Thermobifida fusca葡萄糖异构酶在枯草杆菌中的表达 被引量：2

1

作者 邓辉 陈存武 +1 位作者 孙传伯 韦传宝 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期31-35,共5页

为研究葡萄糖异构酶(GIase)在枯草杆菌中的表达效果,通过PCR扩增Thermobifida fusca GIase基因xyl A,分别克隆该基因序列到不同诱导表达方式的穿梭载体:p HCMC04、p MA09、p AL12,并转化枯草杆菌WB600。结果表明,含重组质粒p MA09-xyl ... 为研究葡萄糖异构酶(GIase)在枯草杆菌中的表达效果,通过PCR扩增Thermobifida fusca GIase基因xyl A,分别克隆该基因序列到不同诱导表达方式的穿梭载体:p HCMC04、p MA09、p AL12,并转化枯草杆菌WB600。结果表明,含重组质粒p MA09-xyl A的枯草杆菌产酶最优,达到1.8 U/m L。对该重组枯草杆菌发酵产酶条件进行优化,以TB为发酵培养基,初始p H 7.0,温度为30℃时,摇瓶培养24 h后,GIase的产量达到5.6 U/m L。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 thermobifida fusca葡萄糖异构酶 枯草杆菌中表达 发酵优化

在线阅读 下载PDF 职称材料

Thermobifida fusca海藻糖合成酶的定点突变及其动力学性质研究 被引量：2

2

作者 王青艳 陈发忠 +3 位作者 黄福宝 韦传东 韦宇拓 黄日波 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2007年第2期115-119,共5页

对Thermobifida fusca海藻糖合成酶(TreS)保守区域的氨基酸残基I224、N242、Q333、E352和N415进行定点突变,结果表明:位点I224、N242、N415突变后酶的活力与野生型TreS相近,E352位点突变后酶的比活力提高为野生型TreS的1.25倍。突变酶... 对Thermobifida fusca海藻糖合成酶(TreS)保守区域的氨基酸残基I224、N242、Q333、E352和N415进行定点突变,结果表明:位点I224、N242、N415突变后酶的活力与野生型TreS相近,E352位点突变后酶的比活力提高为野生型TreS的1.25倍。突变酶的最适温度、pH、Km和Kcat没有明显变化;突变Q333R则使TreS丧失了酶活力。 展开更多

关键词 thermobifida fusca 海藻糖合成酶 定点突变

在线阅读 下载PDF 职称材料

Thermobifida fusca麦芽三糖淀粉酶的重组表达及其在麦芽三糖制备中的应用 被引量：2

3

作者 胡凡 宿玲恰 吴敬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期23-30,共8页

麦芽三糖淀粉酶以淀粉或麦芽糊精为原料,可生产麦芽三糖,在食品、饮料等行业具有广泛的应用前景。实验将Thermobifida fusca NTU22来源的麦芽三糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌WS11中进行重组表达,并进行酶学性质分析,重组酶的最适温度和pH分别... 麦芽三糖淀粉酶以淀粉或麦芽糊精为原料,可生产麦芽三糖,在食品、饮料等行业具有广泛的应用前景。实验将Thermobifida fusca NTU22来源的麦芽三糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌WS11中进行重组表达,并进行酶学性质分析,重组酶的最适温度和pH分别是55℃和6.0。在此基础上探究了重组酶作用于麦芽糊精生产麦芽三糖的最佳条件。结果表明,以15%浓度的麦芽糊精(DE 5-7)作为底物时,酶转化的最佳条件是温度55℃、pH 5.5、加酶量60 U/g(底物)、普鲁兰酶加酶量32 U/g(底物)、反应时间11 h,此时得到麦芽三糖转化率44.4%。该研究为工业制备麦芽三糖提供了理论依据。 展开更多

关键词 麦芽三糖淀粉酶 thermobifida fusca 枯草芽孢杆菌 麦芽糊精 麦芽三糖

在线阅读 下载PDF 职称材料

褐色喜热裂孢菌Thermobifida fusca产麦芽糖α-淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究 被引量：1

4

作者 薛蓓 王治宾 +1 位作者 刘振东 韦宇拓 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第24期214-218,231,共6页

以T.fusca基因组DNA为模板,PCR分别扩增不包括和包括其基因前段信号肽的产麦芽糖淀粉酶的基因片段tfa和sptfa,并克隆至表达载体pSE380上,获得重组质粒pSE380-tfa和pSE380-sptfa,以大肠杆菌JM109为宿主细胞大量表达融合蛋白,利用金属镍... 以T.fusca基因组DNA为模板,PCR分别扩增不包括和包括其基因前段信号肽的产麦芽糖淀粉酶的基因片段tfa和sptfa,并克隆至表达载体pSE380上,获得重组质粒pSE380-tfa和pSE380-sptfa,以大肠杆菌JM109为宿主细胞大量表达融合蛋白,利用金属镍亲和层析对菌株JM109/pSE380-tfa表达的α-淀粉酶进行纯化,SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为64ku,K m值为1.305mg/mL,最适反应温度为60℃,最适pH为7.0;检测到菌株JM109/pSE380-sptfa的培养基上清有相当一部分酶活。本研究麦芽糖α-淀粉酶与可溶性淀粉反应,经HPLC检测产物均为麦芽三糖、麦芽糖和葡萄糖的混合物。因此麦芽糖α-淀粉酶在生产高麦芽糖浆上起到了一定的作用。 展开更多

关键词 褐色喜热裂孢菌 麦芽糖α-淀粉酶基因 信号肽 克隆表达 麦芽糖 酶学性质

原文传递

Thermobifida fusca海藻糖合成酶基因的克隆表达及发酵优化 被引量：4

5

作者 罗锋 段绪果 +1 位作者 宿玲恰 吴敬 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期93-99,共7页

将来源于嗜热单孢菌(Thermobifida fusca)的海藻糖合成酶基因进行克隆表达,构建重组菌E.coli BL 21(DE3){pET-24a(+)/Tres}。并对基因工程菌的发酵产酶条件进行优化,得到最优培养基成分为:甘油12 g/L,酵母粉24 g/L,蛋白胨12g/L,磷酸盐浓... 将来源于嗜热单孢菌(Thermobifida fusca)的海藻糖合成酶基因进行克隆表达,构建重组菌E.coli BL 21(DE3){pET-24a(+)/Tres}。并对基因工程菌的发酵产酶条件进行优化,得到最优培养基成分为:甘油12 g/L,酵母粉24 g/L,蛋白胨12g/L,磷酸盐浓度60mmol/L,Zn2+2mmol/L。最佳培养条件为:装液量20 ml(250 ml摇瓶),发酵2 h后25℃诱导并添加终浓度为0.4 mmol/L的IPTG。优化后的最终发酵酶活达到28.6 U/ml,为未优化前的3.4倍,是目前国内报道大肠杆菌摇瓶发酵产海藻糖合成酶的最高表达水平,为该酶的工业化生产奠定了基础。 展开更多

关键词 嗜热单孢菌 海藻糖合成酶 重组大肠杆菌 发酵优化

原文传递

Thermobi fida fusca WSH03-11突变株合成角质酶的发酵条件 被引量：4

6

作者 张守亮 陈坚 +1 位作者 华兆哲 堵国成 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期44-48,共5页

以放线菌Thermobifida fuscaWSH03-11一高产角质酶突变株为出发菌株,在摇瓶中考察了碳、氮源等条件以及接种量、装液量和初始pH值等环境条件对突变株细胞生长和产角质酶的影响。通过优化发酵条件,突变菌株的角质酶酶活达10.1 U/mL,提高... 以放线菌Thermobifida fuscaWSH03-11一高产角质酶突变株为出发菌株,在摇瓶中考察了碳、氮源等条件以及接种量、装液量和初始pH值等环境条件对突变株细胞生长和产角质酶的影响。通过优化发酵条件,突变菌株的角质酶酶活达10.1 U/mL,提高了15%。在此基础上,在5 L发酵罐中进一步研究了碳源流加对突变株发酵产酶的影响,结果发现,分别在0、24、48 h添加1%乙醇,角质酶酶活达到16.4 U/mL,细胞干重(DCW)达到3.7 g/L,而且发酵时间也由110 h缩短到50 h。 展开更多

关键词 thermobifida fusca 角质酶 发酵优化 流加

在线阅读 下载PDF 职称材料

一株产耐热纤维素酶菌株的筛选及酶学性质 被引量：14

7

作者 韩铭 袁月祥 +3 位作者 闫志英 贺蓉娜 刘晓风 廖银章 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期75-79,共5页

采用纤维素刚果红平板法从大田蘑菇种植场建堆的稻草样中分离得到了1株能产具有较好温度耐受性和pH稳定性的纤维素酶的放线菌DY3.综合形态、生理生化特征以及16S rDNA序列分析,将其初步鉴定为嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca).对该菌所... 采用纤维素刚果红平板法从大田蘑菇种植场建堆的稻草样中分离得到了1株能产具有较好温度耐受性和pH稳定性的纤维素酶的放线菌DY3.综合形态、生理生化特征以及16S rDNA序列分析,将其初步鉴定为嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca).对该菌所产纤维素酶的性质研究表明:最适催化温度为65℃,在70℃保温60 min后仍有75%以上的活力;最适催化pH为7.5,在pH 5.5～10.0之间该酶的稳定性较好,pH 10.0的条件下仍有80%的活力;最适作用底物是羧甲基纤维素钠.研究可为木质纤维素的生物预处理提供一定参考价值. 展开更多

关键词 耐热纤维素酶 菌株筛选 放线菌 系统发育分析 裂孢菌属 酶学性质

原文传递

酿酒酵母中的嗜热细菌木糖异构酶活性表达及木糖代谢研究 被引量：5

8

作者 王青艳 杨登峰 +2 位作者 孙靓 陆雁 黄日波 《广西科学》 CAS 2009年第4期446-450,共5页

将来自嗜热放线细菌Thermobif ida f usca的木糖异构酶(xylose isomerase,XI)基因xylA,连接于酵母表达载体pYES2的半乳糖诱导启动子(PGAL)下,得到重组质粒pYES2-xylA,用其转化酵母菌INVSc1,测定重组酵母菌株INVSc1-xylA的木糖异构酶活性... 将来自嗜热放线细菌Thermobif ida f usca的木糖异构酶(xylose isomerase,XI)基因xylA,连接于酵母表达载体pYES2的半乳糖诱导启动子(PGAL)下,得到重组质粒pYES2-xylA,用其转化酵母菌INVSc1,测定重组酵母菌株INVSc1-xylA的木糖异构酶活性,并对重组酵母菌株进行木糖葡萄糖共发酵试验,探讨在酿酒酵母中建立新的生产乙醇木糖代射途径。结果木糖异构酶在75℃,pH值6.8的酶活力最高,在酿酒酵母中成功地获得活性表达,并且SDS-PAGE电泳有明显的特异性表达产物带,单体分子量为43kD。INVSc1-xylA在木糖葡萄糖共发酵实验中消耗木糖和产生乙醇分别比对照菌提高53.8%和36%,提高了其生产乙醇的能力。 展开更多

关键词 木糖代谢 木糖异构酶 嗜热菌放线菌 酿酒酵母

在线阅读 下载PDF 职称材料

共表达谷氨酰-tRNA还原酶增强染料脱色过氧化物酶在大肠杆菌中的表达活性 被引量：1

9

作者 顾鹏帅 潘梅 +1 位作者 丁亮亮 唐蕾 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期45-50,共6页

染料脱色过氧化物酶(dye-decoloorizing peroxidase,DyP)属于以血红素为辅基的新型过氧化物酶类,常因缺乏辅因子而导致催化活性低。将来源于褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的染料脱色过氧化物酶基因(TfuDyP)与大肠杆菌谷氨酰-tRNA... 染料脱色过氧化物酶(dye-decoloorizing peroxidase,DyP)属于以血红素为辅基的新型过氧化物酶类,常因缺乏辅因子而导致催化活性低。将来源于褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的染料脱色过氧化物酶基因(TfuDyP)与大肠杆菌谷氨酰-tRNA还原酶基因(hemA),构建重组质粒phemA-DyP,转化至E.coli BL21中进行共表达。分别以2,2-联氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和顽固性染料活性蓝19(RB19)、溴酚蓝、溴甲酚绿为底物检测TfuDyP的催化活力以及染料脱色效率。结果表明,诱导后的共表达菌株pAD胞内血红素含量为9. 8μmol/L,而单独过表达基因TfuDyP的菌株pD仅为3. 4μmol/L。TfuDyP纯酶的全波长扫描分析表明,在菌株pAD中DyP酶与血红素的结合度相比pD有较大幅度的提升。pAD菌株表达的DyP酶活力较pD菌株提高了110%,酶活力的提高使其在染料脱色应用方面也得到增强。在pAD菌株培养基中分别添加谷氨酸(Glu)、FeCl2使得胞内血红素含量、DyP酶活力和染料脱色效率比未添加时进一步提高。以上结果为TfuDyP的功能开发奠定了基础,同时也为其他血红素依赖性过氧化物酶的研发提供借鉴。 展开更多

关键词 大肠杆菌 褐色嗜热裂孢菌 血红素 染料脱色过氧化物酶 共表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

褐色嗜热裂孢菌脱色过氧化物酶的表达及发酵条件优化 被引量：3

10

作者 朱竹兵 孙亚武 唐蕾 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期23-30,共8页

为了提高来源于褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脱色过氧化物酶(TfuDyP)对蒽醌染料降解能力,将含有目的基因的重组质粒pET-28a(+)-TfuDyP,转化至E.coli BL21进行异源表达,并对重组TfuDyP的发酵条件进行优化,分析酶活与血红素饱和... 为了提高来源于褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脱色过氧化物酶(TfuDyP)对蒽醌染料降解能力,将含有目的基因的重组质粒pET-28a(+)-TfuDyP,转化至E.coli BL21进行异源表达,并对重组TfuDyP的发酵条件进行优化,分析酶活与血红素饱和度之间的关系。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测到分子质量为46 kDa的重组TfuDyP蛋白条带。TfuDyP的最佳诱导条件为:诱导剂(IPTG)浓度0.3 mmol/L,诱导时间14 h,诱导温度30℃,在此条件下,TfuDyP比酶活达到27.9 U/g。氯高铁血红素、5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)、谷氨酸(Glu)、FeCl2、MnCl2均可提高重组TfuDyP的催化活性,酶活的提高与血红素饱和度之间存在一定的正相关性。实验结果可为利用外源添加物提高血红素的饱和度,应用于染料脱色过氧化物酶的工业发酵提供理论依据。 展开更多

关键词 大肠杆菌 脱色过氧化物酶 褐色嗜热裂孢菌 血红素饱和度

在线阅读 下载PDF 职称材料

产几丁质酶褐色喜热裂孢菌的分离鉴定及产酶特性初步研究

11

作者 郭媛 陈娜 《工业微生物》 CAS 2017年第2期7-10,共4页

采用选择性培养基从土壤中分离到1株产几丁质酶的微生物菌株YX,经形态和分子鉴定为褐色喜热裂孢菌(Thermobifida fusca)。进一步在摇瓶中比较了T.fusca YX在纤维二糖、几丁质、或羧甲基纤维素钠为碳源的培养基中的产酶特性,YX菌株在5 L... 采用选择性培养基从土壤中分离到1株产几丁质酶的微生物菌株YX,经形态和分子鉴定为褐色喜热裂孢菌(Thermobifida fusca)。进一步在摇瓶中比较了T.fusca YX在纤维二糖、几丁质、或羧甲基纤维素钠为碳源的培养基中的产酶特性,YX菌株在5 L发酵罐中以几丁质为碳源的培养基发酵到22 h左右时发酵液几丁质酶活即可达到1.7 U/m L。本文首次报道褐色喜热裂孢菌能够产生几丁质酶,具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 褐色喜热裂孢菌 几丁质 几丁质酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

一株PBAT降解菌的分离、鉴定及其降解特性

12

作者 吴春平 柯豪 +3 位作者 贾宪波 钱鑫 张莉敏 陈济琛 《福建农业学报》 2025年第11期1204-1211,共8页

【目的】筛选聚己二酸丁二酯/对苯二甲酸丁二酯[poly(butylene adipate-co-terephthalate),PBAT]高效降解菌,研究其降解性能,为研发PBAT高效降解菌剂提供菌种资源。【方法】以PBAT为唯一碳源,采用富集培养技术从堆肥样品中分离筛选具有... 【目的】筛选聚己二酸丁二酯/对苯二甲酸丁二酯[poly(butylene adipate-co-terephthalate),PBAT]高效降解菌,研究其降解性能,为研发PBAT高效降解菌剂提供菌种资源。【方法】以PBAT为唯一碳源,采用富集培养技术从堆肥样品中分离筛选具有降解能力的菌株。通过形态学观察和16S rRNA序列分析对目标菌株进行鉴定;进一步通过PBAT膜片质量损失、傅里叶变换红外光谱(fourier-transform infrared spectroscopy,FTIR)、扫描电镜(scanning electron microscopy,SEM)、水接触角(water contact angle,WCA)和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)等方法表征其降解效果。【结果】从堆肥环境中筛选出1株PBAT降解菌NF,经鉴定为褐色喜热裂孢菌(Thermobifida fusca)。在55℃条件下于LB培养基中与PBAT薄膜共培养6 d后,PBAT薄膜质量损失率高达97.11%,表现出较强的降解能力。FTIR光谱显示降解后PBAT膜片在羰基区域吸收峰强度显著升高,表明酯键发生断裂;SEM图像清晰显示膜表面出现侵蚀性孔洞和裂纹,结构遭到明显破坏;WCA测试表明材料亲水性显著增强,进一步证实了菌株NF对PBAT的降解效应。【结论】菌株NF在55℃下6 d降解97.11%的PBAT,证实其具有高效降解能力。PBAT降解菌株NF的发现,不仅丰富了PBAT塑料降解菌株资源,也为挖掘高效PBAT降解元件、获得降解酶及解析相关降解途径等奠定了基础。 展开更多

关键词 PBAT 生物降解 褐色喜热裂孢菌

在线阅读 下载PDF 职称材料