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小麦抗叶锈病cDNA文库构建及TaGRF3互作蛋白的筛选
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作者 牛泽霖 韩浩然 +4 位作者 王傲嘉 牛梓宇 刘刚 王荣纳 王冬梅 《河北农业大学学报》 北大核心 2025年第6期34-43,共10页
小麦叶锈病严重危害小麦生产,系统研究抗病相关蛋白作用机制对保障粮食安全具有重大意义。本研究分析了14-3-3蛋白编码基因TaGRF3在小麦与叶锈菌互作过程中的表达模式,通过构建小麦抵御叶锈菌侵染的cDNA文库,筛选TaGRF3的互作蛋白并进... 小麦叶锈病严重危害小麦生产,系统研究抗病相关蛋白作用机制对保障粮食安全具有重大意义。本研究分析了14-3-3蛋白编码基因TaGRF3在小麦与叶锈菌互作过程中的表达模式,通过构建小麦抵御叶锈菌侵染的cDNA文库,筛选TaGRF3的互作蛋白并进行验证。研究结果表明,荧光定量PCR和数字PCR分析发现TaGRF3能够被叶锈菌侵染诱导表达,且在抗病组合接种叶锈菌后18 h达到最高峰。同时,以抗病组合小麦Tc Lr26为材料,采用重组技术构建了高质量的小麦抵御叶锈菌侵染的酵母cDNA文库;利用诱饵表达载体pGBKT7-TaGRF3对cDNA文库进行筛选,获得198个阳性克隆,通过测序和序列比对,共获得75个候选互作蛋白;功能富集分析表明TaGRF3与其互作蛋白主要参与氨基酸代谢、氧化还原反应、糖异生及去除超氧化物自由基等过程;结合转录组数据分析和功能注释信息选取TaPRXⅥ进行一对一互作验证;通过酵母双杂交(Y2H)和双分子荧光互补(BiFC)发现两者存在相互作用。本研究初步探索了在小麦抵御叶锈菌侵染中14-3-3蛋白TaGRF3的表达模式和互作蛋白,对下一步研究其功能和分子调控机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 小麦 叶锈菌 CDNA文库 tagrf3 互作蛋白
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