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刚地弓形虫TgOTUD6B去泛素化酶活性分析及互作蛋白筛选
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作者 宋凯悦 阳毅敏 +6 位作者 盛楷茵 陈学秋 吴海燕 邓鳗琴 杨怡 马光旭 杜爱芳 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第6期988-998,共11页
去泛素化酶TgOTUD6B影响刚地弓形虫的体外生长,但机制尚未阐明。本研究从TgOTUD6B的去泛素化酶活性及互作蛋白入手,初步探究其功能与机制。首先,采用体外共转染、免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和蛋白质印迹法(Western blot,WB)定性... 去泛素化酶TgOTUD6B影响刚地弓形虫的体外生长,但机制尚未阐明。本研究从TgOTUD6B的去泛素化酶活性及互作蛋白入手,初步探究其功能与机制。首先,采用体外共转染、免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和蛋白质印迹法(Western blot,WB)定性分析重组TgOTUD6B蛋白的去泛素化酶活性,对比分析野生型RHΔku80虫株、TgOTUD6B缺失虫株与回补虫株的泛素化水平;其次,采用IP与液相色谱-质谱法筛选TgOTUD6B的互作蛋白,并通过酵母双杂交和免疫共沉淀技术进行验证;最后,利用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测TgOTUD6B缺失虫株中相关互作蛋白的m RNA转录水平。结果显示:重组TgOTUD6B蛋白能将双泛素分子分解为单泛素小分子;TgOTUD6B缺失虫株泛素化水平显著提高;同时筛选到4个TgOTUD6B互作蛋白,且TgOTUD6B缺失虫株中互作蛋白的mRNA转录水平下降。上述结果为进一步研究TgOTUD6B参与刚地弓形虫体外生长的作用与机制奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 tgotud6b 去泛素化酶 互作蛋白
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