0.603(95%CI:0.514-0.692)。G试验+Mn试验两项联合检测、G试验+Mn-IgG两项联合检测、G试验+Mn试验+Mn-IgG三项联合检测的AUC分别为0.875(95%CI:0.809-0.925)、0.869(95%CI:0.805-0.917)和0.875(95%CI:0.809-0.924),优于单独检测。qPCR对IC诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为100.00%、98.80%、98.75%、100.00%。以培养菌株基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定结果为金标准,qPCR检测对白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌的诊断一致性分别为100.00%、100.00%、94.44%和90.00%。结论 G试验、Mn抗原和Mn-IgG抗体联合检测可提高诊断敏感性,有助于IC的早期诊断。qPCR对IC具有优异的诊断性能,可将IC常见念珠菌鉴定至种水平,并可覆盖其他念珠菌种,与临床培养方法结果一致性好。 展开更多
关键词 1 3-β-D葡聚糖 念珠菌甘露聚糖抗原 念珠菌甘露聚糖IgG抗体 实时荧光定量PCR 侵袭性念珠菌病
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MNS杂交糖蛋白GP.Vw基因分型方法的建立及其在广州献血者中的分布研究
9
作者 刘杏 黄晓斌 +3 位作者 苏玮 戚艳萍 邓雅雯 魏玲 《热带医学杂志》 2026年第1期29-32,F0004,共5页
目的建立MNS杂交糖蛋白GP.Vw的基因分型方法,并筛查其在广州献血者人群中的分布频率。方法收集2806例广州血液中心无偿献血者全血标本,利用DNA提取试剂盒抽提基因组DNA。根据GYPA外显子3的序列特征,设计并合成GYP*Vw基因序列特异性引物... 目的建立MNS杂交糖蛋白GP.Vw的基因分型方法,并筛查其在广州献血者人群中的分布频率。方法收集2806例广州血液中心无偿献血者全血标本,利用DNA提取试剂盒抽提基因组DNA。根据GYPA外显子3的序列特征,设计并合成GYP*Vw基因序列特异性引物,分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)和直接测序法对2806例献血者标本的GYP*Vw基因进行分型。结果成功建立了GYP*Vw的qPCR基因分型方法,2806例标本中未检测到GYP*Vw等位基因,并且qPCR和直接测序法的检测结果完全一致。结论qPCR是一种检测GYP*Vw等位基因的简便快捷的方法。同时,该例成功的引物设计经验,可作为其他同源性基因引物设计的参考。GP.Vw杂交糖蛋白在广州献血者人群中的分布频率低。 展开更多
关键词 MNS杂交糖蛋白 GP.Vw 实时荧光定量PCR
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布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
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作者 彭海涛 高阳 +6 位作者 刘雨欣 顾德媛 张东 张如 许会会 陈思 杨艳玲 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期369-377,共9页
旨在建立一种经济高效的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法,用于布鲁菌感染的动物及动物产品的快速检测并区分牛种布鲁菌和其他种布鲁菌感染的动物,为临床常的疫苗和研发的新型疫苗提供科学有效的鉴别诊断方法。本研究根据GenBan... 旨在建立一种经济高效的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法,用于布鲁菌感染的动物及动物产品的快速检测并区分牛种布鲁菌和其他种布鲁菌感染的动物,为临床常的疫苗和研发的新型疫苗提供科学有效的鉴别诊断方法。本研究根据GenBank公布的galU和Omp31的序列设计检测引物和探针,构建重组质粒,对方法特异性、灵敏性及重复性评价,检测实验室制备和临床动物布病血清及组织样品。结果表明,成功建立了布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,该方法最低检测限为1.93×10^(0) copies·μL^(-1),与其他革兰阴性菌无交叉反应,批内及批间变异系数均小于2%。利用本研究建立的方法检测实验室制备样品和临床采集样品共156份,与BCSP31-PCR相比,两者阳性符合率为69.75%;与PCR和虎红凝集试验相比,灵敏性更高,双重TaqMan荧光定量PCR的敏感性为100%,PCR的敏感性为69.75%,虎红凝集试验的敏感性为58.65%。本研究建立的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,为布鲁菌临床鉴别检测、流行病学调查及净化提供技术支持。 展开更多
关键词 布鲁菌 双重Taq Man荧光定量PCR 检测方法 鉴别诊断
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甘蔗杆状病毒绝对荧光定量检测方法的建立与应用
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作者 夏宝山 王文治 +2 位作者 张树珍 袁潜华 沈林波 《热带生物学报(中英文)》 2026年第1期108-116,共9页
为建立甘蔗杆状病毒(sugarcane bacilliform virus,SCBV)的绝对荧光定量PCR检测方法,并测定甘蔗不同组织部位中SCBV载量,本研究从SCBV基因组保守区(SCBV-ORF1)设计特异性扩增引物,构建重组质粒pMD19T-SCBV-P1作为阳性质粒标准品,以其为... 为建立甘蔗杆状病毒(sugarcane bacilliform virus,SCBV)的绝对荧光定量PCR检测方法,并测定甘蔗不同组织部位中SCBV载量,本研究从SCBV基因组保守区(SCBV-ORF1)设计特异性扩增引物,构建重组质粒pMD19T-SCBV-P1作为阳性质粒标准品,以其为模板建立SCBV绝对荧光定量PCR检测方法。测试该方法的灵敏性、特异性和稳定性,并用该方法测定甘蔗种质不同组织中SCBV载量。结果表明,将含有SCBV基因组序列的重组质粒10倍比稀释成标准品,以其为模板进行荧光定量PCR,获得标准曲线y=-3.3397×log(x)+32.05,相关系数r^(2)=0.999;表明Cq值与标准品浓度拷贝数的对数呈线性关系。研究建立的绝对荧光定量PCR方法展现出高灵敏度特征,其检测下限可达到7 copies·μL^(-1),相较于常规PCR检测法,该方法的灵敏度提高了近100倍。该方法特异性高,可特异检测SCBV;重复性良好,批内和批间的变异系数均在0.11%~0.90%。甘蔗不同组织部位SCBV累积水平存在显著差异,其中正4叶SCBV载量显著高于其他组织部位(P<0.05)。本研究建立了能灵敏特异检测SCBV的绝对荧光定量PCR方法,为SCBV的诊断提供一种高效的定量检测方法,明确了甘蔗中SCBV检测的最佳采样部位是正4叶。 展开更多
关键词 甘蔗杆状病毒 绝对荧光定量PCR 病毒载量 检测
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槲树不同器官及盐胁迫下qRT-PCR的内参基因筛选及验证
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作者 蒋萌 白晓宁 +4 位作者 王文波 赵亚洲 胡增辉 苏淑钗 冷平生 《中南林业科技大学学报》 北大核心 2026年第1期211-220,234,共11页
[目的]筛选在不同器官及盐胁迫下表达稳定的槲树内参基因,验证所选内参基因在qRT-PCR中的适用性和稳定性,为精准评价槲树目标基因表达量提供理论依据。[方法]从槲树盐胁迫转录组中筛选出10个高表达传统管家基因作为候选内参基因(TUBA、T... [目的]筛选在不同器官及盐胁迫下表达稳定的槲树内参基因,验证所选内参基因在qRT-PCR中的适用性和稳定性,为精准评价槲树目标基因表达量提供理论依据。[方法]从槲树盐胁迫转录组中筛选出10个高表达传统管家基因作为候选内参基因(TUBA、TUBA、GAPDH、Actin、EIF2B5、UBE2W、ADCK、EEF1B、UBE2J1和EIF5A),采用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder软件和ΔCt程序对候选基因在槲树中的表达稳定性进行分析。以槲树6个器官(根、茎、叶、叶芽、花序、种子)及盐胁迫下4个不同处理时期(CK、3 h、24 h、96 h)的叶片为样品,通过qRT-PCR技术,结合候选内参基因,验证过氧化氢酶基因QdCAT2在槲树不同器官及盐胁迫下的表达模式以及候选内参基因的表达稳定性。[结果]10个候选内参基因中,EIF5A和UBE2W的表达稳定性最高,综合排名位居前列,EIF2B5为最不稳定内参基因。QdCAT2基因在槲树叶片中表达量最高,且随着盐胁迫时间的延长,表达量呈先升高后降低的趋势,在处理3 h后达到高峰,使用EIF5A、UBE2W及EIF5A+UBE2W组合作为内参基因得到的相对表达结果基本一致,表明EIF5A和UBE2W为槲树各器官及盐胁迫最适合的内参基因。[结论]成功筛选出了2个稳定内参基因,并验证了EIF5A、UBE2W及EIF5A+UBE2W组合均适合作为槲树不同器官及盐胁迫下qRT-PCR的内参基因,为槲树不同器官及盐胁迫下基因表达分析提供了参考,并为后续槲树分子生物学研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 槲树 实时荧光定量PCR 内参基因筛选 盐胁迫 表达分析
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实时荧光定量PCR与传统方法诊断HIV感染者合并耶氏肺孢子菌肺炎的效能比较
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作者 许少莉 王梦琦 +1 位作者 马丹丹 侯淑芬 《临床研究》 2026年第1期121-123,128,共4页
目的探讨实时荧光定量PCR(qPCR)与传统染色技术在艾滋病(HIV)感染者合并耶氏肺孢子菌肺炎中的诊断效能。方法选取2023年12月至2025年4月郑州市第六人民医院接收的130例疑似耶氏肺孢子菌肺炎的HIV感染者,共收集130份呼吸道标本(BALF或痰... 目的探讨实时荧光定量PCR(qPCR)与传统染色技术在艾滋病(HIV)感染者合并耶氏肺孢子菌肺炎中的诊断效能。方法选取2023年12月至2025年4月郑州市第六人民医院接收的130例疑似耶氏肺孢子菌肺炎的HIV感染者,共收集130份呼吸道标本(BALF或痰液)。所有患者于入院48 h内采集支气管肺泡灌洗液(BALF)或痰液,同期开展qPCR与传统染色[六胺银(GMS)染色]检测,比较两种方法的耶氏肺孢子菌肺炎诊断效能。结果所有130例均完成GMS染色检测,以临床最终裁决诊断为参照。GMS染色检出耶氏肺孢子菌肺炎19例(真阳19例,假阳0例),非耶氏肺孢子菌肺炎111例(真阴48例,假阴63例),其敏感度为23.17%(19/82),特异度为100.00%(48/48)。qPCR检出耶氏肺孢子菌肺炎84例(真阳78例,假阳6例),非耶氏肺孢子菌肺炎46例(真阴42例,假阴4例),其敏感度为95.12%(78/82),特异度为87.50%(42/48)。与GMS染色相比,qPCR法表现出明显更高的敏感度与总体准确度。两种方法均具有较高的特异度,GMS染色法特异度高于qPCR法。配对McNemar检验提示两法敏感度、特异度、准确率均存在统计学差异(P<0.05)。结论在HIV感染者疑似耶氏肺孢子菌肺炎的诊断中,qPCR相较于传统GMS染色,其敏感度与准确度较高。建议以qPCR作为首选检测手段,结合GMS染色及临床综合证据进行分层判定,以减少漏诊、提升诊断效率并优化治疗决策。 展开更多
关键词 艾滋病感染者 耶氏肺孢子菌肺炎 实时荧光定量PCR 六胺银染色 诊断效能 支气管肺泡灌洗液
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基于TaqMan-MGB探针的小麦叶疫病菌快速检测方法
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作者 吕友红 朱小琼 +1 位作者 刘芳 段维军 《生物安全学报(中英文)》 北大核心 2026年第1期94-102,共9页
【目的】小麦叶疫病菌为我国进境检疫性有害生物,建立特异性的实时荧光PCR检测方法,可实现对其快速、灵敏、准确的检测。【方法】依据小麦叶疫病菌及其近似种翻译延长因子(EF)序列差异,设计合成特异性引物与MGB探针,并优化实时荧光PCR... 【目的】小麦叶疫病菌为我国进境检疫性有害生物,建立特异性的实时荧光PCR检测方法,可实现对其快速、灵敏、准确的检测。【方法】依据小麦叶疫病菌及其近似种翻译延长因子(EF)序列差异,设计合成特异性引物与MGB探针,并优化实时荧光PCR反应条件,优化后引物终浓度为0.7μmol·L^(-1),探针终浓度为0.9μmol·L^(-1)。通过特异性试验、灵敏度试验及模拟样品检测验证该方法的可行性。【结果】特异性试验显示,该方法可特异性检出小麦叶疫病菌;灵敏度试验表明,在10μL反应体系中,最低检测限量为总DNA含量20 pg;模拟样品检测表明,此方法适用于疑似携带小麦叶疫病菌样品的检测。整个反应过程约1 h,且检测全程闭管,无需PCR后续处理。【结论】本研究建立的实时荧光PCR检测方法快速、灵敏、准确,为小麦叶疫病菌的早期快速检测提供了重要技术参考,对防范该检疫性真菌的传入与扩散具有重要意义。 展开更多
关键词 小麦叶疫病菌 实时荧光PCR TAQMAN-MGB探针 检测
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基于全基因组开发小麦矮腥黑粉菌特异性分子标记
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作者 高瑞芳 赵鹏 +3 位作者 汤怡静 刘宵宵 徐欣宇 郑铭森 《菌物学报》 北大核心 2026年第2期98-109,共12页
由小麦矮腥黑粉菌Tilletia controversa(TCK)引起的小麦矮腥黑穗病是一种危害大、防控难、影响特别大的危险性真菌病害,被称为“小麦一号病”,EPPO、澳大利亚、中国等国家/地区和组织将其列为检疫性病害。小麦矮腥黑粉菌与小麦光腥黑粉... 由小麦矮腥黑粉菌Tilletia controversa(TCK)引起的小麦矮腥黑穗病是一种危害大、防控难、影响特别大的危险性真菌病害,被称为“小麦一号病”,EPPO、澳大利亚、中国等国家/地区和组织将其列为检疫性病害。小麦矮腥黑粉菌与小麦光腥黑粉菌等近似种在形态学、分子生物学上的区分鉴定较困难,在检疫检查中容易造成误诊。本研究在全基因组水平上开发TCK的特异性分子标记,筛选到4个候选差异基因,即OG0008430、OG0008601、OG0008603、OG0008610,针对这4个基因分别设计了引物和探针,经过组合验证,建立了两组“三重+单重”实时荧光PCR方法,可以有效区分目标种(TCK)和近似种,实现小麦腥黑粉菌的准确鉴定,也可区分腥黑粉菌属的不同种。 展开更多
关键词 小麦矮腥黑粉菌 多重实时荧光PCR 分子标记 全基因组 检测方法
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转基因大豆DBN8205转化体特异性定量PCR方法的研发和验证
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作者 吴琼 谢香庭 +2 位作者 王磊 牟勇 李进伟 《中国农业科学》 北大核心 2026年第1期29-40,共12页
【目的】转基因大豆DBN8205转化体已获批转基因生物安全证书(生产应用),转育品种即将产业化应用,建立DBN8205转化体特异性定性定量检测方法,为转基因生物安全监管和定量标识制度的实施提供依据。【方法】根据DBN8205转化体的分子特征序... 【目的】转基因大豆DBN8205转化体已获批转基因生物安全证书(生产应用),转育品种即将产业化应用,建立DBN8205转化体特异性定性定量检测方法,为转基因生物安全监管和定量标识制度的实施提供依据。【方法】根据DBN8205转化体的分子特征序列,设计转化体特异性引物和探针。通过比较多个引物探针组合的扩增曲线及Ct值,筛选出最佳引物探针组合。分别在实时荧光定量PCR和微滴数字PCR平台上考察DBN8205转化体特异性PCR方法的特异性、检测限、定量限、动力学范围和定量准确性等技术参数。制定标准方法联合验证方案,邀请多家实验室对实时荧光定量PCR方法进行联合验证,对联合验证数据进行统计分析,考察方法的重复性和重现性。【结果】筛选出最佳引物探针组合DBN8205-QF/QR/QP,扩增产物长120 bp,仅特异性识别DBN8205转化体成分,具有良好的扩增特异性。在实时荧光定量PCR平台上,检测限为10 copies,定量限为40 copies,标准曲线的各项技术参数符合标准要求,在40—8.2×10^(4)copies动力学范围内,模板拷贝数和Ct值间具有良好的线性关系,能够对含量低至0.1%的样品进行准确定量。8家实验室联合验证结果表明,DBN8205转化体特异性实时荧光定量PCR方法具有良好的重复性和重现性。在微滴数字PCR平台上,检测限和定量限与实时荧光定量PCR方法相同,分别为10和40 copies,动力学范围为40—8.0×10^(4)copies,能够对低至0.1%的样品进行准确定量,定量结果比qPCR具有更高的精密度。t检验表明,实时荧光定量PCR和二重微滴数字PCR的定量结果具有良好的一致性。【结论】建立的DBN8205转化体特异性定量PCR方法能够对DBN8205转化体进行身份鉴定,可在实时荧光定量PCR和微滴数字PCR平台上对产品中的DBN8205转化体成分进行精准定量分析。 展开更多
关键词 转基因大豆 DBN8205转化体 实时荧光定量PCR 二重微滴数字PCR 定量
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鸡精调味料中鸡源性成分检测方法的研究进展
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作者 邬帅帆 《食品工业》 2026年第1期194-196,共3页
对鸡精调味料中鸡源性成分检测的研究进展进行了综述。鸡精调味料标准中的“其他氮”指标虽然可以间接反映鸡肉成分,但是没法直接证明鸡肉的存在,而且检测过程复杂。近年来各种新型检测技术不断涌现,比如实时荧光PCR技术和基于胶体金免... 对鸡精调味料中鸡源性成分检测的研究进展进行了综述。鸡精调味料标准中的“其他氮”指标虽然可以间接反映鸡肉成分,但是没法直接证明鸡肉的存在,而且检测过程复杂。近年来各种新型检测技术不断涌现,比如实时荧光PCR技术和基于胶体金免疫层析技术的检测卡。这些新型检测技术具有高特异性、高灵敏度、快速高效的特点,能够有效弥补传统方法的不足。然而这些技术也存在一定的局限性,因此优化检测方法仍然是未来的研究重点。现阶段必须结合多种技术进行综合判定,确保检测结果的准确性和可靠性,来推动鸡精行业的健康发展。 展开更多
关键词 鸡源性成分 其他氮 实时PCR技术 免疫层析技术
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香蕉线条病毒GF SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 卢咏思 刘润沛 +1 位作者 毛自先 饶雪琴 《仲恺农业工程学院学报》 2026年第1期11-15,共5页
香蕉线条病毒GF(Banana Streak Virus GF,BSGFV)是一种危害香蕉的主要香蕉线条病毒(Banana Streak Virus,BSV),为高效检测该病毒,本研究根据BSGFV外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因的保守序列设计特异性引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光定... 香蕉线条病毒GF(Banana Streak Virus GF,BSGFV)是一种危害香蕉的主要香蕉线条病毒(Banana Streak Virus,BSV),为高效检测该病毒,本研究根据BSGFV外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因的保守序列设计特异性引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR,qPCR)方法.结果表明,qPCR检测特异性引物BSGFV-qG3F/qG3R的最适宜浓度为0.2μmol/L,最适退火温度为59℃.qPCR可以检测到最低质粒浓度为1.0×10^(2) copies/μL,检测质粒的灵敏度是PCR的100倍,检测体系Ct值的变异系数小于5%.所建立的qPCR方法只适用于田间主栽品种如巴西蕉(AAA)等香蕉中BSGFV的检测,不适用于含B基因组的杂交种香蕉中BSGFV的检测.本研究为田间主栽品种香蕉中BSGFV的诊断和防控奠定了基础. 展开更多
关键词 香蕉线条病毒 香蕉线条病毒GF 内源性香蕉线条病毒GF SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR
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实时荧光PCR技术快速鉴定金银花和山银花成分的研究
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作者 雷庆 赵中开 金昊嵩 《山东化工》 2026年第3期147-153,237,共8页
为了快速准确地检测金银花和4种山银花成分,试验采用实时荧光PCR方法,分别以金银花、灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬和黄褐毛忍冬的特异性基因为研究对象,设计实时荧光PCR扩增的特异性引物及探针,建立金银花和4种山银花成分的实时荧光... 为了快速准确地检测金银花和4种山银花成分,试验采用实时荧光PCR方法,分别以金银花、灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬和黄褐毛忍冬的特异性基因为研究对象,设计实时荧光PCR扩增的特异性引物及探针,建立金银花和4种山银花成分的实时荧光PCR检测方法。结果表明:该检测方法特异性强、灵敏度高(检出限达到0.1%),可以准确、大批量地开展金银花和山银花的快速鉴别工作。 展开更多
关键词 金银花 山银花 实时荧光PCR 快速鉴别
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日本黄瓜绿斑驳花叶病毒常规和实时荧光RT-PCR检测
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作者 陈红运 叶明辉 +3 位作者 陈青 廖富荣 于子翔 沈建国 《植物检疫》 2026年第1期53-57,共5页
本研究以日本黄瓜绿斑驳花叶病毒(kyuri green mottle mosaic virus,KGMMV)为材料,设计1对常规RT-PCR检测引物KGCPN-F/KGCPN-R和1组引物/探针KGM-F/KGM-R/KGM-P,分析测试了2对已发表KGMMV常规RT-PCR检测引物KGCP-F/KGCP-R和KGMP-F/KGMP... 本研究以日本黄瓜绿斑驳花叶病毒(kyuri green mottle mosaic virus,KGMMV)为材料,设计1对常规RT-PCR检测引物KGCPN-F/KGCPN-R和1组引物/探针KGM-F/KGM-R/KGM-P,分析测试了2对已发表KGMMV常规RT-PCR检测引物KGCP-F/KGCP-R和KGMP-F/KGMP-R,建立了KGMMV的常规和实时荧光RT-PCR检测方法。结果表明,引物KGCP-F/KGCP-R扩增KGMMV时出现预期大小的条带,扩增黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)时出现非常微弱的条带;引物KGCPN-F/KGCPN-R扩增KGMMV时出现预期大小的条带,扩增小西葫芦绿斑驳花叶病毒(zucchini green mottle mosaic virus,ZGMMV)时出现比预期稍大的条带,通过对PCR产物进行序列测定和分析比对可准确鉴定KGMMV。KGCP-F/KGCP-R和KGCPN-F/KGCPN-R的相对灵敏度分别为10^(-6)和10^(-5)稀释度,适用于KGMMV的常规RT-PCR检测。基于引物探针KGM-F/KGM-R/KGM-P建立的KGMMV实时荧光RT-PCR检测方法能特异性检出KGMMV,相对灵敏度达10^(-7)稀释度,分别比2对常规RT-PCR检测引物高10倍和100倍,适用于瓜类种子中KGMMV的快速检测。 展开更多
关键词 日本黄瓜绿斑驳花叶病毒 常规RT-PCR 实时荧光RT-PCR 检测
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