目的本研究旨在探讨姜黄素对结肠癌RKO细胞增殖的抑制作用及其机制,重点关注三结构域蛋白2(tripartite motif-containing protein 2,TRIM2)表达和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的调控。方法通过...目的本研究旨在探讨姜黄素对结肠癌RKO细胞增殖的抑制作用及其机制,重点关注三结构域蛋白2(tripartite motif-containing protein 2,TRIM2)表达和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的调控。方法通过分析计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,确定实验姜黄素给药浓度。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)法检测RKO细胞和人正常肠黏膜细胞(fetal human colon,FHC)中TRIM2表达水平。通过蛋白质免疫印迹实验(Western blotting,WB)检测姜黄素处理后RKO细胞中TRIM2及敲减TRIM2后RKO细胞mTOR通路相关蛋白表达情况。利用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)检测姜黄素处理、TRIM2敲减及mTOR信号通路激活剂对RKO细胞增殖的影响。结果TRIM2在RKO细胞中异常高表达。姜黄素可降低RKO细胞TRIM2表达,敲减TRIM2后RKO细胞mTOR信号通路相关蛋白表达下调。姜黄素和TRIM2敲减均显著抑制RKO细胞增殖,而mTOR信号通路激活剂可逆转这种抑制作用。结论姜黄素通过下调TRIM2表达调控mTOR信号通路抑制结肠癌RKO细胞增殖。展开更多
目的:探究TRIM2通过泛素化修饰PKM2调控肝癌细胞糖酵解的机制。方法:TCGA和CPTAC数据库分析TRIM2基因及蛋白表达水平,并结合病人生存状态进行相关性分析。构建HepG2-shNC和HepG2-shTRIM2细胞株,细胞能量代谢仪检测两组细胞胞外酸化率和...目的:探究TRIM2通过泛素化修饰PKM2调控肝癌细胞糖酵解的机制。方法:TCGA和CPTAC数据库分析TRIM2基因及蛋白表达水平,并结合病人生存状态进行相关性分析。构建HepG2-shNC和HepG2-shTRIM2细胞株,细胞能量代谢仪检测两组细胞胞外酸化率和耗氧率,并测定细胞葡萄糖吸收率、乳酸产生量、ATP水平。免疫共沉淀验证TRIM2和PKM2在HepG2、HEK293T细胞中相互作用,免疫荧光检测PKM2和TRIM2共定位。免疫共沉淀检测在HepG2/HEK293T细胞中敲低/过表达TRIM2后PKM2的泛素化修饰水平,体外酶催化反应检测在HepG2/HEK293T细胞中敲低/过表达TRIM2后PKM2酶活性。Transwell小室法检测HepG2-shNC和HepG2-shTRIM2细胞侵袭和迁移能力。皮下移植瘤实验检测HepG2-shNC和HepG2-shTRIM2细胞体内成瘤能力。结果:TCGA和CPTAC数据库分析发现TRIM2在肝癌组织中mRNA及蛋白表达水平均升高,高TRIM2表达预示差的患者生存状态。TRIM2表达水平与糖酵解通路相关性高,敲低TRIM2可抑制HepG2胞外酸化率,提高耗氧率,细胞葡萄糖吸收率[(100.0000±2.0000)%vs(46.6667±8.1445)%]、乳酸产生量[(99.0000±3.6055)%vs(43.6667±10.01665)%]、ATP水平[(97.0000±3.6055)%vs(57.3333±6.6583)%]均显著下调。TRIM2与PKM2在HepG2细胞中相互作用且蛋白共定位。TRIM2抑制后HepG2细胞中PKM2泛素化水平升高,PKM2酶活性降低;在HEK293T细胞中表达Myc-TRIM2,下调PKM2蛋白泛素化修饰水平,提高PKM2酶活性。敲低TRIM2抑制HepG2细胞侵袭能力(1 vs 0.5067±0.1168)、迁移能力(1 vs 0.5133±0.08622),抑制细胞体内成瘤体积[(529.3333±29.28026)mm 3 vs(281.6667±25.6969)mm 3]和重量[(360.3333±42.7161)mg vs(172.1667±50.2849)mg]。结论:TRIM2在肝癌组织中高表达,通过去泛素化修饰PKM2促进其酶活性,进而调控肿瘤细胞糖酵解能力。展开更多
Photosensitivity behavior of H2-loaded silica fiber was modeled by rate equations for activated particles. The theoretical deductions give a close explanation to experimental phenomena on post-exposure growth in fiber...Photosensitivity behavior of H2-loaded silica fiber was modeled by rate equations for activated particles. The theoretical deductions give a close explanation to experimental phenomena on post-exposure growth in fiber gratings.展开更多
文摘目的:探究TRIM2通过泛素化修饰PKM2调控肝癌细胞糖酵解的机制。方法:TCGA和CPTAC数据库分析TRIM2基因及蛋白表达水平,并结合病人生存状态进行相关性分析。构建HepG2-shNC和HepG2-shTRIM2细胞株,细胞能量代谢仪检测两组细胞胞外酸化率和耗氧率,并测定细胞葡萄糖吸收率、乳酸产生量、ATP水平。免疫共沉淀验证TRIM2和PKM2在HepG2、HEK293T细胞中相互作用,免疫荧光检测PKM2和TRIM2共定位。免疫共沉淀检测在HepG2/HEK293T细胞中敲低/过表达TRIM2后PKM2的泛素化修饰水平,体外酶催化反应检测在HepG2/HEK293T细胞中敲低/过表达TRIM2后PKM2酶活性。Transwell小室法检测HepG2-shNC和HepG2-shTRIM2细胞侵袭和迁移能力。皮下移植瘤实验检测HepG2-shNC和HepG2-shTRIM2细胞体内成瘤能力。结果:TCGA和CPTAC数据库分析发现TRIM2在肝癌组织中mRNA及蛋白表达水平均升高,高TRIM2表达预示差的患者生存状态。TRIM2表达水平与糖酵解通路相关性高,敲低TRIM2可抑制HepG2胞外酸化率,提高耗氧率,细胞葡萄糖吸收率[(100.0000±2.0000)%vs(46.6667±8.1445)%]、乳酸产生量[(99.0000±3.6055)%vs(43.6667±10.01665)%]、ATP水平[(97.0000±3.6055)%vs(57.3333±6.6583)%]均显著下调。TRIM2与PKM2在HepG2细胞中相互作用且蛋白共定位。TRIM2抑制后HepG2细胞中PKM2泛素化水平升高,PKM2酶活性降低;在HEK293T细胞中表达Myc-TRIM2,下调PKM2蛋白泛素化修饰水平,提高PKM2酶活性。敲低TRIM2抑制HepG2细胞侵袭能力(1 vs 0.5067±0.1168)、迁移能力(1 vs 0.5133±0.08622),抑制细胞体内成瘤体积[(529.3333±29.28026)mm 3 vs(281.6667±25.6969)mm 3]和重量[(360.3333±42.7161)mg vs(172.1667±50.2849)mg]。结论:TRIM2在肝癌组织中高表达,通过去泛素化修饰PKM2促进其酶活性,进而调控肿瘤细胞糖酵解能力。
文摘Photosensitivity behavior of H2-loaded silica fiber was modeled by rate equations for activated particles. The theoretical deductions give a close explanation to experimental phenomena on post-exposure growth in fiber gratings.
