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枇杷醇腈酶基因的克隆及结构分析 被引量：1
1
作者 赵冠杰 白锴凯 +1 位作者 郑允权 郭养浩 《福州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期960-964,共5页
根据已知的杏仁、黑樱桃醇腈酶基因序列设计了一对同源引物,扩增得到枇杷醇腈酶基因的部分序列.分别设计了三条基因特异性引物和一条基因非特异性引物,采用改进的SEFA PCR方法,进行上下游未知序列的扩增,成功地获得包括启动子区、转录... 根据已知的杏仁、黑樱桃醇腈酶基因序列设计了一对同源引物,扩增得到枇杷醇腈酶基因的部分序列.分别设计了三条基因特异性引物和一条基因非特异性引物,采用改进的SEFA PCR方法,进行上下游未知序列的扩增,成功地获得包括启动子区、转录终止子在内的枇杷醇腈酶基因序列,全长5.5 kbp.所得醇腈酶基因含有4个外显子和3个内含子.编码的氨基酸残基序列包括25个氨基酸残基的信号肽和527个氨基酸残基的成熟酶蛋白.采用重叠延伸PCR方法将4个外显子连接获得了连续的醇腈酶编码基因,与pET27b(+)质粒成功构建表达载体,转化Rosetta(DE3).表达的醇腈酶大部分以包涵体形式存在,最终表达的酶活力为1.2 U.mL-1. 展开更多
关键词 醇腈酶 枇杷 SEFAPCR tailpcr 基因克隆
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