目的:通过观察沉默瞬时受体阳离子通道亚家族V成员6(transient receptor potential cation channel,subfamily V member 6,TRPV6)对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响和细胞内钙的浓度变化,以及1,25(OH)_2D_3、CaCl_2及CuCl_2在SD大鼠结...目的:通过观察沉默瞬时受体阳离子通道亚家族V成员6(transient receptor potential cation channel,subfamily V member 6,TRPV6)对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响和细胞内钙的浓度变化,以及1,25(OH)_2D_3、CaCl_2及CuCl_2在SD大鼠结肠肿瘤模型建立中的影响,探索TRPV6在结肠癌发生过程中的相关作用,为结肠癌的防治寻找新的靶点。方法:通过构建慢病毒颗粒感染结肠癌SW480细胞,采用免疫组织化学法、Western bolt、PCR技术检测TRPV6蛋白及m RNA的表达,MTT法、迁移及凋亡实验观察结肠癌SW480细胞增殖、迁移及凋亡变化,高速离子成像系统测定结肠癌SW480细胞内的Ca^(2+)浓度变化。以二甲基肼(dimethyl hydrazine,DMH)建立SD大鼠结肠肿瘤模型,分为实验组(DMH组)和干预组[(DMH+1,25(OH)_2D_3组、DMH+CuCl_2组)]、对照组,干预组分别予1,25(OH)_2D_3(37.5 nmol/kg)、CuCl2(375μmol/kg)对模型进行干预。观察各组大鼠结肠腺瘤及腺癌的发生情况,Western blot检测各组结肠组织中TRPV6蛋白的表达情况。结果:TRPV6-RNAi转染结肠癌SW480细胞后,TRPV6 m RNA及蛋白表达减少,细胞Ca^(2+)浓度水平降低,结肠癌SW480细胞的增殖率、迁移能力下降,细胞凋亡率增加,与空白对照组及阴性对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组大鼠成瘤率为0,DMH+1,25(OH)_2D_3组为100%,DMH组为84.62%,DMH+CuCl_2组为33.33%。各组大鼠大肠中均有TRPV6蛋白的表达,表达情况为DMH+1,25(OH)_2D_3组>DMH组>DMH+CuCl_2组>对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:降低结肠癌SW480细胞Ca^(2+)浓度水平可抑制结肠癌SW480细胞的增殖、迁移能力,诱导细胞凋亡。1,25(OH)_2D_3可以增加实验鼠结肠组织TRPV6蛋白表达,促进结肠肿瘤的形成。CuCl_2可以使实验鼠结肠组织中的TRPV6蛋白表达降低,并抑制结肠肿瘤的形成。展开更多
目的:通过观察正常结肠组织及各类型结肠腺瘤息肉和结肠癌组织类型中瞬时受体阳离子通道亚家族V成员5(transient receptor potential cation channel,subfamily V,member5,TRPV5)、TRPV6表达情况,研究TRPV5、TRPV6的表达变化是否与结肠...目的:通过观察正常结肠组织及各类型结肠腺瘤息肉和结肠癌组织类型中瞬时受体阳离子通道亚家族V成员5(transient receptor potential cation channel,subfamily V,member5,TRPV5)、TRPV6表达情况,研究TRPV5、TRPV6的表达变化是否与结肠腺瘤-腺癌的演变过程相关,探讨其在人类结肠腺瘤-腺癌形成过程中的作用.方法:取肠镜活检或手术切除的增生性息肉、结肠腺瘤(免疫组织化学40例)、结肠癌标本各20例及正常对照肠黏膜20例.采用实时荧光定量PCR技术、Western blot技术及免疫组织化学技术检测并比较正常结肠组织、结肠腺瘤及结肠癌组织中TRPV5、TRPV6m R N A及其相应的蛋白含量的表达,同时通过免疫组织化学测定组织细胞Ki-67来观察TRPV5、TRPV6表达与上述组织细胞增殖的关系.结果:(1)TRPV5、TRPV6在正常结肠组织、结肠息肉组织及结肠癌组织中均有表达,且主要表达部位均在细胞胞浆;Ki-67表达在TRPV5或TRPV6表达增高时亦增高(P<0.05);(2)T R P V5、T R P V6的蛋白及m R N A在正常肠黏膜及非腺瘤息肉中呈弱阳性表达或不表达(P>0.05),在结肠腺瘤及结肠腺癌中高表达(P<0.05),且与组织类型具有直线相关性(P<0.05);(3)在结肠黏膜组织内,TRPV5表达量低于TRPV6(P<0.05).结论:在结肠黏膜组织内,TRPV5、TRPV6均有不同程度表达,特别在结肠腺瘤及结肠腺癌中呈高表达状态,同时Ki-67表达亦相应增高.提示在结肠黏膜组织内,TRPV5、TRPV6表达程度与组织增殖程度以及息肉恶变的危险性之间具有相关关系,TRPV5、TRPV6可能在结肠腺癌发生、发展过程中扮演着重要的角色.展开更多
文摘目的:通过观察沉默瞬时受体阳离子通道亚家族V成员6(transient receptor potential cation channel,subfamily V member 6,TRPV6)对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响和细胞内钙的浓度变化,以及1,25(OH)_2D_3、CaCl_2及CuCl_2在SD大鼠结肠肿瘤模型建立中的影响,探索TRPV6在结肠癌发生过程中的相关作用,为结肠癌的防治寻找新的靶点。方法:通过构建慢病毒颗粒感染结肠癌SW480细胞,采用免疫组织化学法、Western bolt、PCR技术检测TRPV6蛋白及m RNA的表达,MTT法、迁移及凋亡实验观察结肠癌SW480细胞增殖、迁移及凋亡变化,高速离子成像系统测定结肠癌SW480细胞内的Ca^(2+)浓度变化。以二甲基肼(dimethyl hydrazine,DMH)建立SD大鼠结肠肿瘤模型,分为实验组(DMH组)和干预组[(DMH+1,25(OH)_2D_3组、DMH+CuCl_2组)]、对照组,干预组分别予1,25(OH)_2D_3(37.5 nmol/kg)、CuCl2(375μmol/kg)对模型进行干预。观察各组大鼠结肠腺瘤及腺癌的发生情况,Western blot检测各组结肠组织中TRPV6蛋白的表达情况。结果:TRPV6-RNAi转染结肠癌SW480细胞后,TRPV6 m RNA及蛋白表达减少,细胞Ca^(2+)浓度水平降低,结肠癌SW480细胞的增殖率、迁移能力下降,细胞凋亡率增加,与空白对照组及阴性对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组大鼠成瘤率为0,DMH+1,25(OH)_2D_3组为100%,DMH组为84.62%,DMH+CuCl_2组为33.33%。各组大鼠大肠中均有TRPV6蛋白的表达,表达情况为DMH+1,25(OH)_2D_3组>DMH组>DMH+CuCl_2组>对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:降低结肠癌SW480细胞Ca^(2+)浓度水平可抑制结肠癌SW480细胞的增殖、迁移能力,诱导细胞凋亡。1,25(OH)_2D_3可以增加实验鼠结肠组织TRPV6蛋白表达,促进结肠肿瘤的形成。CuCl_2可以使实验鼠结肠组织中的TRPV6蛋白表达降低,并抑制结肠肿瘤的形成。
文摘目的:通过观察正常结肠组织及各类型结肠腺瘤息肉和结肠癌组织类型中瞬时受体阳离子通道亚家族V成员5(transient receptor potential cation channel,subfamily V,member5,TRPV5)、TRPV6表达情况,研究TRPV5、TRPV6的表达变化是否与结肠腺瘤-腺癌的演变过程相关,探讨其在人类结肠腺瘤-腺癌形成过程中的作用.方法:取肠镜活检或手术切除的增生性息肉、结肠腺瘤(免疫组织化学40例)、结肠癌标本各20例及正常对照肠黏膜20例.采用实时荧光定量PCR技术、Western blot技术及免疫组织化学技术检测并比较正常结肠组织、结肠腺瘤及结肠癌组织中TRPV5、TRPV6m R N A及其相应的蛋白含量的表达,同时通过免疫组织化学测定组织细胞Ki-67来观察TRPV5、TRPV6表达与上述组织细胞增殖的关系.结果:(1)TRPV5、TRPV6在正常结肠组织、结肠息肉组织及结肠癌组织中均有表达,且主要表达部位均在细胞胞浆;Ki-67表达在TRPV5或TRPV6表达增高时亦增高(P<0.05);(2)T R P V5、T R P V6的蛋白及m R N A在正常肠黏膜及非腺瘤息肉中呈弱阳性表达或不表达(P>0.05),在结肠腺瘤及结肠腺癌中高表达(P<0.05),且与组织类型具有直线相关性(P<0.05);(3)在结肠黏膜组织内,TRPV5表达量低于TRPV6(P<0.05).结论:在结肠黏膜组织内,TRPV5、TRPV6均有不同程度表达,特别在结肠腺瘤及结肠腺癌中呈高表达状态,同时Ki-67表达亦相应增高.提示在结肠黏膜组织内,TRPV5、TRPV6表达程度与组织增殖程度以及息肉恶变的危险性之间具有相关关系,TRPV5、TRPV6可能在结肠腺癌发生、发展过程中扮演着重要的角色.
