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Trpc4在原代培养的大鼠肾小球系膜细胞的定位表达 被引量:1
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作者 王筱霞 姚兴梅 汪年松 《中国中西医结合肾病杂志》 2010年第12期1054-1056,1138,共4页
目的:研究Trpc4原代培养的肾小球系膜细胞中的定位表达。方法:以用筛网法分离大鼠肾小球,培养于添加了20%胎牛血清的DMEM培养液中,倒置显微镜下观察纯化的系膜细胞的形态,电镜下观察细胞的微丝结构;采用免疫荧光检测Trpc4的表达。超速... 目的:研究Trpc4原代培养的肾小球系膜细胞中的定位表达。方法:以用筛网法分离大鼠肾小球,培养于添加了20%胎牛血清的DMEM培养液中,倒置显微镜下观察纯化的系膜细胞的形态,电镜下观察细胞的微丝结构;采用免疫荧光检测Trpc4的表达。超速离心法分别提取胞浆和胞膜蛋白,通过Western blot,检测Trpc4在胞膜和胞浆的表达。结果:系膜细胞主要呈梭形,电镜下可见胞浆内微丝结构丰富;胞浆和胞膜均有Trpc4表达,但胞膜表达丰度明显高于胞浆。结论:原代培养的大鼠肾小球系膜细胞表达Trpc4,且主要分布于细胞膜。 展开更多
关键词 系膜细胞 鉴定 trpc4 表达
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实时定量PCR检测镉对人肝癌细胞SMMC-7721中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的影响
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作者 刘颖 孙世龙 +5 位作者 刘晓梅 杜海英 金明华 李鹏 凌翎 孙志伟 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期584-586,共3页
目的:观察氯化镉(CdCl2)处理后人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的改变,在mRNA水平探讨镉对肝癌细胞钙通道的影响。方法:以人肝癌细胞株SMMC-7721为研究模型,细胞暴露于氯化镉终浓度为0、5、10、20、30及40μmol.L-1的培养液... 目的:观察氯化镉(CdCl2)处理后人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的改变,在mRNA水平探讨镉对肝癌细胞钙通道的影响。方法:以人肝癌细胞株SMMC-7721为研究模型,细胞暴露于氯化镉终浓度为0、5、10、20、30及40μmol.L-1的培养液中24 h。采用SYBR荧光实时定量PCR法检测TRPC1和TRPC4 mRNA表达,相对定量采用比较CT值法。结果:随着剂量的增加,TRPC1 mRNA表达有降低的趋势,除20μmol.L-1组外,各组mRNA表达均高于对照组(P<0.01);TRPC4 mRNA表达有先增高后降低的趋势,5、10和30μmol.L-1组mRNA表达均高于对照组(P<0.01)。2个基因均在低剂量(5和10μmol.L-1)组表达增加幅度较大(P<0.01)。结论:低剂量镉可显著增加人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4的表达,镉可在mRNA水平对SMMC-7721细胞钙通道产生影响。 展开更多
关键词 SMMC-7721 TRPC1 trpc4
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缺血再灌注后脑组织中TRPC4 mRNA水平的变化
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作者 高艳琴 高慧 +2 位作者 陆世铎 汪杨 孙凤艳 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期280-283,共4页
目的 在建立的大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血 (MCAO)模型上 ,观察脑组织不同部位瞬间受体电位通道蛋白 4 (TRPC4 ,TransientReceptorPotentialChannel 4 )mRNA表达的变化 ,以说明TRPC4可能参与缺血后再灌注引起的神经细胞损伤。方法 动... 目的 在建立的大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血 (MCAO)模型上 ,观察脑组织不同部位瞬间受体电位通道蛋白 4 (TRPC4 ,TransientReceptorPotentialChannel 4 )mRNA表达的变化 ,以说明TRPC4可能参与缺血后再灌注引起的神经细胞损伤。方法 动物分为缺血后再灌注 6h、12h、1d、3d及假手术对照组 ,断头取脑后分别提取纹状体、海马及皮层各部位的总RNA ,采用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)一步法 ,并以 β actin为内参 ,检测TRPC4mRNA的表达。结果 结果显示 ,TRPC4mRNA在纹状体、海马中有强表达 ,而在皮层中有弱表达。缺血组同侧纹状体TRPC4mRNA表达与对照组相比显著增加 (P <0 .0 0 5 ) ,其中 12h组同侧达到最高 ;在海马区 ,结果与纹状体完全相似 (P <0 .0 0 0 1)。结论 TRPC4为Ca2 + 通道蛋白 ,在脑缺血时 ,TRPC4mRNA随之出现变化 。 展开更多
关键词 缺血再灌注 脑组织 trpc4 MRNA RT—PCR
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大鼠Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG质粒的构建、基因结构分析及鉴定
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作者 况春燕 杨藩 《贵州医科大学学报》 CAS 2017年第2期130-135,共6页
目的:大鼠Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG基因重组表达质粒的构建及其基因结构分析。方法:通过UCSC(http://genome.ucsc.Edu/)分析大鼠瞬时受体电位通道4(TRPC4)及其家族基因组结构,并通过NCBI确定了TRPC4的蛋白结构域,通过Bio GPS(http... 目的:大鼠Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG基因重组表达质粒的构建及其基因结构分析。方法:通过UCSC(http://genome.ucsc.Edu/)分析大鼠瞬时受体电位通道4(TRPC4)及其家族基因组结构,并通过NCBI确定了TRPC4的蛋白结构域,通过Bio GPS(http://biogps.org/#goto=welcome)分析其表达模式;PCR扩增大鼠TRPC4蛋白编码区域(CDS),并通过限制性内切酶与穿梭载体pDOV-mCMV-MCS-EGFP-3FLAG进行连接,其产物转化细菌感受态细胞;挑取阳性克隆进行菌落PCR鉴定,并对阳性克隆进行测序验证,测序正确的克隆即为目的质粒,命名为pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG;将该质粒转染HEK293细胞进行腺病毒包装,并命名为Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG,通过Western blot验证蛋白的表达。结果:生物学分析发现TRPC4蛋白保守的TRP-2、ANK及TRP结构域,通过Bio GPS分析发现TRPC4在杏仁核和海马中表达明显,在血管内皮细胞中也有表达;PCR克隆获得3 000 bp的TRPC4 CDS序列,CDS被亚克隆到表达载体pDOV-mCMVMCS-EGFP-3FLAG中,酶切鉴定及测序验证正确;进行腺病毒包装后的病毒可以在HEK293细胞中表达TRPC4-EGFP-3FLAG融合蛋白,Western blot证实其为含flag标签的蛋白且大小为128 KDa。结论:成功构建了大鼠TRPC4的腺病毒表达载体Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG。 展开更多
关键词 质粒 Ad-pDOV-mCMV-MCS-EGFP-3FLAG 瞬时受体电位通道4 大鼠 腺病毒 基因结构
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抑制差减杂交克隆肺泡发育上游调节基因 被引量:1
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作者 赵立青 Thiennu H.Vu 《分子细胞生物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第6期553-562,共10页
肺泡是肺进行气体交换的基本功能单位,但对其发生、发育及调节机制的认识还十分有限。为克隆调节肺泡发生的新基因,我们利用抑制差减杂交技术,以与肺泡发生密切相关的原始肺泡期和肺泡期的小鼠肺为材料,分别相对于肺泡成熟期鼠肺组织构... 肺泡是肺进行气体交换的基本功能单位,但对其发生、发育及调节机制的认识还十分有限。为克隆调节肺泡发生的新基因,我们利用抑制差减杂交技术,以与肺泡发生密切相关的原始肺泡期和肺泡期的小鼠肺为材料,分别相对于肺泡成熟期鼠肺组织构建了两个抑制差减杂交cDNA文库,从中筛选出118个肺泡发生的上游因子。这些基因涉及机体生长发育过程及其调节的多个方面。如可增加内皮细胞渗透性而参与肺血管系统的发生和重建的瞬时受体蛋白(TRPC4),通过刺激平滑肌生长促进肺泡壁毛细血管的发育凝集素(Lgalsl)等。特别是神经元蛋白3.1(亦称P311),因其同时特异表达于原始肺泡期和肺泡期而引起我们的注意。实时PCR进一步显示,P311表达于肺发育的全过程,但表达高峰仅出现于肺泡发育相关阶段,而在成熟肺组织中降至最低点。提示P311可能与肺泡形成密切相关。 展开更多
关键词 肺泡发育 抑制差减杂交 P311 Lgals1 trpc4
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瞬时感受器电位C4离子通道及其调节剂的研究进展 被引量:1
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作者 潘雯 张仰明 +1 位作者 吕伟 南发俊 《生命的化学》 CAS CSCD 2015年第4期483-490,共8页
瞬时感受器电位C4(transient receptor potential canonical 4,TRPC4)离子通道是一类可调节细胞内钙离子浓度的非特异性阳离子通道,主要分布于神经系统和心血管系统,通过受体操控和钙库操控方式调控Ca2+内流,与多种生理病理过程密切相... 瞬时感受器电位C4(transient receptor potential canonical 4,TRPC4)离子通道是一类可调节细胞内钙离子浓度的非特异性阳离子通道,主要分布于神经系统和心血管系统,通过受体操控和钙库操控方式调控Ca2+内流,与多种生理病理过程密切相关。本文主要对TRPC4的激活机制、生理功能及其调节剂的前沿研究进展进行综述。 展开更多
关键词 TRPC trpc4 钙库操控的钙内流 调节剂
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大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后纹状体和海马区瞬时受体电位通道蛋白4的表达增加 被引量:4
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作者 高艳琴 高慧 +2 位作者 周正怡 陆世铎 孙凤艳 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期153-157,共5页
实验在大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血(middle cerebral arterv occlusion,MCAO)模型上采用Western Blot方法检测脑缺血再灌注不同时程(6h、12h、1d、3d)脑组织中瞬时受体电位通道蛋白4(transient receptor potential channel4,TRPC4)的表... 实验在大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血(middle cerebral arterv occlusion,MCAO)模型上采用Western Blot方法检测脑缺血再灌注不同时程(6h、12h、1d、3d)脑组织中瞬时受体电位通道蛋白4(transient receptor potential channel4,TRPC4)的表达情况,并与正常对照组相比,结果显示,12 h、1 d、3 d组纹状体、海马区域TRPC4含量明显高于正常组(P<0.05)。采用免疫组织化学定位检测,显示TRPC4主要表达在神经元细胞膜上;免疫组化阳性细胞统计分析显示,在不同时程缺血组中纹状体、海马区域TRPC4的表达与正常组相比有所增加,其中纹状体、海马区缺血再灌注1 d、3 d组缺血同侧1RPC4阳性细胞升高显著(P<0.05)。脑缺血再灌注损伤后TRPC4相对含量增加,提示TRPC4可能参与脑缺血引起的急性和迟发性神经元损伤。 展开更多
关键词 神经生物学 脑缺血 瞬时受体电位通道蛋白4 免疫组化 Western BLOT
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Canonical transient receptor potential 4 and its small molecule modulators 被引量:4
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作者 FU Jie GAO ZhaoBing +1 位作者 SHEN Bing ZHU Michael X. 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2015年第1期39-47,共9页
Canonical transient receptor potential 4(TRPC4) forms non-selective cation channels that contribute to phospholipase C-dependent Ca2+ entry into cells following stimulation of G protein coupled receptors and receptor ... Canonical transient receptor potential 4(TRPC4) forms non-selective cation channels that contribute to phospholipase C-dependent Ca2+ entry into cells following stimulation of G protein coupled receptors and receptor tyrosine kinases.Moreover,the channels are regulated by pertussis toxin-sensitive Gi/o proteins,lipids,and various other signaling mechanisms.TRPC4-containing channels participate in the regulation of a variety of physiological functions,including excitability of both gastrointestinal smooth muscles and brain neurons.This review is to present recent advances in the understanding of physiology and development of small molecular modulators of TRPC4 channels. 展开更多
关键词 trpc4 channel non-selective cation channel G protein coupled receptors small molecular modulators G proteins EXCITATION CONTRACTION Ca2+ signaling
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