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基于miR⁃26a/TRPC6轴探究六味地黄汤对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用机制 被引量：1
1
作者 李杨 温伟波 《海南医科大学学报》 北大核心 2025年第3期185-192,共8页
目的:探讨六味地黄汤改善糖尿病肾病大鼠的作用机制。方法:八周龄雄性SD大鼠60只,体质量180~220 g,随机分为6组(n=10),即正常组、模型组、六味地黄汤低剂量组,六味地黄汤中剂量组,六味地黄汤高剂量组以及厄贝沙坦处理组。正常组常规饲... 目的:探讨六味地黄汤改善糖尿病肾病大鼠的作用机制。方法:八周龄雄性SD大鼠60只,体质量180~220 g,随机分为6组(n=10),即正常组、模型组、六味地黄汤低剂量组,六味地黄汤中剂量组,六味地黄汤高剂量组以及厄贝沙坦处理组。正常组常规饲料喂养,联合一次性等剂量枸橼酸缓冲液腹腔注射。其余50只采用高脂饲养加一次性注射链脲佐菌素造模。造模成功后,给予六味地黄汤灌胃治疗,阳性对照使用厄贝沙坦处理。给药结束后先收集24 h尿液,生化法检测尿蛋白含量;ELISA检测空腹血糖、肌酐含量,检测大鼠血清中炎性因子白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)水平。大鼠称重,处死,分离双肾组织,苏木素-伊红(H&E)染色观察各组大鼠肾脏组织变化;qPCR检测miR-26a表达水平;Western blot和免疫组化检测肾脏组织中TRPC6表达。结果:与正常组比较,模型组中空腹血糖、24 h尿蛋白、肌酐水平明显升高,体重降低,肾指数升高,炎性因子IL-6和IL-1β表达显著升高,miR-26a表达降低,TRPC6表达水平升高(P<0.05),模型组大鼠中肾组织损伤严重;与模型组比较,六味地黄汤灌胃处理后,空腹血糖、24 h尿蛋白、肌酐水平降低,体重升高,肾指数降低,炎性因子IL-6和IL-1β表达降低,miR-26a表达增强,TRPC6表达受到抑制(P<0.05),大鼠肾组织损伤得到改善,且高剂量组改善效果优于低剂量组。结论:六味地黄汤可能通过miR-26a/TRPC6分子轴改善大鼠糖尿病肾病。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 六味地黄汤 miR-26a trpc6
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TRPC6激动剂介导Calpain-1改善丙泊酚诱发的大鼠认知功能障碍
2
作者 张道正 司敬栋 +3 位作者 井绪东 张延海 张艺 潘振国 《解剖科学进展》 2025年第4期458-461,466,共5页
目的探究TRPC6激动剂对丙泊酚诱发的大鼠认知功能障碍的改善作用及作用机制。方法SD大鼠随机分为对照组(Control组)、丙泊酚组(Propofol组)和TRPC6激动剂组(Hyp9组),每组10只。Morris水迷宫实验评价各组大鼠的学习记忆能力;旷场实验评... 目的探究TRPC6激动剂对丙泊酚诱发的大鼠认知功能障碍的改善作用及作用机制。方法SD大鼠随机分为对照组(Control组)、丙泊酚组(Propofol组)和TRPC6激动剂组(Hyp9组),每组10只。Morris水迷宫实验评价各组大鼠的学习记忆能力;旷场实验评价各组大鼠的运动行为;HE染色和尼氏染色观察各种大鼠海马组织神经损伤;高尔基染色检测各组大鼠海马组织树突棘密度;免疫荧光检测各组大鼠海马组织中PSD95蛋白表达;Western blot检测各组大鼠海马组织中TRPC6和Calpain-1蛋白表达。结果给予TRPC6激动剂能降低丙泊酚麻醉致认知功能障碍大鼠逃避潜伏期以及中央格停留时间,增加大鼠穿越平台次数和目的象限停留时间以及理毛次数、跨格次数和站立次数,改善大鼠海马组织病理损伤和神经元损伤,增加大鼠海马组织树突棘密度,上调大鼠海马组织PSD95阳性率以及TRPC6和Calpain-1蛋白表达水平。结论TRPC6激动剂改善丙泊酚麻醉致认知功能障碍大鼠海马损伤和认知功能障碍,其机制可能与上调海马中TRPC6诱导的Calpain-1表达并维持海马突触可塑性有关。 展开更多
关键词 trpc6激动剂 丙泊酚 认知功能障碍 钙蛋白酶-1 突触可塑性 大鼠
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养肝益水颗粒对AngⅡ介导肾足细胞损伤及TRPC6/NFAT通路的影响
3
作者 陆婷 周健坤 +1 位作者 张俊 戴小华 《铜陵职业技术学院学报》 2025年第3期63-68,共6页
目的:观察养肝益水颗粒对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导小鼠肾足细胞珠(MPC-5)损伤的抑制作用及对瞬时受体电位阳离子通道6/活化的T细胞核因子(TRPC6/NFAT)通路的影响。方法:SD大鼠药物干预2周后制备养肝益水颗粒含药血清、空白血清和贝那普... 目的:观察养肝益水颗粒对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导小鼠肾足细胞珠(MPC-5)损伤的抑制作用及对瞬时受体电位阳离子通道6/活化的T细胞核因子(TRPC6/NFAT)通路的影响。方法:SD大鼠药物干预2周后制备养肝益水颗粒含药血清、空白血清和贝那普利含药血清,用细胞活力检测试剂盒(CCK-8)检测了不同浓度养肝益水颗粒含药血清(5%,10%,15%,20%)MPC-5的生存活力,并确定最佳含药血清浓度;体外培养MPC-5细胞,通过选取10-6mmol·L-1的AngⅡ诱导MPC-5细胞制备足细胞损伤模型,将MPC-5分为空白、AngⅡ刺激组(模型组)、AngⅡ刺激+最佳养肝益水颗粒含药血清组(YGYS组)、AngⅡ刺激+贝那普利含药血清组(BNPL组)、AngⅡ刺激+最佳养肝益水颗粒含药血清+TRPC6抑制剂组(TRPC6抑制剂组)、AngⅡ刺激+最佳养肝益水颗粒含药血清+NFAT抑制剂组(NFAT抑制剂组),CCK-8法检测各处理组对MPC-5细胞的影响,流式细胞仪检测各处理组MPC-5细胞凋亡率,ELISA法检测各处理组肾病蛋白(Nephrin)、足突蛋白(Podocin)、足盂蛋白(Podocalyxin)含量,Western blot法测定各处理组TRPC6、NFAT蛋白表达情况。结果:5%中剂量养肝益水颗粒含药血清组的MPC-5细胞活力较其他浓度养肝益水颗粒含药血清组细胞活力显著增强;模型组、YGYS组、BNPL组、TRPC6组、NFAT组细胞活力比空白组显著下降(P<0.01),与模型组比较,YGYS组、BNPL组、TRPC6组、NFAT组显著增强(P<0.01)。模型组的凋亡率比空白组增高(P<0.01),与模型组相比,YGYS组、BNPL、TRPC6抑制剂组、NFAT抑制组凋亡率明显降低(P<0.01)。模型组Nephrin、Podocin、Podocalyxin表达水平较空白组显著降低(P<0.01),与模型组相比,YGYS组、BNPL组、TRPC6抑制剂组、NFAT抑制剂组中Nephrin、Podocin、Podocalyxin表达水平显著升高(P<0.01)。模型组TRPC6、NFAT表达与空白组相比显著升高(P<0.01),与模型组比较,YGYS组、BNPL组、TRPC6抑制剂组、NFAT抑制剂组TRPC6、NFAT表达水平显著下降(P<0.01),与YGYS组相比,TRPC6抑制剂组、NFAT抑制剂组TRPC6、NFAT表达水平下降(P<0.05)。结论:养肝益水颗粒可通过上调Nephrin、Podocin、Podocalyxin表达,抑制TRPC6、NFAT表达,从而抑制AngⅡ介导的肾足细胞损伤,提示养肝益水颗粒的肾脏保护作用与调节AngⅡ/TRPC6/NFAT信号通路有关。 展开更多
关键词 养肝益水颗粒 足细胞 高血压肾损害 AngⅡ/trpc6/NFAT信号通路
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TRPC6基因对过氧化氢诱导大鼠脑血管平滑肌细胞炎症反应、氧化应激损伤的影响
4
作者 高寒冰 张开创 +1 位作者 黄林轲 郑静 《安徽医药》 2025年第3期541-545,共5页
目的探究瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)基因对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导大鼠脑血管平滑肌细胞(VSMCs)损伤的影响。方法于2022年3—12月完成研究。分离大鼠脑基底动脉VSMCs,采用随机数字表法分为五组:空白组、H_(2)O_(2)组(500μmo... 目的探究瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)基因对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导大鼠脑血管平滑肌细胞(VSMCs)损伤的影响。方法于2022年3—12月完成研究。分离大鼠脑基底动脉VSMCs,采用随机数字表法分为五组:空白组、H_(2)O_(2)组(500μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h)、H_(2)O_(2)+空转染组(500μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h,并转染空载脂质体)、H_(2)O_(2)+TRPC6 siRNA组(500μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h,并转染TRPC6 siRNA)和H_(2)O_(2)+pcDNA3.1 TRPC6组(500μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h,并转染pcDNA3.1 TRPC6)。采用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定检测细胞中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛,DCFH-DA荧光探针法检测细胞中活性氧水平。结果与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+TRPC6 siRNA组D(λ)450 nm值明显升高,细胞凋亡率明显降低(P<0.05),H_(2)O_(2)+pcDNA3.1 TRPC6组D(λ)450 nm值明显降低,细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+TRPC6 siRNA组、H_(2)O_(2)+pcDNA3.1 TRPC6组细胞中IL-6含量分别为(159.24±21.65)ng/L、(52.95±12.43)ng/L、(257.48±23.44)ng/L,IL-1β含量分别为(126.09±19.85)ng/L、(41.67±9.06)ng/L、(248.77±23.32)ng/L,MCP-1含量分别为(89.25±11.73)ng/L、(27.73±5.18)ng/L、(187.61±15.42)ng/L,SOD活性分别为(53.40±8.92)U/mL、(172.33±14.52)U/mL、(23.75±5.63)U/mL,丙二醛含量分别为(91.35±10.41)nmol/mL、(8.29±2.17)nmol/mL、(169.37±14.37)nmol/mL,活性氧水平分别为2.68±0.27、0.76±0.18、5.89±0.34;与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+TRPC6 siRNA组IL-6、IL-1β、MCP-1、丙二醛和活性氧明显降低、SOD活性明显升高(P<0.05),H_(2)O_(2)+pcDNA3.1 TRPC6组与之相反。结论TRPC6基因低/过表达可促进/抑制H_(2)O_(2)诱导VSMCs增殖活性和抑制/促进细胞凋亡,可能与调节炎症反应和氧化应激损伤有关。 展开更多
关键词 颅内动脉瘤 脑血管平滑肌细胞 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(trpc6)基因 炎症反应 氧化应激
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Calpain-TRPC6信号通路在七氟烷诱发大鼠发育期神经毒性中的作用
5
作者 方楚龙 雷定才 +2 位作者 李星辉 蒋中晋 张琴 《河北医药》 2025年第7期1071-1077,共7页
目的 探讨钙蛋白酶(Calpain)-经典瞬时受体电位通道6(TRPC6)信号通路对七氟烷(sevoflurane,S)诱发大鼠发育期神经毒性的影响。方法 将70只7日龄SD大鼠随机分为对照(Veh)组26只和七氟烷(S)组44只,S组持续吸入3%七氟烷6 h,2组各取10只进... 目的 探讨钙蛋白酶(Calpain)-经典瞬时受体电位通道6(TRPC6)信号通路对七氟烷(sevoflurane,S)诱发大鼠发育期神经毒性的影响。方法 将70只7日龄SD大鼠随机分为对照(Veh)组26只和七氟烷(S)组44只,S组持续吸入3%七氟烷6 h,2组各取10只进行动脉血气分析;S组分别于七氟烷吸入完成后的第0、4、12和24小时脱颈处死大鼠,每个时间点12只;剩余各10只小鼠于6周龄时进行Morris水迷宫(MWM)行为学实验。132只7日龄大鼠随机分为Veh组、S组、七氟烷+5 pmmol/L贯叶金丝桃素(S+H5)组、七氟烷+10 pmmol/L贯叶金丝桃素(S+H10)组、七氟烷+SKF96365(20 pmmol/L,S+SKF)组和七氟烷+Calpeptin(20 pmmol/L,S+CA)组,每组大鼠各取12只于七氟烷麻醉12 h后脱颈处死,另各取10只小鼠于6周龄进行MWM行为学实验。采用末端脱氧核苷酸转移酶缺口端标记(TUNEL)染色检测脑皮质神经元凋亡;Western blot检测脑组织TPRC6、Cleaved-caspase-3和SBDP145蛋白表达。结果 Veh组和S组大鼠动脉血生理参数均在正常范围内,2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Veh组比较,S组大鼠在出生后6周龄时的逃逸潜伏期延长,穿越平台次数和目标象限停留时间减少(P<0.05),S组大鼠麻醉恢复期第0、4、12和24小时的脑皮质TUNEL阳性细胞数及Cleaved-caspase-3和SBDP145蛋白表达升高,TRPC6蛋白表达降低(P<0.05),麻醉恢复期第12小时干预效果最明显。与S组比较,S+H5和S+H10组大鼠脑皮质神经元TUNEL阳性细胞数减少,Cleaved-caspase-3和SBDP145蛋白表达降低,逃逸潜伏期缩短,穿越平台次数和目标象限停留时间增多;S+SKF组大鼠脑皮质神经元TUNEL阳性细胞数增多,Cleaved-caspase-3和SBDP145蛋白表达升高,逃逸潜伏期延长,穿越平台次数和目标象限停留时间减少,差异均有统计学意义(P<0.05);S+CA组大鼠脑皮质神经元TUNEL阳性细胞数减少,Cleaved-caspase-3和SBDP145蛋白表达降低,逃逸潜伏期缩短,穿越平台次数和目标象限停留时间增多(P<0.05)。而6组间游泳速度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 新生大鼠长期多次暴露于七氟烷可能会通过增加Calpain介导的TRPC6蛋白水解促进急性皮质神经元损伤和远期认知行为障碍。 展开更多
关键词 Calpain-trpc6信号通路 七氟烷 发育期神经毒性 元气认知行为障碍
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抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：7
6
作者 张萃 卢文菊 +3 位作者 梅俪凡 黄超贤 李红枝 刘晓波 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期318-321,共4页
目的制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其免疫学和生物学特性进行鉴定。方法采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫Balb/c小鼠,取血清效价高者脾细胞与Ag8.653骨髓瘤细胞进行融合。采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,以及测定单克... 目的制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其免疫学和生物学特性进行鉴定。方法采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫Balb/c小鼠,取血清效价高者脾细胞与Ag8.653骨髓瘤细胞进行融合。采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,以及测定单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力;采用单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型;并经有限稀释法克隆化培养获得杂交瘤细胞株;采用秋水仙素阻断法鉴定杂交瘤细胞株染色体。结果获得3株能稳定分泌抗TRPC6多肽的单克隆抗体,分别命名为A2、F11和H8;抗体Ig亚类均为IgG1型,染色体均在89±7条的范围内;相对亲和力结果 F11为6μg/ml,A2、H8为12.5μg/ml。结论抗TRPC6多肽单克隆抗体的成功制备,为TRPC6的免疫学检测方法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 trpc6 多肽 单克隆抗体 杂交瘤
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HIF-1α调控TRPC6在新生大鼠HPH肺血管重塑中的作用机制研究
7
作者 谢鸥 李珊珊 +1 位作者 罗洋 王乐 《新疆医科大学学报》 2025年第7期918-923,930,共7页
目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)调控经典型瞬时受体电位通道6(TRPC6)在新生大鼠缺氧性肺动脉高压(HPH)肺血管重塑中的作用机制。方法将32只Wistar新生大鼠随机分为常氧组、HPH组、过表达HIF-1α+HPH组(HIF-1α组)、HIF-1α抑制剂+HP... 目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)调控经典型瞬时受体电位通道6(TRPC6)在新生大鼠缺氧性肺动脉高压(HPH)肺血管重塑中的作用机制。方法将32只Wistar新生大鼠随机分为常氧组、HPH组、过表达HIF-1α+HPH组(HIF-1α组)、HIF-1α抑制剂+HPH组(2ME组)。常氧组在常氧环境下饲养,其余3组建立HPH模型,其中HIF-1α组大鼠通过尾静脉注射携带HIF-1α基因的腺病毒载体,2ME组每日皮下注射2-甲氧基雌二醇(2ME),各组以干预处理后14 d作为实验终点。直接测压法测量右心室收缩压(RVSP);称重计算右心室肥厚指数(RVHI);苏木精-伊红染色观察肺远端小动脉形态,计算血管重塑指标(MT%、MA%)进行定量分析;免疫组化法检测肺组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达以评估肺血管平滑肌细胞增殖水平,同时检测HIF-1α、TRPC6蛋白在肺组织中的表达水平;实时荧光定量-聚合酶链反应法检测HIF-1α、TRPC6、PCNA的转录水平。结果与常氧组比较,HPH组新生大鼠RVSP、RVHI、MT%、MA%升高(P<0.05),肺组织HIF-1α、TRPC6、PCNA的蛋白表达和mRNA水平升高(P<0.05);与HPH组比较,HIF-1α组新生大鼠RVSP、RVHI、MT%、MA%升高(P<0.05),肺组织HIF-1α、TRPC6、PCNA的蛋白表达和mRNA水平升高(P<0.05);与HPH组比较,2ME组RVSP、RVHI、MT%、MA%降低(P<0.05),肺组织HIF-1α、TRPC6、PCNA蛋白表达水平降低(P<0.05),TRPC6、PCNA mRNA水平降低(P<0.05);与HIF-1α组比较,2ME组RVSP、RVHI、MT%、MA%降低(P<0.05),肺组织HIF-1α、TRPC6、PCNA蛋白表达和mRNA水平降低(P<0.05)。结论慢性缺氧刺激下HIF-1α可能通过上调TRPC6,促进新生大鼠HPH肺血管重塑,该研究可能为新生儿HPH提供新的治疗靶点。 展开更多
关键词 缺氧诱导因子-1Α 经典型瞬时受体电位通道6 缺氧性肺动脉高压 新生大鼠
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膜性肾病肾活检组织中TRPC6和podocalyxin表达改变及其意义 被引量：5
8
作者 李大勇 曹海霞 +3 位作者 范亚平 王锋 达展云 张天一 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期486-489,共4页
目的检测膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者肾活检组织中肾小球足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)和podocalyxin的表达和分布,探讨足细胞蛋白TRPC6和podocalyxin在MN蛋... 目的检测膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者肾活检组织中肾小球足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)和podocalyxin的表达和分布,探讨足细胞蛋白TRPC6和podocalyxin在MN蛋白尿发生中的作用。方法采用常规组织病理以及免疫组化检查,并行免疫荧光双套色染色于激光共聚焦显微镜下观察TRPC6、podocalyxin在各组肾组织中表达及分布的改变,以计算机图像分析系统进行半定量分析。结果对照组肾组织podocalyxin沿肾小球毛细血管壁连续均匀分布,阳性荧光信号表达强,MN组表达减弱,且分布不均或节段性缺失,部分呈点状、短线状不连续分布,肾病综合征组较非肾病综合征组减弱更明显;TRPC6在对照组肾小球有一定的表达,沿肾小球基膜呈均匀连续线型分布,MN组TRPC6荧光强度有不同程度增强,且呈点状、团块状不均匀分布,肾病综合征组较非肾病综合征组更明显。结论 TRPC6和podocalyxin在正常肾组织沿肾小球基膜呈连续线状均匀分布;MN患者肾小球内TRPC6表达增加,podocalyxin表达减少,且分布形式亦发生变化,提示TRPC6和podocalyxin等足细胞相关蛋白表达改变及分布异常可能是MN蛋白尿发生的重要病理机制。 展开更多
关键词 膜性肾病 蛋白尿 trpc6 PODOCALYXIN
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全反式维甲酸对肾小球硬化大鼠肾小球TRPC6表达的影响 被引量：4
9
作者 张磊 陈秀萍 +3 位作者 蒋玲 覃荷 于海绍 覃远汉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第23期3827-3831,共5页
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对大鼠肾小球瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分成假手术组、GS组、ATRA组,每组20只,干预12周后处死大鼠。电镜下观察肾小球超微结构改变。免疫组织化学方法检测... 目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对大鼠肾小球瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分成假手术组、GS组、ATRA组,每组20只,干预12周后处死大鼠。电镜下观察肾小球超微结构改变。免疫组织化学方法检测肾脏组织TRPC6、TGF-β1、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的蛋白分布及表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾脏组织TRPC6 mRNA的表达,免疫印迹法(WB)方法检测肾小球TRPC6的蛋白表达。结果 :与GS组相比,ATRA组大鼠GSI显著下降(P<0.01),肾小球TRPC6、TGF-β1、Col-Ⅳ的蛋白表达量显著下降,TRPC6的mRNA表达量显著下降(P<0.05)。结论:ATRA可能通过抑制肾小球TRPC6的表达而减轻GS进展。 展开更多
关键词 肾小球硬化 全反式维甲酸 trpc6 大鼠 阿霉素
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抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备及其识别抗原表位分析 被引量：3
10
作者 张萃 卢文菊 +4 位作者 李红枝 黄超贤 王华妹 丘世龙 梅俪凡 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期741-744,共4页
目的:制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫小鼠后经细胞融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞;单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型;间接ELISA法鉴定该单克隆抗体的特... 目的:制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫小鼠后经细胞融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞;单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型;间接ELISA法鉴定该单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力;采用生物信息学进行抗原表位预测,并通过ELISA单抗相加试验分析单抗识别抗原位点的差异性。结果:获得3株能稳定分泌抗TRPC6多肽的单抗杂交瘤细胞株,分别命名为A2、F11和H8;抗体Ig亚类均为IgG1型;染色体鉴定符合杂交瘤细胞的特性;3株单抗相对亲和力比较F11较强,A2和H8接近;抗体识别位点分析结果表明A2与H8、A2与F11的相加指数分别大于50%,可能识别的是不同位点;而F11与H8的相加指数小于50%,可能识别的是同一位点。结论:抗TRPC6多肽单克隆抗体的成功制备及其识别抗原表位分析,为TRPC6蛋白的相关研究提供物质基础。 展开更多
关键词 trpc6 单克隆抗体 抗原表位
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慢性炎性痛诱致小鼠焦虑样行为和前扣带回TRPC3和TRPC6通道的表达上调 被引量：4
11
作者 王旭 杜祎康 +3 位作者 吴文斌 王福东 罗层 白占涛 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期283-289,共7页
目的:探讨慢性炎性痛诱致小鼠焦虑样行为情况下前扣带回(anterior cingulate cortex,ACC)TRPC 3/6通道的表达改变。方法:采用小鼠痛行为检测方法、旷场行为检测方法和免疫印迹实验(Western Blot)。结果:小鼠后肢足底皮下注射完全弗氏佐... 目的:探讨慢性炎性痛诱致小鼠焦虑样行为情况下前扣带回(anterior cingulate cortex,ACC)TRPC 3/6通道的表达改变。方法:采用小鼠痛行为检测方法、旷场行为检测方法和免疫印迹实验(Western Blot)。结果:小鼠后肢足底皮下注射完全弗氏佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)建立慢性炎性痛模型。痛行为检测结果显示足底皮下注射CFA可以诱致小鼠产生长时程的机械性和热痛觉过敏现象。旷场实验可见CFA致炎致痛后的小鼠较正常小鼠在旷场中央区活动距离明显降低,停留时间明显减少,提示慢性炎性痛小鼠表现为显著的焦虑样行为。进一步采用Western Blot实验发现炎性痛焦虑样小鼠前扣带回脑区的TRPC3和TRPC6通道蛋白表达水平较对照组动物显著上调。结论:CFA引发的慢性炎性痛模型中,小鼠产生焦虑样情绪,TRPC3和TRPC6通道蛋白在ACC部位的蛋白表达水平明显升高。提示这些焦虑样痛情绪的发生与疼痛痛觉通路中ACC脑区的TRPC3及TRPC6表达密切相关。 展开更多
关键词 CFA 慢性炎性痛 焦虑样行为 ACC TRPC3 trpc6 小鼠
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附子、黄连寒热药性对体外足细胞增殖及TRPV4、TRPC6蛋白表达的影响 被引量：6
12
作者 王竹 孙万森 +1 位作者 李欣 李睿萍 《山西医科大学学报》 CAS 2017年第10期999-1002,共4页
目的研究附子、黄连寒热药性对体外足细胞增殖及TRPV4、TRPC6蛋白表达的影响。方法 MTT法检测足细胞增殖,实验分为:空白对照组、附子组和黄连组。附子组和黄连组加入不同浓度药液进行干预,并测定吸光值(A),计算细胞抑制率。检测TRPV4、T... 目的研究附子、黄连寒热药性对体外足细胞增殖及TRPV4、TRPC6蛋白表达的影响。方法 MTT法检测足细胞增殖,实验分为:空白对照组、附子组和黄连组。附子组和黄连组加入不同浓度药液进行干预,并测定吸光值(A),计算细胞抑制率。检测TRPV4、TRPC6蛋白试验中,实验分为:空白对照组、附子组和黄连组,其中附子组给予200μg/ml药液、黄连组给予800μg/ml药液,再加入含RPMI 1640培养基培养足细胞24 h。用Western blot法检测附子、黄连对TRPV4、TRPC6蛋白表达影响。结果 MTT的研究表明,黄连组中50,100,200,400,800μg/ml药液均可抑制足细胞生长增殖,且与浓度成正相关。附子在相对较低的质量浓度范围内(<200μg/ml),促进足细胞生长增殖,超过一定实验浓度时(>200μg/ml),抑制足细胞生长增殖。实验表明附子和黄连均可以上调TRPV4蛋白表达,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。而在TRPC6蛋白表达中,附子和黄连具有明显的下调TRPC6蛋白表达的作用,与空白对照组对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论附子、黄连这两种不同药性的中药均可以影响与肾脏病相关的蛋白TRPV4、TRPC6表达。 展开更多
关键词 寒热药性 TRPV4 trpc6
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中枢神经系统内的TRPC6离子通道 被引量：4
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作者 崔龙彪 金晓航 史娟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期565-570,共6页
TRPC6是TRP（transient receptor potential,TRP）基因超家族C亚家族（canonical）的成员之一,编码钙可通透的非选择性阳离子通道[1,2]。十余年来的研究证明TRPC6分子参与动物体内许多重要的生理和病理调节过程,如血管与气道平滑肌收缩... TRPC6是TRP（transient receptor potential,TRP）基因超家族C亚家族（canonical）的成员之一,编码钙可通透的非选择性阳离子通道[1,2]。十余年来的研究证明TRPC6分子参与动物体内许多重要的生理和病理调节过程,如血管与气道平滑肌收缩、肾小球滤过膜滤过功能、免疫和血液细胞调节等[3];该分子功能异常会导致高血压和局灶性节段性肾小球硬化[4,5]。 展开更多
关键词 trpc6 中枢神经系统 分布 功能
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Wnt5a/TRPC6在姜黄素拮抗肥胖相关肾小球病足细胞损伤中的机制探讨 被引量：4
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作者 刘雪姣 赵京 +5 位作者 王国勤 芮宏亮 杨敏 王艳艳 谌贻璞 程虹 《中国中西医结合肾病杂志》 2019年第12期1044-1047,共4页
目的:探讨Wnt5a/TRPC6/Ca 2+在姜黄素拮抗肥胖相关肾小球病(ORG)足细胞损伤中的作用及机制。方法:小鼠足细胞分为4组:对照组、瘦素刺激组、Wnt5a刺激组和姜黄素干预组。mRNA检测采用实时定量PCR方法,蛋白检测采用免疫印迹法。应用Fura 2... 目的:探讨Wnt5a/TRPC6/Ca 2+在姜黄素拮抗肥胖相关肾小球病(ORG)足细胞损伤中的作用及机制。方法:小鼠足细胞分为4组:对照组、瘦素刺激组、Wnt5a刺激组和姜黄素干预组。mRNA检测采用实时定量PCR方法,蛋白检测采用免疫印迹法。应用Fura 2-AM检测细胞内钙离子浓度。结果:(1)与对照组相比,瘦素刺激12 h后,Wnt5a、TRPC6的mRNA和蛋白的表达均显著增高,podocin、nephrin的mRNA和蛋白的表达均显著降低;与瘦素刺激组相比,姜黄素干预组中Wnt5a、TRPC6的mRNA和蛋白的表达均显著降低,podocin、nephrin的mRNA和蛋白的表达显著增高。(2)与对照组相比,Wnt5a刺激12 h后,TRPC6的mRNA和蛋白的表达均显著增高,podocin、nephrin的mRNA和蛋白的表达均显著降低。(3)与对照组相比,加入瘦素刺激后,从7 min开始足细胞内钙离子水平明显增多,至15 min时逐渐趋于平稳;而姜黄素干预组中,加入瘦素刺激后监测20 min,足细胞内钙离子浓度始终趋于平稳。结论:Wnt5a/TRPC6/Ca 2+通路活化是ORG足细胞损伤的重要机制之一,肾脏足细胞Wnt5a活化可以刺激TRPC6表达上调,致足细胞损伤;姜黄素可能通过抑制Wnt5a/TRPC6/Ca 2+通路的活化来拮抗ORG足细胞损伤。 展开更多
关键词 姜黄素 瘦素 肥胖相关性肾小球病 WNT5A trpc6 Ca2+ 通道
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Calcineurin和TRPC6参与ET-1诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖 被引量：1
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作者 王小闯 李满祥 +4 位作者 党晓燕 李萍 彭卓 高彦霞 古长维 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1191-1195,共5页
目的:探讨Calcineurin和瞬时感受器电位6(TRPC6)的相互作用以及对内皮素-1(ET-1)诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:以ET-1刺激肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)检测Calcineurin活性以及TRPC6的表达;分别于ET-1刺激前给予Calcineurin特... 目的:探讨Calcineurin和瞬时感受器电位6(TRPC6)的相互作用以及对内皮素-1(ET-1)诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:以ET-1刺激肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)检测Calcineurin活性以及TRPC6的表达;分别于ET-1刺激前给予Calcineurin特异性抑制剂环孢素A(CsA)和TRPC6 siRNA处理,测定Calcineurin活性、TRPC6的表达以及细胞的增殖情况;采用Calcineurin活性检测试剂盒检测其活性,Western blot和RT-PCR检测TRPC6的表达,MTT法检测PASMCs的增殖。结果:ET-1可激活原代培养的PASMCs中Calcineurin的活性,上调TRPC6的表达;CsA和TRPC6 siRNA可以分别降低TRPC6表达和Calcineurin活性;也可以抑制ET-1刺激的PASMCs增殖。结论:Calcineurin与TRPC6参与ET-1诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖并相互影响。 展开更多
关键词 CALCINEURIN NFAT信号通路 trpc6 ET-1 肺动脉平滑肌细胞
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加味猪苓汤对阿霉素肾病综合征大鼠TRPC6、CaN表达的影响 被引量：4
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作者 王永超 焦安钦 +3 位作者 郑世文 马营 李娟 马秀琴 《中国中西医结合肾病杂志》 2019年第6期520-522,共3页
目的:探讨加味猪苓汤对阿霉素肾病综合征大鼠肾组织中TRPC6、CaN表达的影响。方法:选取90只清洁级SD大鼠,适应性喂养1周后随机分为两组:健康组(30只)、模型组(60只)。采用阿霉素注射法建立肾病综合征大鼠模型,造模成功后,60只模型组大... 目的:探讨加味猪苓汤对阿霉素肾病综合征大鼠肾组织中TRPC6、CaN表达的影响。方法:选取90只清洁级SD大鼠,适应性喂养1周后随机分为两组:健康组(30只)、模型组(60只)。采用阿霉素注射法建立肾病综合征大鼠模型,造模成功后,60只模型组大再次随机分为模型对照组(30只)和实验组(30只)。健康组和模型对照组给予生理盐水灌胃,实验组给予加味猪苓汤颗粒灌胃,3周后检测24 h尿蛋白、血清胆固醇、白蛋白、尿素氮及血肌酐,处死大鼠后称取左肾质量,计算肥大指数;PAS染色观察肾小球直径、大鼠肾脏病理变化以及肾组织中TRPC6、CaN的表达。结果:与健康组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白定量、肾脏病理损害程度以及TRPC6、CaN的表达显著增加(P<0.01),血清白蛋白水平、体质量显著降低(P<0.01);与对照组比较,实验组大鼠24 h尿蛋白定量、肾脏病理损害程度以及TRPC6、CaN的表达显著降低(P<0.01),血清白蛋白水平、体质量显著升高(P<0.01)。结论:加味猪苓汤可以改善肾功能、降低尿蛋白,减轻肾脏病理损害,具有一定的肾脏保护功能,其机制可能是通过降低肾组织中TRPC6、CaN的表达有关。 展开更多
关键词 肾病综合征 加味猪苓汤 trpc6 CAN 实验研究
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TRPC6在肺部的生理与病理生理功能 被引量：3
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作者 周丽芬 陈庆梓 李建华 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期77-80,F0003,共5页
经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道是一类非选择性钙离子通道,TRPC6是TRPC家族的成员之一,其基因编码的蛋白在人体脑、肾、肝和肺等多个器官均有表达。TRPC6不仅是肺中表达最丰富的TRPC通道,也是目前... 经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道是一类非选择性钙离子通道,TRPC6是TRPC家族的成员之一,其基因编码的蛋白在人体脑、肾、肝和肺等多个器官均有表达。TRPC6不仅是肺中表达最丰富的TRPC通道,也是目前肺部疾病中研究最多的TRPC通道。TRPC6参与动物体内许多重要的生理和病理调节过程,TRPC6的基因突变或过表达可引起胞内钙离子信号通路异常,从而导致多种病理生理改变。肺部疾病的病理生理过程有多种细胞共同参与。TRPC6在不同的细胞中表达不同,表现的生理与病理生理功能则有差异。 展开更多
关键词 trpc6 肺脏 细胞 功能
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敲除TRPC6对MPTP诱导小鼠神经炎性损伤的影响 被引量：2
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作者 王淑贞 尹红 +2 位作者 钟耀艺 范伟伟 林庚海 《中国比较医学杂志》 北大核心 2017年第12期1-7,共7页
目的在小鼠MPTP(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine)诱导的神经炎症模型中检测小胶质细胞的TRPC6通道的表达,并探究TRPC6通道对于炎症表达和多巴胺能神经元损伤的影响。方法在MPTP注射的小鼠中,用标记CD11b的磁珠分选出黑... 目的在小鼠MPTP(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine)诱导的神经炎症模型中检测小胶质细胞的TRPC6通道的表达,并探究TRPC6通道对于炎症表达和多巴胺能神经元损伤的影响。方法在MPTP注射的小鼠中,用标记CD11b的磁珠分选出黑质区域的小胶质细胞,并通过蛋白质免疫印迹的方法检测TRPC6的表达。在构建CD11b-TRPC6^(-/-)小鼠后,通过免疫荧光的方法检测MPTP诱导的小胶质细胞的增殖以及多巴胺能神经元的损伤。同时结合蛋白质免疫印迹和实时荧光定量PCR的方法,在MPTP模型中检测TRPC6敲除后cryαB蛋白水平和炎症因子表达。结果在MPTP注射的小鼠中,小胶质细胞中TRPC6通道的表达显著上调。另外,在注射MPTP的CD11b-TRPC6^(-/-)小鼠中,小胶质细胞中的cryαB蛋白水平被上调。同时,MPTP诱导的小胶质细胞的增殖以及炎症因子表达增强被抑制,而多巴胺能神经元的损伤得到缓解。结论小胶质细胞中TRPC6通道表达在MPTP模型中上调,而TRPC6的敲除可增加小胶质细胞中cryαB蛋白水平,并降低炎症因子的表达,从而减少多巴胺能神经元的损伤。 展开更多
关键词 小胶质细胞 trpc6通道 炎症 MPTP 多巴胺能神经元 帕金森病
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益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠肾组织TRPC6、RhoA表达的影响 被引量：15
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作者 宋纯东 喻青 吴晨晨 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2017年第11期2738-2740,I0001,共4页
目的:探讨益气养阴活血方对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织TRPC6、RhoA表达的影响。方法:大鼠喂养1周后分为3组:空白组、模型组、中药组。建立DN大鼠模型,造模成功后空白组和模型组灌服生理盐水,中药组灌服益气养阴活血方颗粒,8周后生化检测2... 目的:探讨益气养阴活血方对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织TRPC6、RhoA表达的影响。方法:大鼠喂养1周后分为3组:空白组、模型组、中药组。建立DN大鼠模型,造模成功后空白组和模型组灌服生理盐水,中药组灌服益气养阴活血方颗粒,8周后生化检测24 h尿蛋白、血肌酐(Scr)、谷丙转氨酶(ALT)、血脂(TC、TG)、空腹血糖(FBG)等;测量肾小球直径,称取左肾重量、计算肥大指数;PAS染色观察大鼠肾脏病理;免疫组化检测肾组织TRPC6、RhoA表达。结果:益气养阴活血方能够降低实验大鼠肾组织TRPC6、RhoA的表达,减少24 h尿蛋白,升高ALB,缩小肾小球直径,改善大鼠体质量及肾脏病理,保护足细胞,降低肥大指数及血脂、血糖。结论:益气养阴活血方可能通过影响DN大鼠肾组织TRPC6、RhoA的表达,而改善上述生化指标,减轻肾脏病理损害,并对肝、肾功能未见明显损害。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 益气养阴活血方 trpc6/RhoA 实验研究
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1,25(OH)_2D_3抑制嘌呤霉素氨基核苷诱导的肾病大鼠TRPC6的表达 被引量：1
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作者 肖厚勤 费沛 +4 位作者 陈新河 胡兆雄 张永 刘双信 史伟 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第5期667-673,共7页
目的观察1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠肾脏TRPC6表达的影响。方法大鼠随机分为对照组(Con)、模型组(Mod)和1,25(OH)2D3治疗组(Vit D),每组n=10。Mod组和Vit D组每10天尾静脉注射PAN 100 mg/kg建立PA... 目的观察1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠肾脏TRPC6表达的影响。方法大鼠随机分为对照组(Con)、模型组(Mod)和1,25(OH)2D3治疗组(Vit D),每组n=10。Mod组和Vit D组每10天尾静脉注射PAN 100 mg/kg建立PAN肾病模型。Vit D组每天给予1,25(OH)2D30.2μg/kg灌胃。在1和3月时分两批处死动物,检测24 h尿蛋白、肾功能、血脂和血浆蛋白;PAS染色和透射电镜观察肾组织学改变;RT-PCR、激光共聚焦检测TRPC6、synaptopodin及nephrin的表达和分布。结果 PAN肾病大鼠逐渐出现大量蛋白尿、大量腹水、高脂血症和低蛋白血症肾病综合征的表现。病理呈现肾间质水肿、炎性细胞浸润、大量的蛋白管型及局灶节段性肾小球硬化、肾小管萎缩和纤维化。与Mod组大鼠比较Vit D组大鼠24 h尿蛋白显著减少[1月时,(338±120)mg vs(669±142)mg,3月时(432±83)mg vs(601±95)mg,P<0.01],肾小球硬化指数显著减轻[(2.3+0.6)vs(3.4+0.4),P<0.01],肾功能改善[Cr(40.2±3.4)μmol/L vs(53.4±6.3)μmol/L,BNU(9.4±3.0)mmol/L vs(17.3±2.9)mmol/L,P<0.01];激光共聚焦显示PAN大鼠TRPC6表达显著升高并与synaptopodin高度融合,Nephrin mRNA的表达显著降低;与Mod组大鼠比Vit D组大鼠TRPC6 mRNA显著降低,nephrin的表达显著升高[在1月时,(0.42±0.10)vs(0.75±0.14);在3月时(0.35±0.07)vs(0.68±0.10),P<0.01],Nephrin mRNA[在1月时(0.81±0.19)vs(0.33±0.09);在3月时(0.77±0.10)vs(0.44±0.10),P<0.01]。结论 1,25(OH)2D3通过抑制PAN肾病大鼠TRPC6的表达来发挥肾脏保护作用。 展开更多
关键词 足细胞 1 25-二羟维生素D3 嘌呤霉素氨基核苷 trpc6
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