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Melatonin improves endometrial receptivity and embryo implantation via MT2/PI3K/LIF signaling pathway in sows 被引量:1
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作者 Xue Qin Menghao Yang +4 位作者 Yang Yu Xiaolin Wang Yi Zheng Rui Cai Weijun Pang 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 2025年第2期631-652,共22页
Background Increased backfat thickness of sows in early gestation is negative to reproductive performance.Endometrial receptivity is an important determinant of reproductive success,but it is unclear whether the effec... Background Increased backfat thickness of sows in early gestation is negative to reproductive performance.Endometrial receptivity is an important determinant of reproductive success,but it is unclear whether the effect of sow backfat thickness on litter size is associated with endometrial receptivity and whether melatonin treatment may have benefits.The present study seeks to answer these questions through in vitro and in vivo investigations.Results Excessive lipid deposition and lower melatonin levels in the uterus are detrimental to endometrial receptivity and embryo implantation in high backfat thickness sows.In cells treated with melatonin,the MT2/PI3K/LIF axis played a role in reducing lipid accumulation in porcine endometrial epithelium cells and improved endometrial receptivity.Furthermore,we found a reduction of lipids in the uterus after eight weeks of intraperitoneal administration of melatonin to HFD mice.Notably,melatonin treatment caused a significant reduction in the deposition of endometrial collagen,an increase in the number of glands,and repair of the pinopode structure,ultimately improving endometrial receptivity,promoting embryo implantation,and increasing the number of litter size of mice.Conclusions Collectively,the finding reveals the harmful effects of high backfat thickness sows on embryo implantation and highlight the role of melatonin and the MT2/PI3K/LIF axis in improving endometrial receptivity by enhancing metabolism and reducing the levels of uterine lipids in obese animals. 展开更多
关键词 Backfat thickness Embryo implantation Endometrial receptivity MELATONIN MT2/PI3k/LIF SOW
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补骨脂酚抑制PI3K/Akt/Nrf2/HO-1对氧糖剥夺所致SH-SY5Y细胞损伤的作用及机制 被引量:2
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作者 徐玥玮 张珅 +6 位作者 高晓明 王丽 杨满琴 张梦翔 杨晓丹 戴文玲 蔡明 《药物评价研究》 北大核心 2025年第2期448-454,共7页
目的研究补骨脂酚对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导人源性神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的影响。方法MTT法检测补骨脂酚(5、10、20、40、80μmol·L^(-1))对SH-SY5Y细胞活性的影响。将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组、补骨脂酚(5、1... 目的研究补骨脂酚对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导人源性神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的影响。方法MTT法检测补骨脂酚(5、10、20、40、80μmol·L^(-1))对SH-SY5Y细胞活性的影响。将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组、补骨脂酚(5、10、20μmol·L^(-1))组、补骨脂酚(20μmol·L^(-1))+ML385(2μmol·L^(-1),Nrf2抑制剂)组、补骨脂酚(20μmol·L^(-1))+LY294002[5μmol·L^(-1),磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂]组。MTT法检测SH-SY5Y细胞活力,倒置显微镜观察各组SH-SY5Y细胞形态,试剂盒法检测细胞上清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法和Western blotting法测定磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶B(Akt)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)mRNA和蛋白水平。结果补骨脂酚对正常SH-SY5Y细胞存活率无影响。与对照组比较,模型组细胞存活率显著下降(P<0.01),细胞个数明显减少,部分细胞裂解成碎片,部分细胞死亡;SOD、CAT活性显著降低(P<0.01),PI3K/Akt/Nrf2/HO-1 mRNA及蛋白水平显著下调(P<0.05、0.01、0.001)。与模型组比较,补骨脂酚显著增加细胞存活率(P<0.01),明显增加细胞个数,显著上调SOD、CAT活性(P<0.05、0.01),显著上调PI3K/Akt/Nrf2/HO-1 mRNA及蛋白水平(P<0.05、0.01、0.001)。与补骨脂酚(20μmol·L^(-1))组比较,补骨脂酚+ML385可逆转补骨脂酚对HO-1 mRNA及蛋白的上调作用(P<0.05、0.01),补骨脂酚+LY294002可逆转补骨脂酚对Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白水平的上调作用(P<0.05、0.01)。结论补骨脂酚可显著改善OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞损伤,且机制可能是通过激活PI3K/Akt进而上调Nrf2/HO-1抑制氧化应激改善神经损伤。 展开更多
关键词 补骨脂酚 SH-SY5Y细胞 脑缺血再灌注 氧糖剥夺/复糖复氧 Nrf2/HO-1 PI3k/AkT
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Effect of Jiawei Huangqi Guizhi decoction(加味黄芪桂枝汤)on theexpression of gastrin content and phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/mechanistic target of rapamycin complex 2 signallingpathways in rats with chronic atrophic gastritis
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作者 ZHOU Xia LIANG Kaiqing +4 位作者 CHEN Weigang CAO Yong DUO Hongdong LI Qiangbin AN Yun 《Journal of Traditional Chinese Medicine》 2025年第4期770-776,共7页
OBJECTIVE:To investigate the effects of Jiawei Huangqi Guizhi decoction(加味黄芪桂枝汤)on chronic atrophic gastritis(CAG)in rats and its modulation of the phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/mechanistic tar... OBJECTIVE:To investigate the effects of Jiawei Huangqi Guizhi decoction(加味黄芪桂枝汤)on chronic atrophic gastritis(CAG)in rats and its modulation of the phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/mechanistic target of rapamycin complex 2(PI3K/Akt/m TORC2)signaling pathway.METHODS:CAG was induced in rats and treated with high-,medium-,or low-dose Jiawei Huangqi Guizhi decoction.Gastric histopathology was observed by hematoxylin and eosin staining.Serum levels of gastrin,PI3K,Akt,and m TORC2 were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.Gene and protein expression levels were analyzed by reverse transcription polymerase chain reaction and western blot.RESULTS:The decoction alleviated gastric mucosal injury,reduced inflammation,and restored epithelial structure.It regulated PI3K,Akt,and m TORC2 expression at both m RNA and protein levels.CONCLUSION:Jiawei Huangqi Guizhi decoction may prevent CAG progression by improving gastric tissue and modulating the PI3K/Akt/m TORC2 signaling pathway. 展开更多
关键词 GASTRINS PI3k Akt mechanistic target of rapamycin complex 2 signal transduction PATHOLOGY Jiawei Huangqi Guizhi decoction
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KMT2D调控PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌发展 被引量:1
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作者 周珍 魏娉 +3 位作者 姜琳娜 何鹏 尹峰 安欣 《解剖科学进展》 2025年第1期55-57,61,共4页
目的 研究KMT2D与PI3K/AKT信号通路在食管鳞状细胞癌的发展中的相互作用机制。方法 通过免疫组化实验分析癌组织和癌旁组织KMT2D的表达水平;将KYSE-410细胞分为pcDNA NC组、pcDNA KMT2D和LY294002组。细胞集落形成实验检测KYSE-410细胞... 目的 研究KMT2D与PI3K/AKT信号通路在食管鳞状细胞癌的发展中的相互作用机制。方法 通过免疫组化实验分析癌组织和癌旁组织KMT2D的表达水平;将KYSE-410细胞分为pcDNA NC组、pcDNA KMT2D和LY294002组。细胞集落形成实验检测KYSE-410细胞生长能力;Transwell实验分析KYSE-410细胞侵袭能力;流式细胞术分析KYSE-410细胞凋亡率;蛋白免疫印迹实验分析KMT2D对PI3K/AKT通路的调控作用。结果 癌组织中KMT2D表达水平降低。与pcDNA NC组相比,pcDNA KMT2D组和LY294002组的KYSE-410细胞的集落形成数量和侵袭能力降低、凋亡率增加、PI3K和AKT蛋白磷酸化水平下降。结论 KMT2D能够抑制食管鳞状细胞癌KYSE-410细胞的生长和侵袭,促进KYSE-410细胞的凋亡,并且KMT2D这一作用与抑制PI3K/AKT信号通路激活有关。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 kMT2D PI3k AkT 侵袭 凋亡
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LncRNA SNHG5 modulates cell proliferation and migration through the miR-92a-3p/BTG2 axis in gastric cancer by the PI3K/AKT pathway
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作者 Qi-Qi Mao Mei-Lin Zhang +10 位作者 Liang Zhong Xu-Dong Xu Xin-Hai Wang Du-Yi Pan Fu-Sheng Zhou Jia-Xin Huang Xian-Guang Zhao Jia-Jie Chen Xiao-Yun Jiang Xu Sun Wei-Qun Ding 《World Journal of Gastrointestinal Oncology》 2025年第8期330-343,共14页
BACKGROUND Gastric cancer(GC)is a widespread malignancy and associated with high rates of morbidity and mortality worldwide.AIM To examine the functional role of long non-coding RNAs small nucleolar RNA host gene 5(SN... BACKGROUND Gastric cancer(GC)is a widespread malignancy and associated with high rates of morbidity and mortality worldwide.AIM To examine the functional role of long non-coding RNAs small nucleolar RNA host gene 5(SNHG5)and its regulation of miR-92a-3p and B-cell translocation gene 2(BTG2)in GC progression.METHODS Quantitative reverse transcription PCR and western blot analysis determined the expression of SNHG5,miR-92a-3p,and BTG2 in GC and adjacent non-neoplastic mucosa.Dual-luciferase assays demonstrated interactions of SNHG5 with miR-92a-3p and BTG2.AGS cells were transfected with SNHG5 overexpression and miR-92a-3p knockdown models.Various assays,including CCK-8,colony formation,scratch wound healing,and Transwell assays,were used to determine cell proliferation and migration.An experimental model of a xenograft mouse was used to determine in vivo tumor growth.At the same time histological changes were evaluated by hematoxylin and eosin staining,with western blot analysis used to evaluate signaling pathway protein expression.RESULTS BTG2 and SNHG5 were downregulated in GC tissues,and miR-92a-3p was upregulated.Overexpression of SNHG5 or knockdown of miR-92a-3p reduced GC cell proliferation and migration,and increased BTG2 expression while decreasing PI3K/AKT signaling activity.The dual-luciferase assays demonstrated direct binding of miR-92a-3p to SNHG5 and BTG2.Tumor volume and weight were significantly reduced in mice transplanted with AGS cells treated with miR-92a-3p inhibitor or SNHG5 overexpression compared with control AGS cells.Hematoxylin and eosin staining revealed that treated tumors exhibited degenerative characteristics,including irregular morphology and nucleolysis.CONCLUSION LncRNA SNHG5 inhibited GC cell growth and migration by modulating the PI3K/AKT pathway via the miR-92a-3p/BTG2 axis. 展开更多
关键词 PI3k/AkT signaling pathway B-cell translocation gene 2 Gastric cancer Long non-coding RNAs small nucleolar RNA host gene 5 Non-coded RNA Cell proliferation
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Id2通过PI3K/AKT通路调控Tcm细胞的代谢重编程抑制结肠癌细胞生长
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作者 刘枋 潘春丽 +2 位作者 周智锋 陈淑萍 叶韵斌 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第6期570-578,共9页
目的:探讨分化抑制因子2(Id2)在诱导生成中央记忆性T(Tcm)细胞及增强T细胞抗肿瘤持久性中的作用。方法:磁珠分选CD8^(+)初始T细胞,与负载癌胚抗原(CEA)的树突状细胞(DC)共培养,经白介素-2(IL-2)或IL-7/15/21/23分别诱导培养效应T(Teff)... 目的:探讨分化抑制因子2(Id2)在诱导生成中央记忆性T(Tcm)细胞及增强T细胞抗肿瘤持久性中的作用。方法:磁珠分选CD8^(+)初始T细胞,与负载癌胚抗原(CEA)的树突状细胞(DC)共培养,经白介素-2(IL-2)或IL-7/15/21/23分别诱导培养效应T(Teff)或Tcm细胞;qPCR和WB法分别检测T细胞中Id2和Id3 mRNA、蛋白表达;慢病毒敲减T细胞中Id2基因,用流式细胞术检测其T细胞记忆表型;WB法检测PI3K/AKT通路相关蛋白的表达;Seahorse能量代谢仪分析细胞外酸化速率(ECAR)和耗氧速率(OCR);斑马鱼结肠癌HCT116细胞移植瘤模型分析Teff和Tcm细胞的抗肿瘤差异,进一步观察敲减Id2基因的Tcm细胞(Tcm-shId2)对第二次移植瘤的生长抑制。结果:Tcm细胞高表达Id3 mRNA(P<0.05),而Teff细胞高表达Id2 mRNA(P<0.001)。成功构建敲减Id2基因的Tcm细胞(Tcm-shId2)且其Id3表达明显上调,敲减Id2可促进Tcm细胞的形成(P<0.05)。Tcm-shId2细胞通过PI3K/AKT通路进行代谢重编程,有效抑制斑马鱼体内结肠癌移植瘤的生长,对第二次移植瘤也能产生显著抑制作用(P<0.01)。结论:Id2可能通过调控PI3K/AKT通路改变T细胞代谢模式,从而促进CD8^(+)T细胞向Tcm细胞分化,有效抑制结肠癌移植瘤的生长。 展开更多
关键词 分化抑制因子2 中央记忆性T细胞 T细胞分化 PI3k/AkT信号通路 代谢重编程
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不忘散加味方通过PI3K/Akt/mTOR通路调控海马自噬改善2型糖尿病认知功能障碍大鼠的机制
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作者 杨婕 刘铜华 +2 位作者 刘玮 吴丽丽 秦灵灵 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第13期104-113,共10页
目的:本研究旨在评估不忘散加味方对2型糖尿病轻度认知障碍(T2DM-MCI)大鼠认知功能的治疗效果,并探讨其作用机制。方法:将36只5周龄SPF级SD大鼠随机平均分为6组:正常组(普通饲料饲养)、模型组(高糖高脂饲料饲养)、不忘散加味方低、中、... 目的:本研究旨在评估不忘散加味方对2型糖尿病轻度认知障碍(T2DM-MCI)大鼠认知功能的治疗效果,并探讨其作用机制。方法:将36只5周龄SPF级SD大鼠随机平均分为6组:正常组(普通饲料饲养)、模型组(高糖高脂饲料饲养)、不忘散加味方低、中、高剂量组(1.86、3.72、7.44 g·kg^(-1))和西药石杉碱甲组(0.018 mg·kg^(-1))。每日灌胃1次,连续灌胃给药12周。动态监测大鼠体质量、血糖;采用Morris水迷宫实验测试大鼠认知功能;苏木素-伊红(HE)、尼氏染色观察海马病理变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清及海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6的表达情况;蛋白质印迹法(Western blot)检测海马组织中关键自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶复合体调控亚基(Beclin1)及磷酸化UNC-51样激酶(p-ULK)1/2的表达水平。并通过免疫荧光染色技术观察p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR、p-Akt/Akt的调控情况。结果:与模型组比较,不忘散加味方低、中、高剂量组及石杉碱甲组大鼠的体质量在实验结束时较高(P<0.05),不忘散加味方中、高剂量组大鼠的随机血糖数值均明显较低(P<0.05);水迷宫实验中,与模型组比较,不忘散加味方中、高剂量组及石杉碱甲组大鼠,逃逸潜伏期显著缩短(P<0.01),不忘散加味方低、中、高剂量组及石杉碱甲组的海马和皮质区域的细胞排列较为规则,神经元数量明显增加,尼氏小体显著恢复。与模型组比较,不忘散加味方低、中、高剂量组和石杉碱甲组在血清、海马组织中的IL-1β和IL-6的表达均明显降低(P<0.05),海马组织中的LC3Ⅱ/Ⅰ及Beclin1表达水平均明显升高(P<0.05),p-ULK水平亦明显上调(P<0.05),不忘散加味方中、高剂量组及石杉碱甲组海马组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及p-mTOR/mTOR均显著下降(P<0.01)。结论:不忘散加味方通过多重机制显著改善了T2DM大鼠的认知功能障碍和神经损伤,有效调节了代谢紊乱,降低了血糖水平,改善了血脂代谢,并减轻了氧化应激。其通过抑制炎症反应和激活海马组织中的自噬通路,促进了神经元的保护和修复。同时,不忘散加味方通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,解除自噬抑制,进一步缓解了脑组织损伤。 展开更多
关键词 2型糖尿病 轻度认知障碍 不忘散加味方 糖脂代谢 神经保护 PI3k/Akt/mTOR信号通路
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缺氧诱导下CHCHD2通过PI3K/Akt通路调控头颈鳞癌血管生成的分子机制
8
作者 易烛光 岑瑞祥 曹炜 《吉林医学》 2025年第10期2353-2357,共5页
目的:探讨螺旋-螺旋-线状螺旋-螺旋结构域包含蛋白2(CHCHD2)在缺氧环境中通过PI3K/AKT信号通路调控头颈部鳞状细胞癌(HNSC)血管生成的机制,为HNSC抗血管生成治疗提供新的潜在靶点。方法:采用Western印迹检测缺氧条件下HNSC细胞中CHCHD2... 目的:探讨螺旋-螺旋-线状螺旋-螺旋结构域包含蛋白2(CHCHD2)在缺氧环境中通过PI3K/AKT信号通路调控头颈部鳞状细胞癌(HNSC)血管生成的机制,为HNSC抗血管生成治疗提供新的潜在靶点。方法:采用Western印迹检测缺氧条件下HNSC细胞中CHCHD2蛋白的表达变化;通过TCGA数据库分析CHCHD2与血管生成及PI3K/AKT信号通路的相关性。在HNSC细胞中构建CHCHD2过表达模型,并收集其条件培养基刺激HUVECs,利用管腔形成实验、划痕实验和Tran-swell迁移实验评估CHCHD2对血管生成的影响。结果:在缺氧处理后,CHCHD2在HNSC细胞中的表达显著升高(P<0.05),且其表达水平与TCGA中血管生成及PI3K/AKT通路评分呈正相关。功能实验结果表明,CHCHD2过表达可显著增强HU-VECs的管腔形成能力(t=7.68,P<0.05)、划痕闭合率(t=8.48,P<0.05)及迁移能力(t=12.83,P<0.05)。机制研究显示,CHCHD2过表达能够激活PI3K/AKT通路。结论:CHCHD2在HNSC缺氧微环境中表达上调,可通过激活PI3K/AKT信号通路增强内皮细胞功能,进而促进肿瘤相关血管生成。 展开更多
关键词 头颈部鳞状细胞癌 CHCHD2 血管生成 缺氧 PI3k/AkT信号通路 内皮细胞迁移
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miR-144-3p靶向CaMKK2调控PI3K/PDK1/Akt信号通路抑制卵巢癌血管生成的机制
9
作者 陈珍 叶丽 《现代实用医学》 2025年第9期889-894,F0003,共7页
目的 探讨miR-144-3p靶向钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2(CaMKK2)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1 (PDK1)/蛋白激酶B (Akt)信号通路抑制卵巢癌血管生成的机制。方法在人卵巢癌细胞OC3中,采用双荧光素酶法检测miR... 目的 探讨miR-144-3p靶向钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2(CaMKK2)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1 (PDK1)/蛋白激酶B (Akt)信号通路抑制卵巢癌血管生成的机制。方法在人卵巢癌细胞OC3中,采用双荧光素酶法检测miR-144-3p与CaMKK2的靶向性。将OC3细胞分为NC组、miR-144-3p组、CaMKK2组和miR-144-3p+CaMKK2组,分别进行miR-144-3p、CaMKK2过表达载体及其阴性对照的共转染,另设置人正常卵巢上皮细胞IOSE80细胞作为对照组、未转染OC3细胞作为正常对照组。CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell和划痕实验检测细胞迁移能力,体外小管形成试验、鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测血管生成情况,Western blot和RT-qPCR检测CaMKK2、PI3K、PDK1、Akt和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白和mRNA表达水平。结果 转染CaMKK2 3'UTR WT+miR-144-3p mimic的相对荧光素酶活性低于转染CaMKK23'UTRWT+miR-NC(P<0.05)。与NC组比较,miR-144-3p组细胞活性、迁移细胞数、划痕愈合率、CAM实验新生血管数降低,小管形成抑制率升高(P<0.05);CaMKK2组细胞活性、迁移细胞数、划痕愈合率、CAM实验新生血管数升高,小管形成抑制率降低(P <0.05);且CaMKK2组细胞活性、迁移细胞数、划痕愈合率、CAM实验新生血管数高于miR-144-3p+CaMKK2组,小管形成抑制率低于miR-144-3p+CaMKK2组(P <0.05)。与对照组比较,正常对照组、NC组、CaMKK2组PI3K、PDK1、Akt、VEGF相对蛋白表达量、mRNA相对升高(P<0.05),miR-144-3p组降低(P <0.05);与正常对照组、NC组比较,miR-144-3p组PI3K、PDK1、Akt、VEGF相对蛋白表达量降低(P <0.05),CaMKK2组升高(P <0.05),且CaMKK2组高于其他各组(P<0.05)。结论 miR-144-3p可靶向CaMKK2调控PI3K/PDK1/Akt信号通路抑制卵巢癌血管生成。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 miR-144-3p 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2 PI3k/PDk1/Akt信号通路 血管生成
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基于VEGFA/VEGFR2-PI3K/AKT信号轴探讨化瘀明目方含药血清抑制高糖及VEGF诱导人视网膜微血管内皮细胞血管新生的分子机制 被引量:4
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作者 马孝秋 左韬 +2 位作者 马贤德 赵磊 李进 《中药新药与临床药理》 北大核心 2025年第2期197-205,共9页
目的基于VEGFA/VEGFR2-PI3K/AKT信号轴探讨化瘀明目方含药血清抑制高糖及血管内皮生长因子(VEGF)诱导人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)血管新生的分子机制。方法制备化瘀明目方含药血清;采用CCK-8法筛选VEGF诱导HRMECs的最佳浓度及干预... 目的基于VEGFA/VEGFR2-PI3K/AKT信号轴探讨化瘀明目方含药血清抑制高糖及血管内皮生长因子(VEGF)诱导人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)血管新生的分子机制。方法制备化瘀明目方含药血清;采用CCK-8法筛选VEGF诱导HRMECs的最佳浓度及干预时间。分别复制高糖、VEGF诱导的HRMECs功能紊乱模型,分组及干预:(1)空白组:ECM完全培养基+10%空白血清;(2)高糖模型组:含糖25 mmol·L^(-1)的ECM完全培养基+10%空白血清;(3)高糖干预组:含糖25 mmol·L^(-1)的ECM完全培养基+10%含药血清;(4)VEGF模型组:ECM完全培养基+10 ng·mL^(-1)VEGF+10%空白血清;(5)VEGF干预组:ECM完全培养基+10 ng·mL^(-1)VEGF+10%含药血清。采用划痕实验检测细胞迁移能力;管腔形成实验检测细胞成管能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫细胞化学法、Western Blot法及RT-PCR法检测细胞血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、胱天蛋白酶9(Caspase-9)、Bcl-2相关死亡促进因子(Bad)蛋白及mRNA表达水平。结果采用10 ng·mL^(-1)VEGF干预24 h为条件复制HRMECs功能紊乱模型。与空白组比较,高糖模型组与VEGF模型组HRMECs细胞迁移距离、血管形成数均显著增加(P<0.01),VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.01),Caspase-9、Bad蛋白及mRNA表达水平均无明显变化(P>0.05)。与高糖模型组和VEGF模型组比较,化瘀明目方含药血清干预后,HRMECs细胞迁移距离显著缩短(P<0.01),血管形成数显著减少(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率显著上升(P<0.05,P<0.01),VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Caspase-9、Bad蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论化瘀明目方可能通过抑制VEGFA/VEGFR2-PI3K/AKT信号轴,上调促凋亡基因Caspase-9、Bad表达,发挥抗高糖及VEGF诱导的促视网膜血管新生效应。 展开更多
关键词 化瘀明目方 糖尿病视网膜病变 人视网膜微血管内皮细胞 VEGFA/VEGFR2-PI3k/AkT信号轴 血管新生
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右归丸经Serpina3k调控Keap1/Nrf2信号通路抑制氧化应激诱发的颗粒细胞损伤 被引量:1
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作者 焦蓓蓓 栗田 +4 位作者 周蓓蓓 陈思 陈玥 张健 王佩娟 《中国中药杂志》 北大核心 2025年第4期1111-1120,共10页
为探究右归丸(YGP)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人卵巢颗粒细胞株(KGN)氧化损伤的作用及机制。通过超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱(UHPLC-QE-MS)分析给予YGP低、高剂量后SD大鼠的入血成分,选择右归丸高剂量组含药血清作为细胞... 为探究右归丸(YGP)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人卵巢颗粒细胞株(KGN)氧化损伤的作用及机制。通过超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱(UHPLC-QE-MS)分析给予YGP低、高剂量后SD大鼠的入血成分,选择右归丸高剂量组含药血清作为细胞模型的药物。采用200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)刺激KGN,构建氧化损伤模型。将其分为正常组,模型组,YGP低、中、高剂量组,在沉默或过表达Serpina3k基础上进一步验证药效。采用TUNEL染色检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测KGN分泌雌二醇(E_(2))、17β-E_(2)水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测激肽释放酶结合蛋白(Serpina3k)及Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)信号通路相关蛋白的表达。结果显示,与模型组比较,右归丸各剂量不仅可显著降低颗粒细胞凋亡,上调E_(2)、17β-E_(2)分泌水平,还可显著上调Serpina3k/Nrf2通路。进一步研究发现,Serpina3k过表达后不仅可增强YGP的治疗效应,还增加Nrf2的表达,抑制Keap1的表达;而干扰Serpina3k后,YGP的治疗作用被部分逆转,同时YGP对Keap1/Nrf2信号通路的调控作用也被部分削弱。结果表明,YGP改善氧化应激诱导颗粒细胞损伤的机制可能与其上调Serpina3k表达,影响Keap1/Nrf2信号通路的传导有关。该研究揭示了YGP对颗粒细胞保护的作用机制,为其临床应用提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 右归丸 卵巢颗粒细胞 氧化应激 Serpina3k keap1/Nrf2信号通路
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香草醛对LPS诱导的BV2细胞TREM2/PI3K表达的影响 被引量:1
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作者 苏琳琳 梁冰 +1 位作者 袁庆 胡利民 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第6期1199-1200,共2页
川芎为伞形科植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的干燥根茎,具有活血行气,祛风止痛的功效[1]。香草醛(vanillin)作为川芎的主要活性成分,具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌等特性[2]。骨髓细胞表达的触发受体2(triggering receptor exp... 川芎为伞形科植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的干燥根茎,具有活血行气,祛风止痛的功效[1]。香草醛(vanillin)作为川芎的主要活性成分,具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌等特性[2]。骨髓细胞表达的触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells-2,TREM2)作为小胶质细胞上特异性蛋白,参与小胶质细胞增殖、存活、迁移和吞噬作用,调控小胶质细胞从M1型向M2型转变,从而减少炎症反应[3]。TREM2可以通过激活磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路影响小胶质细胞的吞噬和炎症反应[4]。本实验通过LPS诱导的BV2细胞炎症模型,观察香草醛对BV2细胞释放的一氧化氮(nitric oxide,NO)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平以及TREM2/PI3K的表达的影响,探讨香草醛是否通过调控TREM2/PI3K信号通路发挥抗炎作用,为香草醛的研究和川芎的临床应用提供依据。 展开更多
关键词 香草醛 BV2 LPS NO TNF-α IL-6 IL-1Β TREM2/PI3k
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环氧二十碳三烯酸通过调节PI3K/AKT信号通路改善HepG2细胞胰岛素抵抗
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作者 金君健 斯日古楞 +4 位作者 李子怡 牛雅如 于雯 贺星川 么宏强 《动物医学进展》 北大核心 2025年第8期71-75,共5页
旨在探讨环氧二十碳三烯酸(EETs)是否可改善由HepG2细胞模拟的小鼠2型糖尿病模型中的胰岛素抵抗。用HepG2细胞建立胰岛素抵抗(IR)模型,用CCK-8法测定细胞活力,用葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖消耗量,通过Western blot检测PI3K/... 旨在探讨环氧二十碳三烯酸(EETs)是否可改善由HepG2细胞模拟的小鼠2型糖尿病模型中的胰岛素抵抗。用HepG2细胞建立胰岛素抵抗(IR)模型,用CCK-8法测定细胞活力,用葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖消耗量,通过Western blot检测PI3K/AKT及其磷酸化蛋白表达。结果表明,当胰岛素浓度为0.1μmol/L时,HepG2细胞的葡萄糖消耗量最低,产生的胰岛素抵抗程度最高;EETs、TPPU干预后,IR-HepG2细胞的葡萄糖消耗量均有所提升,表明可以有效改善IR-HepG2细胞的胰岛素抵抗程度;测定发现IR-HepG2细胞中的p-PIK/PI3K和p-AKT/AKT比值显著降低,而EETs组和TPPU组的PIK/PI3K和p-AKT/AKT比值显著上升,表明EETs能够通过激活PI3K/AKT信号通路改善胰岛素抵抗。 展开更多
关键词 环氧二十碳三烯酸(EETs) HEPG2细胞 胰岛素抵抗 磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3k) 蛋白激酶B(AkT)
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H3K9me2修饰在银杏叶片对燃煤污染型砷中毒患者DNA损伤修复中的作用
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作者 明倩 刘颖 +5 位作者 敖春艳 刘艳 李昌哲 于春 赵华 李军 《贵州医科大学学报》 2025年第6期802-810,共9页
目的探讨组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(H3K9me2)在银杏叶片对燃煤污染型砷中毒患者DNA损伤修复影响中的作用。方法在贵州省筛选出102名地砷病患者,银杏叶片规范干预3个月,于干预前后采集患者外周血样;单细胞凝胶电泳(single cell gel el... 目的探讨组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(H3K9me2)在银杏叶片对燃煤污染型砷中毒患者DNA损伤修复影响中的作用。方法在贵州省筛选出102名地砷病患者,银杏叶片规范干预3个月,于干预前后采集患者外周血样;单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)法检测外周血细胞DNA损伤水平,实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reacton,qPCR)法检测外周血单核细胞组蛋白甲基转移酶G9a、去甲基化酶JHDM2A与DNA损伤修复基因mRNA水平,酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测外周血单核细胞H3K9me2水平,分析不同程度组地砷病患者DNA损伤、DNA损伤修复基因转录、G9a与JHDM2A基因转录及H3K9me2修饰水平,并探究银杏叶片干预后上述指标变化情况及其关系。结果地砷病患者外周血细胞DNA损伤表现随地砷病程度增加而加重;与轻度组及中度组相比,重度组地砷病患者彗星尾矩(Olivetailmoment,OTM)有所升高;与轻度组相比,重度组地砷病患者尾部DNA百分含量(TailDNA%)有所升高,(P<0.05);与轻度组相比,重度组地砷病患者DNA损伤修复基因MGMT、MPG、XRCC1 mRNA转录水平有所降低,中度组与重度组地砷病患者DNA损伤修复基因XPC mRNA转录水平有所降低(P<0.05);与轻度组相比,中度组与重度组地砷病患者H3K9me2修饰水平与G9a、JHDM2A mRNA转录水平均有所降低(P<0.05);与干预前相比,银杏叶片干预后,地砷病患者外周血细胞的细胞核较为清晰、核荧光强度增强、拖尾情况有所改善,患者OTM、TailDNA%明显降低(P<0.05),DNA损伤修复基因MGMT、PAPR1、MPG、XRCC1、XPC、DDB2与G9a基因mRNA水平、H3K9me2水平升高(P<0.05);银杏叶片干预前后,地砷病患者H3K9me2水平变化值与G9a、DNA损伤修复基因MGMT、MPG、DDB2基因mRNA水平变化值呈正相关关系(P<0.05),DNA损伤修复基因MGMT、XRCC1 mRNA水平变化值与OTM、TailDNA%变化值呈负相关关系(P<0.05)。结论燃煤砷暴露可诱导地砷病患者DNA损伤、抑制DNA损伤修复基因MGMT、PARP1、MPG、XRCC1、XPC、DDB2 mRNA转录,抑制组蛋白甲基转移酶G9a mRNA转录及组蛋白H3K9me2总体修饰水平,银杏叶片可能通过增加组蛋白甲基转移酶G9a转录提高H3K9me2修饰水平与DNA损伤修复基因MGMT转录,从而改善燃煤砷暴露所致DNA损伤。 展开更多
关键词 燃煤污染 砷中毒 H3k9me2 DNA损伤修复 银杏叶
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K-OMS-2/g-C_(3)N_(4)复合材料光催化还原CO_(2)
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作者 廖浩宏 邹伟欣 董林 《环境化学》 北大核心 2025年第9期2365-2372,共8页
为了解决大气中二氧化碳(CO_(2))含量的急剧增长带来日益突出的环境问题,利用半导体光催化技术实现二氧化碳的转化是一种更为环境友好的途径.本工作制备了K-OMS-2/g-C_(3)N_(4)复合光催化剂并首次应用于光催化CO_(2)还原反应.通过水热... 为了解决大气中二氧化碳(CO_(2))含量的急剧增长带来日益突出的环境问题,利用半导体光催化技术实现二氧化碳的转化是一种更为环境友好的途径.本工作制备了K-OMS-2/g-C_(3)N_(4)复合光催化剂并首次应用于光催化CO_(2)还原反应.通过水热法成功实现了棒状K-OMS-2在片层状g-C_(3)N_(4)上的原位生成,其具有更高的低价锰比例及更丰富的表面羟基氧物种,同时在光催化CO_(2)还原反应中的性能明显提升.通过分析能带结构,推测Z型异质结的形成,有利于光照下光生载流子的高效分离,产生的光电子还原CO_(2)转化为燃料,本工作为温室气体CO_(2)的资源化利用提供新思路. 展开更多
关键词 光催化 CO_(2) 还原 OMS-2 g-C_(3)N_(4) 异质结 反应机理
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MSH2通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控胃癌细胞的恶性生物学行为
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作者 刘钟歆 李华 +1 位作者 黄朝康 周阳 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第6期641-648,共8页
目的:探究错配修复蛋白2(MSH2)在胃癌中表达和其与患者临床特征的关系及其对胃癌细胞恶性生物学行为的作用及机制。方法:收集2020年5月至2022年7月期间在邢台市人民医院收治的40例胃癌患者的癌组织和配对癌旁组织及患者的一般临床资料... 目的:探究错配修复蛋白2(MSH2)在胃癌中表达和其与患者临床特征的关系及其对胃癌细胞恶性生物学行为的作用及机制。方法:收集2020年5月至2022年7月期间在邢台市人民医院收治的40例胃癌患者的癌组织和配对癌旁组织及患者的一般临床资料。常规培养正常人胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞AGS、MKN45和BGC-823,用转染试剂分别将sh-NC、shMSH2-1和shMSH2-2慢病毒载体转染至AGS和MKN45细胞中,实验分为sh-NC、shMSH2-1和shMSH2-2组。CCK-8法、克隆形成实验、EdU染色、Transwell小室实验分别检测各组AGS和MKN45细胞的增殖、迁移和侵袭能力。构建裸鼠MKN45细胞移植瘤模型,观察敲减MSH2对移植瘤生长的影响。WB法检测各组细胞中及移植瘤组织中MSH2、PI3K/AKT/mTOR通路、上皮间质转化相关蛋白的表达。结果:MSH2在胃癌组织和细胞中呈高表达且与淋巴结转移、T分期进展及组织学分化不良均有关联(均P<0.001);在AGS和MKN45细胞中成功地敲减了MSH2的表达(P<0.001);敲减MSH2均能显著抑制AGS和MKN45细胞的活力、EdU染色阳性率、克隆形成能力、迁移及侵袭能力和移植瘤的生长(均P<0.001);均能显著抑制AGS和MKN45细胞和MKN45移植瘤组织中MSH2蛋白、PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白、N-cadherin蛋白的表达(均P<0.001),促进E-cadherin蛋白的表达(P<0.001)。结论:MSH2在胃癌组织和细胞中呈高表达且与淋巴结转移、T分期进展及组织学分化不良有关联,敲减MSH2表达通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路调控AGS和MKN45细胞的恶性生物学行为,MSH2可能是胃癌治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 胃癌 错配修复蛋白2 肿瘤生长 PI3k/AkT/mTOR信号通路
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当归酮通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制子宫内膜癌细胞RL95-2自噬
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作者 陈西 欧阳紫婷 +3 位作者 罗岚 沈艳 宁东红 梁煦 《中南医学科学杂志》 2025年第2期217-220,共4页
目的 探讨当归酮抑制子宫内膜癌细胞RL95-2自噬的作用机制。方法 设置不同浓度当归酮(0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L)作用于RL95-2细胞,筛选最佳作用浓度。细胞实验分为对照组(DMSO培养24 h)、当归酮组(20.0μmol/L当归酮原液培养24 h... 目的 探讨当归酮抑制子宫内膜癌细胞RL95-2自噬的作用机制。方法 设置不同浓度当归酮(0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L)作用于RL95-2细胞,筛选最佳作用浓度。细胞实验分为对照组(DMSO培养24 h)、当归酮组(20.0μmol/L当归酮原液培养24 h)、当归酮+胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组[20.0μmol/L当归酮和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)激活剂IGF-1共同培养24 h]。采用透射电子显微镜观察自噬体的形成,免疫荧光显微镜检测各组微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平。Western blotting检测各组信号通路关键蛋白PI3K-p85、蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化蛋白水平。结果 当归酮最佳作用浓度为20.0μmol/L。随着当归酮处理时间的递增,细胞内自噬体数量及LC3针点数逐渐增加(P<0.05),磷酸化(p)-Akt、p-mTOR、PI3K-p85表达水平逐渐降低(P<0.05)。与对照组相比,当归酮组细胞自噬体数量增加,LC3蛋白表达水平升高(P<0.05);与当归酮组相比,当归酮+IGF-1组细胞自噬体数量减少,LC3蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 当归酮可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制人子宫内膜癌细胞RL95-2的自噬。 展开更多
关键词 当归酮 PI3k/AkT/MTOR 子宫内膜癌 自噬 RL95-2细胞
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低温等离子体调节H3K4me2刺激灵芝生长和灵芝酸积累
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作者 张莹 黄青 《生物学杂志》 北大核心 2025年第3期1-8,共8页
研究从表观遗传学角度探讨纳秒脉冲介质阻挡放电等离子体(NS-DBD)刺激灵芝生长和灵芝酸生物合成机制。通过高效液相色谱法检测发现,NS-DBD可以促进灵芝酸的生物合成。生化指标检测发现,NS-DBD诱导了灵芝胞内活性氧的积累,使总超氧化物... 研究从表观遗传学角度探讨纳秒脉冲介质阻挡放电等离子体(NS-DBD)刺激灵芝生长和灵芝酸生物合成机制。通过高效液相色谱法检测发现,NS-DBD可以促进灵芝酸的生物合成。生化指标检测发现,NS-DBD诱导了灵芝胞内活性氧的积累,使总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶等抗氧化酶的活性升高。同时伴有灵芝酸生物合成相关基因转录水平的上调。免疫荧光和染色质免疫沉淀测序方法证实,NS-DBD处理后,灵芝酸合成通路上的基因hmgr、pmvk、mvd、sqs和ls的H3K4me2修饰水平都发生了显著变化。其中,基因hmgr、pmvk、mvd和ls的H3K4me2修饰主要分布于基因的外显子区域,而基因sqs的H3K4me2修饰则分布于上游2 kb和外显子区域。研究表明,NS-DBD通过刺激ROS积累调节灵芝酸合成通路上一些关键基因的H3K4me2修饰水平,进而调节灵芝的生长和灵芝酸的合成。 展开更多
关键词 低温等离子体 介质阻挡放电(DBD) 灵芝 灵芝酸 刺激效应 H3k4me2
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镰形棘豆提取物调节PI3K/AKT/Nrf2通路改善高糖诱导足细胞氧化损伤的作用及机制研究
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作者 任梦涵 姚建莉 +1 位作者 杨丽霞 舒畅 《中国临床药理学与治疗学》 北大核心 2025年第10期1361-1373,共13页
目的:通过PI3K/AKT/Nrf2通路探讨镰形棘豆提取物含药血清对高糖诱导的足细胞氧化应激损伤的作用。方法:体外培养大鼠肾足细胞,筛选D-葡萄糖造模浓度和时间以及镰形棘豆提取物含药血清最佳给药浓度和时间;将细胞分为正常组、高糖组、高糖... 目的:通过PI3K/AKT/Nrf2通路探讨镰形棘豆提取物含药血清对高糖诱导的足细胞氧化应激损伤的作用。方法:体外培养大鼠肾足细胞,筛选D-葡萄糖造模浓度和时间以及镰形棘豆提取物含药血清最佳给药浓度和时间;将细胞分为正常组、高糖组、高糖+空白血清组、镰形棘豆组、抑制剂组、镰形棘豆+抑制剂组,采用罗丹明染色及电镜观察足细胞形态、病理学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫荧光及荧光探针法分别检测细胞p-AKT荧光表达和ROS水平,ELISA检测细胞上清液中MDA、NO、SOD、T-AOC含量,Western blot检测细胞p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白表达,RT-qPCR检测细胞Nrf2、HO-1、GCLM、SODmRNA表达。结果:筛选出45mmol/LD-葡萄糖诱导48h为最佳造模条件,含药血清1倍稀释及48 h为最佳给药浓度和时间。与正常组比较,高糖组细胞足突广泛融合、相互粘连,凋亡率、迁移能力和ROS水平均升高(P<0.01),p-AKT荧光表达降低(P<0.01),MDA、NO含量增加,SOD、T-AOC含量显著降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白表达及Nrf2、HO-1、GCLM、SOD mRNA表达均降低(P<0.01)。与高糖组比较,各给药组细胞足突融合、相互粘连情况有不同程度的改善,凋亡率、迁移能力和ROS水平均降低(P<0.05,P<0.01),p-AKT荧光表达增加(P<0.01),MDA、NO含量下降,SOD、T-AOC含量升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白及Nrf2、HO-1、GCLM、SOD mRNA表达均升高(P<0.05,P<0.01),而抑制剂组细胞ROS水平升高(P<0.01),p-AKT荧光表达降低(P<0.05),NO含量升高,T-AOC含量降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白及HO-1、GCLM、SODmRNA表达降低(P<0.05,P<0.01)。与镰形棘豆组比较,镰形棘豆组+抑制剂组细胞凋亡率、迁移能力和ROS水平均升高(P<0.05,P<0.01),p-AKT荧光表达降低(P<0.01),MDA、NO含量增加,SOD、T-AOC含量降低(P<0.05,P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、Nrf2蛋白及HO-1、GCLM、SODmRNA表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:镰形棘豆提取物可能通过激活PI3K/AKT/Nrf2信号通路,从而改善高糖诱导的足细胞形态、结构和功能的改变,抑制氧化应激反应,达到保护足细胞的作用。 展开更多
关键词 镰形棘豆提取物 糖尿病肾脏病 足细胞 氧化应激 PI3k/AkT/Nrf2
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人参皂苷Rg_(2)调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对急性心肌梗死后心脏保护作用 被引量:3
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作者 张希贤 孙俊杰 刘清雅 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第10期185-193,共9页
目的:探讨人参皂苷Rg_(2)调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路对大鼠急性心肌梗死后心脏的保护作用。方法:(1)构建缺血缺氧微环境心肌细胞体外模型,采用人参皂苷Rg_(2)(1、2、3 mg·L^(-1))... 目的:探讨人参皂苷Rg_(2)调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路对大鼠急性心肌梗死后心脏的保护作用。方法:(1)构建缺血缺氧微环境心肌细胞体外模型,采用人参皂苷Rg_(2)(1、2、3 mg·L^(-1))预处理心肌细胞4 h后,置于RPMI 1640无血清培养基并在94%N2、5%CO_(2)、1%O_(2)的三气培养箱中培养24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测心肌细胞存活率;采用分光光度法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。(2)采用Olivette方法结合前期研究建立急性心肌梗死大鼠模型,术后存活24 h的大鼠随机分为模型组、人参皂苷Rg_(2)高、中、低剂量组。正常组和模型组给予生理盐水,人参皂苷Rg_(2)组给予8、4、2 mg·kg^(-1)灌胃,1次/d,连续3 d。检测大鼠心肌组织SOD、MDA、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;原位末端标记法(TUNEL)检测心脏组织中心肌细胞凋亡,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测各组大鼠心肌组织中PI3K、Akt、mTOR、p62、核转录因子-κB(NF-κB)p65、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ的mRNA及蛋白表达情况;采用光镜观察梗死边缘区病理变化。结果:(1)与正常组比较,模型组心肌细胞存活率、SOD及GSH-Px活性明显降低,LDH活性和MDA含量明显升高(P<0.05)。与模型组比较,人参皂苷Rg_(2)干预后各组细胞存活率、SOD及GSH-Px活性均明显升高,LDH活性和MDA含量明显降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。(2)与正常组比较,模型组大鼠心肌组织SOD、GSH-Px活性明显降低,MDA含量明显升高(P<0.05)。与模型组比较,人参皂苷Rg_(2)各剂量组心肌组织SOD及GSH-Px活性明显升高,MDA含量明显降低(P<0.05),呈剂量依赖性;与正常组比较,模型组大鼠心肌组织中PI3K、Akt、mTOR、p62及LC3Ⅱ/Ⅰ的mRNA和蛋白表达明显降低,NF-κB p65的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,人参皂苷Rg_(2)各剂量组PI3K、mTOR、p62、Akt的mRNA和蛋白表达明显升高,NF-κB p65的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。人参皂苷Rg_(2)低、中剂量组LC3Ⅱ/ⅠmRNA和蛋白表达有升高趋势,但差异无统计学意义;人参皂苷Rg_(2)高剂量组LC3Ⅱ/ⅠmRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。病理显示,正常组大鼠心肌细胞结构正常。模型组可见大片的梗死灶及变性坏死,经人参皂苷Rg_(2)干预后,心肌梗死灶、变性坏死的程度较模型组减轻,呈剂量依赖性。结论:人参皂苷Rg_(2)可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥大鼠急性心肌梗死后心脏的保护作用,且呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 人参皂苷Rg_(2) 心肌梗死 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3k/Akt/mTOR)信号通路 自噬 心肌重塑 心脏保护
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