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TaNAC14转基因小麦外源目标基因拷贝数及遗传稳定性分析
被引量：
2
1
作者
张立坚
池青
+5 位作者
杜琳颖
郭利建
李玉莲
刘香利
马猛
赵惠贤
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第2期135-143,共9页
外源基因拷贝数是影响转基因植物遗传稳定性及其自身表达水平的重要因素。为了探析TaNAC14基因在小麦生长发育中的生物学功能,本研究通过农杆菌介导的遗传转化法获得了14个T0代TaNAC14转基因小麦植株,采用BASTA溶液涂抹和目标序列PCR检...
外源基因拷贝数是影响转基因植物遗传稳定性及其自身表达水平的重要因素。为了探析TaNAC14基因在小麦生长发育中的生物学功能,本研究通过农杆菌介导的遗传转化法获得了14个T0代TaNAC14转基因小麦植株,采用BASTA溶液涂抹和目标序列PCR检测相结合的方法,从14个转基因小麦植株中鉴定出9个阳性植株。通过TaqMan实时定量PCR方法,以小麦内源单拷贝基因Pinb为内参基因,对9个T0代转基因小麦阳性植株中外源目标基因拷贝数进行检测,结果表明,T0代转基因小麦再生植株中有5株为单拷贝,4株为双拷贝,其中单拷贝插入整合的比率接近55.6%。选取单拷贝转基因植株收获的种子进行种植,根据BASTA溶液涂抹鉴定对T0:1代小麦株系遗传情况进行分析,结果表明目标基因TaNAC14是可遗传的。此外,还对T1代转基因小麦目标基因表达水平进行测定,结果表明,与野生型JW1相比,各转基因小麦植株目的基因TaNAC14表达量均极显著增加。该研究结果为后续TaNAC14基因的功能研究奠定了基础。
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关键词
小麦
tanac14
基因
转基因拷贝数
转基因遗传稳定性
目标基因表达水平
在线阅读
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职称材料
小麦NAC转录因子TaNAC14的原核表达和分离纯化
被引量：
2
2
作者
陈志军
张立坚
+3 位作者
池青
吴保为
敖兰吉亚
赵惠贤
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第11期4171-4182,共12页
植物NAC转录因子参与调控多种生物学过程,在植物生长发育和逆境适应性方面发挥重要作用。前期研究发现小麦(Triticum aestivum)NAC家族成员TaNAC14正向调控幼苗根生长发育并增强其耐旱性。本研究对小麦TaNAC14蛋白的理化性质和结构进行...
植物NAC转录因子参与调控多种生物学过程,在植物生长发育和逆境适应性方面发挥重要作用。前期研究发现小麦(Triticum aestivum)NAC家族成员TaNAC14正向调控幼苗根生长发育并增强其耐旱性。本研究对小麦TaNAC14蛋白的理化性质和结构进行了分析预测;对TaNAC14的亚细胞定位和转录激活活性进行了验证;构建了TaNAC14重组蛋白原核表达载体pET21a-HMT-TaNAC14,转化大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌株BL21 CodonPlus(DE3)-RIPL,对TaNAC14重组蛋白的诱导表达条件进行了优化,对重组蛋白的可溶性进行了分析,并利用镍柱对重组蛋白进行了分离纯化。结果表明,TaNAC14具有NAM家族保守的结构域,定位于细胞核,具有转录激活活性。重组蛋白HMT-TaNAC14在大肠杆菌中的最佳诱导表达条件为0.2mmol/L的IPTG诱导4 h;该重组蛋白主要以可溶性形式存在;利用镍柱对其进行了分离纯化,获得了较高纯度的目的蛋白。本研究为后续进行TaNAC14调控靶基因的鉴定奠定了基础。
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关键词
小麦
tanac14
载体构建
原核表达
分离纯化
原文传递
题名
TaNAC14转基因小麦外源目标基因拷贝数及遗传稳定性分析
被引量：
2
1
作者
张立坚
池青
杜琳颖
郭利建
李玉莲
刘香利
马猛
赵惠贤
机构
西北农林科技大学生命科学学院
山东省农业科学院作物研究所
西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室
出处
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第2期135-143,共9页
基金
国家自然科学基金项目(31471482)。
文摘
外源基因拷贝数是影响转基因植物遗传稳定性及其自身表达水平的重要因素。为了探析TaNAC14基因在小麦生长发育中的生物学功能,本研究通过农杆菌介导的遗传转化法获得了14个T0代TaNAC14转基因小麦植株,采用BASTA溶液涂抹和目标序列PCR检测相结合的方法,从14个转基因小麦植株中鉴定出9个阳性植株。通过TaqMan实时定量PCR方法,以小麦内源单拷贝基因Pinb为内参基因,对9个T0代转基因小麦阳性植株中外源目标基因拷贝数进行检测,结果表明,T0代转基因小麦再生植株中有5株为单拷贝,4株为双拷贝,其中单拷贝插入整合的比率接近55.6%。选取单拷贝转基因植株收获的种子进行种植,根据BASTA溶液涂抹鉴定对T0:1代小麦株系遗传情况进行分析,结果表明目标基因TaNAC14是可遗传的。此外,还对T1代转基因小麦目标基因表达水平进行测定,结果表明,与野生型JW1相比,各转基因小麦植株目的基因TaNAC14表达量均极显著增加。该研究结果为后续TaNAC14基因的功能研究奠定了基础。
关键词
小麦
tanac14
基因
转基因拷贝数
转基因遗传稳定性
目标基因表达水平
Keywords
Wheat
tanac14
gene
Transgene copy number
Transgenic genetic stability
Target gene expression level
分类号
S512.1 [农业科学—作物学]
S330 [农业科学—作物遗传育种]
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职称材料
题名
小麦NAC转录因子TaNAC14的原核表达和分离纯化
被引量：
2
2
作者
陈志军
张立坚
池青
吴保为
敖兰吉亚
赵惠贤
机构
西北农林科技大学生命科学学院
西北农林科技大学农学院
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第11期4171-4182,共12页
基金
国家自然科学基金(32372103,32072003)。
文摘
植物NAC转录因子参与调控多种生物学过程,在植物生长发育和逆境适应性方面发挥重要作用。前期研究发现小麦(Triticum aestivum)NAC家族成员TaNAC14正向调控幼苗根生长发育并增强其耐旱性。本研究对小麦TaNAC14蛋白的理化性质和结构进行了分析预测;对TaNAC14的亚细胞定位和转录激活活性进行了验证;构建了TaNAC14重组蛋白原核表达载体pET21a-HMT-TaNAC14,转化大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌株BL21 CodonPlus(DE3)-RIPL,对TaNAC14重组蛋白的诱导表达条件进行了优化,对重组蛋白的可溶性进行了分析,并利用镍柱对重组蛋白进行了分离纯化。结果表明,TaNAC14具有NAM家族保守的结构域,定位于细胞核,具有转录激活活性。重组蛋白HMT-TaNAC14在大肠杆菌中的最佳诱导表达条件为0.2mmol/L的IPTG诱导4 h;该重组蛋白主要以可溶性形式存在;利用镍柱对其进行了分离纯化,获得了较高纯度的目的蛋白。本研究为后续进行TaNAC14调控靶基因的鉴定奠定了基础。
关键词
小麦
tanac14
载体构建
原核表达
分离纯化
Keywords
wheat
tanac14
vector construction
prokaryotic expression
purification
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
S512.1 [农业科学—作物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
TaNAC14转基因小麦外源目标基因拷贝数及遗传稳定性分析
张立坚
池青
杜琳颖
郭利建
李玉莲
刘香利
马猛
赵惠贤
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
小麦NAC转录因子TaNAC14的原核表达和分离纯化
陈志军
张立坚
池青
吴保为
敖兰吉亚
赵惠贤
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
2
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