为确定H9N2猪流感病毒(H9N2-SIV)通过瞬时受体电位通道M2(TRPM2)介导肺微血管上皮细胞(PMVEC)铁死亡的分子机制,使用H9N2-SIV接种PMVEC,构建TRPM2-siRNA质粒并转染细胞。用透射电镜观察细胞超微结构,用荧光探针法检测活性氧(ROS)、Ca^(...为确定H9N2猪流感病毒(H9N2-SIV)通过瞬时受体电位通道M2(TRPM2)介导肺微血管上皮细胞(PMVEC)铁死亡的分子机制,使用H9N2-SIV接种PMVEC,构建TRPM2-siRNA质粒并转染细胞。用透射电镜观察细胞超微结构,用荧光探针法检测活性氧(ROS)、Ca^(2+)和Fe^(2+);用生化试剂盒检测丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量,并通过荧光定量PCR和Western-blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、TRPM2、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、阳离子转运调控样蛋白1(CHAC1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的m RNA和蛋白表达水平。结果显示,H9N2-SIV感染可诱导细胞铁死亡,敲低TRPM2可以减少细胞内ROS水平,降低Ca^(2+)、Fe^(2+)及MDA含量,GSH水平明显增加;此外,GRP78、PERK、ATF4、CHAC1 m RNA和蛋白表达水平下调,GPX4的m RNA和蛋白表达水平上调。结果表明,H9N2-SIV感染可诱导细胞铁死亡,其可通过激活TRPM2使Ca^(2+)内流增多,进而激活PERK/ATF4/CHAC1信号通路,加速GSH耗竭,抑制GPX4的活性,促进细胞铁死亡。展开更多
目的:探讨寒热中药的成分与TRP家族中TRPV1和TRPM8通道蛋白mRNA表达的相关性。方法:原代培养DRG神经元,在体外观察中药单体对通道蛋白表达的影响,基因的表达量采用荧光定量PCR(real time PCR)法检测,数据分析采用2?ΔΔCT法。结果:热性...目的:探讨寒热中药的成分与TRP家族中TRPV1和TRPM8通道蛋白mRNA表达的相关性。方法:原代培养DRG神经元,在体外观察中药单体对通道蛋白表达的影响,基因的表达量采用荧光定量PCR(real time PCR)法检测,数据分析采用2?ΔΔCT法。结果:热性中药的成分(吴茱萸碱、桂皮醛)上调TRPV1的表达,下调TRPM8的表达,尤以寒负荷后更为明显;寒性中药的成分(黄芩苷、大黄素)上调TRPM8的表达,下调TRPV1的表达,尤以热负荷后更为明显。结论:对TRPV1与TR-PM8的表达调节可能与中药的寒热药性相关,这可能是寒热性中药临床上发挥寒热调节作用的机制之一。展开更多
文摘为确定H9N2猪流感病毒(H9N2-SIV)通过瞬时受体电位通道M2(TRPM2)介导肺微血管上皮细胞(PMVEC)铁死亡的分子机制,使用H9N2-SIV接种PMVEC,构建TRPM2-siRNA质粒并转染细胞。用透射电镜观察细胞超微结构,用荧光探针法检测活性氧(ROS)、Ca^(2+)和Fe^(2+);用生化试剂盒检测丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量,并通过荧光定量PCR和Western-blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、TRPM2、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、阳离子转运调控样蛋白1(CHAC1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的m RNA和蛋白表达水平。结果显示,H9N2-SIV感染可诱导细胞铁死亡,敲低TRPM2可以减少细胞内ROS水平,降低Ca^(2+)、Fe^(2+)及MDA含量,GSH水平明显增加;此外,GRP78、PERK、ATF4、CHAC1 m RNA和蛋白表达水平下调,GPX4的m RNA和蛋白表达水平上调。结果表明,H9N2-SIV感染可诱导细胞铁死亡,其可通过激活TRPM2使Ca^(2+)内流增多,进而激活PERK/ATF4/CHAC1信号通路,加速GSH耗竭,抑制GPX4的活性,促进细胞铁死亡。
文摘目的:探讨寒热中药的成分与TRP家族中TRPV1和TRPM8通道蛋白mRNA表达的相关性。方法:原代培养DRG神经元,在体外观察中药单体对通道蛋白表达的影响,基因的表达量采用荧光定量PCR(real time PCR)法检测,数据分析采用2?ΔΔCT法。结果:热性中药的成分(吴茱萸碱、桂皮醛)上调TRPV1的表达,下调TRPM8的表达,尤以寒负荷后更为明显;寒性中药的成分(黄芩苷、大黄素)上调TRPM8的表达,下调TRPV1的表达,尤以热负荷后更为明显。结论:对TRPV1与TR-PM8的表达调节可能与中药的寒热药性相关,这可能是寒热性中药临床上发挥寒热调节作用的机制之一。
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