目的:初步探讨肺鳞癌中tRF-5009的表达水平及其通过靶向抑制BMP4对肺癌细胞恶性增殖的影响。方法:通过tRFexplorer数据库分析肺癌中差异表达的tRNA来源的小RNA(tRNA-derived small RNAs,tsRNAs),并通过逆转录PCR在肺癌组织样本中进行验...目的:初步探讨肺鳞癌中tRF-5009的表达水平及其通过靶向抑制BMP4对肺癌细胞恶性增殖的影响。方法:通过tRFexplorer数据库分析肺癌中差异表达的tRNA来源的小RNA(tRNA-derived small RNAs,tsRNAs),并通过逆转录PCR在肺癌组织样本中进行验证;CCK8实验检测肺癌细胞增殖能力;OncotRF网站预测tRF-5009下游靶基因;KEGG分析tRF-5009下游靶基因参与的信号通路;UALCAN数据库分析BMP4在肺癌中的表达水平;Western Blot检测BMP4表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测tRF-5009与BMP4的结合能力。结果:tRFexplorer数据库分析和逆转录PCR结果显示,tRF-5009在肺癌组织中表达水平显著上调(P<0.05);tRF-5009模拟物能够显著升高tRF-5009的表达水平(P<0.05),显著促进肺癌细胞的增殖能力;OncotRF网站预测和KEGG分析结果显示tRF-5009下游基因与有丝分裂密切相关;Western Blot检测结果显示tRF-5009能够显著抑制肺癌细胞中BMP4表达水平(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示tRF-5009与BMP4的5'UTR区结合。UALCAN数据库分析结果显示BMP4在肺癌中表达水平下调(P<0.05),且与肺癌进展密切相关。结论:tRF-5009在肺癌中异常高表达,能够通过直接靶向BMP4促进肺癌细胞恶性增殖,是肺癌潜在的早期诊疗分子标志物。展开更多
目的:构建表达端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因小干扰RNA(siRNA-TRF2)的腺病毒表达载体(rAd-shRNA-TRF2),并检测该载体对人乳腺癌(MCF-7)细胞TRF2基因表达的沉默效应。方法:采用同源重组法构建重组腺病毒rAd-shRNA-TRF2表达载体,鉴定...目的:构建表达端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因小干扰RNA(siRNA-TRF2)的腺病毒表达载体(rAd-shRNA-TRF2),并检测该载体对人乳腺癌(MCF-7)细胞TRF2基因表达的沉默效应。方法:采用同源重组法构建重组腺病毒rAd-shRNA-TRF2表达载体,鉴定正确后转染MCF-7细胞,用FQ-RT-PCR和Western blot检测转染后48 h TRF2基因的表达,MTT法和克隆形成实验检测细胞生长状况。结果:重组腺病毒rAd-shRNA-TRF2包装成功,转染MCF-7细胞后,TRF2基因的表达明显被抑制,细胞生长显著抑制,细胞克隆形成能力显著下降。结论:腺病毒介导的TRF2 RNAi表达载体rAd-shRNA-TRF2构建成功,可有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞TRF2基因的表达,抑制细胞生长。展开更多
文摘目的:初步探讨肺鳞癌中tRF-5009的表达水平及其通过靶向抑制BMP4对肺癌细胞恶性增殖的影响。方法:通过tRFexplorer数据库分析肺癌中差异表达的tRNA来源的小RNA(tRNA-derived small RNAs,tsRNAs),并通过逆转录PCR在肺癌组织样本中进行验证;CCK8实验检测肺癌细胞增殖能力;OncotRF网站预测tRF-5009下游靶基因;KEGG分析tRF-5009下游靶基因参与的信号通路;UALCAN数据库分析BMP4在肺癌中的表达水平;Western Blot检测BMP4表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测tRF-5009与BMP4的结合能力。结果:tRFexplorer数据库分析和逆转录PCR结果显示,tRF-5009在肺癌组织中表达水平显著上调(P<0.05);tRF-5009模拟物能够显著升高tRF-5009的表达水平(P<0.05),显著促进肺癌细胞的增殖能力;OncotRF网站预测和KEGG分析结果显示tRF-5009下游基因与有丝分裂密切相关;Western Blot检测结果显示tRF-5009能够显著抑制肺癌细胞中BMP4表达水平(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示tRF-5009与BMP4的5'UTR区结合。UALCAN数据库分析结果显示BMP4在肺癌中表达水平下调(P<0.05),且与肺癌进展密切相关。结论:tRF-5009在肺癌中异常高表达,能够通过直接靶向BMP4促进肺癌细胞恶性增殖,是肺癌潜在的早期诊疗分子标志物。
文摘目的:构建表达端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因小干扰RNA(siRNA-TRF2)的腺病毒表达载体(rAd-shRNA-TRF2),并检测该载体对人乳腺癌(MCF-7)细胞TRF2基因表达的沉默效应。方法:采用同源重组法构建重组腺病毒rAd-shRNA-TRF2表达载体,鉴定正确后转染MCF-7细胞,用FQ-RT-PCR和Western blot检测转染后48 h TRF2基因的表达,MTT法和克隆形成实验检测细胞生长状况。结果:重组腺病毒rAd-shRNA-TRF2包装成功,转染MCF-7细胞后,TRF2基因的表达明显被抑制,细胞生长显著抑制,细胞克隆形成能力显著下降。结论:腺病毒介导的TRF2 RNAi表达载体rAd-shRNA-TRF2构建成功,可有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞TRF2基因的表达,抑制细胞生长。
