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超高效液相色谱-串联质谱法同时测定蜂蜜中雷公藤和乌头类10种植物毒素
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作者 李文廷 叶沛 +5 位作者 刘玲 申颖 李洁 陶蓉蓉 余俊娥 蒋孟圆 《食品安全质量检测学报》 2025年第8期84-92,共9页
目的建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定蜂蜜中雷公藤类、乌头类10种植物毒素的方法。方法样品采用1%甲酸水-70%乙腈水溶液涡旋提取,经高速离心后,取上清液加入适量N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA),振荡混匀,过0.22μm滤... 目的建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定蜂蜜中雷公藤类、乌头类10种植物毒素的方法。方法样品采用1%甲酸水-70%乙腈水溶液涡旋提取,经高速离心后,取上清液加入适量N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA),振荡混匀,过0.22μm滤膜,上机测定分析,采取基质工作曲线,外标法定量。结果10种植物毒素的检出限为0.03~1.90μg/kg。10种植物毒素在一定的质量浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999。3种不同浓度加标水平下,植物毒素的平均加标回收率范围为89.5%~113.8%,相对标准偏差为0.5%~8.7%。结论该测定方法操作便捷、灵敏度高,准确性强,为应急事件中植物毒素快速筛查提供技术支持,适用于实验室对蜂蜜样品特别是批量样品中多种植物毒素的同时测定分析。 展开更多
关键词 植物毒素 雷公藤类毒素 乌头类毒素 蜂蜜 超高效液相色谱-串联质谱法
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产气荚膜梭菌毒素疫苗研究进展
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作者 王东 张思雨 +1 位作者 丁雅文 曾瑾 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期910-917,共8页
产气荚膜梭菌是一种引起人类和动物肠道感染和组织坏死的重要食源性病原体,致死因子是其产生的多种外毒素。合理使用抗菌药物及健康养殖需求的增加使疫苗预防更为重要。然而,传统的产气荚膜梭菌外毒素疫苗可能存在效果不稳定及残留毒素... 产气荚膜梭菌是一种引起人类和动物肠道感染和组织坏死的重要食源性病原体,致死因子是其产生的多种外毒素。合理使用抗菌药物及健康养殖需求的增加使疫苗预防更为重要。然而,传统的产气荚膜梭菌外毒素疫苗可能存在效果不稳定及残留毒素和甲醛等问题,引发了人们对这些疫苗安全性的担忧。该文系统介绍了产气荚膜梭菌的传统类毒素疫苗、基因工程重组疫苗及基于反向疫苗学和免疫信息学设计的表位肽疫苗最新研究进展,为研发制备有效、安全的新型产气荚膜梭菌毒素疫苗提供新思路。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 毒素 流行病学 类毒素疫苗 重组疫苗
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基于中和抗体的白喉疫苗中类毒素含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立、验证及初步应用
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作者 蔡梦瑶 朱德武 +4 位作者 陈雯 刘宏博 唐荣兴 付烈 李喆 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第12期1518-1523,共6页
目的 建立基于中和抗体的白喉类毒素(diphtheria toxoid,DTd)功能性抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用,以用于DTd生产过程中的质量分析。方法 采用方阵滴定法确定双抗体夹心ELISA方法中抗白喉毒素(diphtheria toxin... 目的 建立基于中和抗体的白喉类毒素(diphtheria toxoid,DTd)功能性抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证及初步应用,以用于DTd生产过程中的质量分析。方法 采用方阵滴定法确定双抗体夹心ELISA方法中抗白喉毒素(diphtheria toxin,DTx)包被抗体和检测抗体的浓度,建立线性标准曲线,参照《中国药典》四部(2020版)要求对方法进行验证,并初步应用于DTd原液检测。结果 双抗体夹心ELISA检测方法的最佳包被抗体浓度为5μg/mL,检测抗体稀释比例为1∶5 000,线性检测范围为0.000 781~0.012 5 Lf/mL(r> 0.99)。该方法与百日咳类毒素(pertussis toxoid,PTd)、百日咳丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)、百日咳黏附素(pertactin,PRN)、破伤风类毒素(tetanus toxoid,TTd)及Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin-strain inactivated poliomyelitis vaccine,sIPV)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型均无交叉反应;检测线性范围内DTd标准品,精密度验证的变异系数(CV)分别为4.23%、2.98%、1.81%、6.61%、1.82%,准确度验证的回收率分别为90.67%、105.39%、102.11%、97.76%、81.31%。采用该方法与絮状试验法共同测定12批DTd原液中类毒素含量的Pearson r为0.638 0(P <0.05);检测浓度低于1 800 Lf/mL的原液,Pearson r为0.899 2(P <0.001)。结论 成功建立了基于中和抗体的DTd抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法,该方法专属性、准确度、精密度良好,为DTd原液生产提供了一种有效的检定手段。 展开更多
关键词 白喉类毒素 酶联免疫吸附试验 中和抗体 质量分析
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现代分析技术在破伤风类毒素的结构表征中的应用 被引量:1
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作者 杨海艳 刘贤雪 +5 位作者 杜剑晖 罗玲 詹益雄 车腾 郭长福 瞿明霞 《中国处方药》 2024年第10期53-55,共3页
目的采用现代分析技术对破伤风类毒素(TT)的结构进行表征。方法采用圆二色谱法(CD)对TT的二级结构进行考察,差示扫描量热法(DSC)对TT的变性温度进行考察,并对不同批次样品的测定结果进行比较。结果9批次TT的α-螺旋比例为25.4%~26.2%,... 目的采用现代分析技术对破伤风类毒素(TT)的结构进行表征。方法采用圆二色谱法(CD)对TT的二级结构进行考察,差示扫描量热法(DSC)对TT的变性温度进行考察,并对不同批次样品的测定结果进行比较。结果9批次TT的α-螺旋比例为25.4%~26.2%,反向平行为12.3%~14.9%,平行为6.4%~7.0%,β-转角为21.7%~24.0%,无规卷曲为31.8%~33.9%,熔解温度为89.19℃~90.47℃,结果重复性、批间一致性均良好。结论圆二色谱法和差示扫描量热法可用于破伤风类毒素的结构表征,为该类产品在生产过程中的稳定性和一致性提供技术支持。 展开更多
关键词 破伤风类毒素 圆二色谱 差示扫描量热法 二级结构 变性温度
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嗜水气单胞菌HEC毒素苗对鲫鱼的免疫效果的初步研究 被引量:16
5
作者 沈智华 钱冬 +4 位作者 曹铮 沈锦玉 尹文林 吴颖蕾 张念慈 《浙江海洋学院学报(自然科学版)》 CAS 1999年第2期124-128,共5页
用嗜水气单胞菌强毒株BSK-10和TPS-30的HEC毒素苗分别免疫鲫鱼,以不同嗜水气单胞菌菌株攻毒,测定免疫保护率。结果显示:BSK-10HEC毒素苗对同型菌株攻击保护率达90%-100%,对异型菌株攻击的保护无效,为0-20%;TPS-30HEC毒素... 用嗜水气单胞菌强毒株BSK-10和TPS-30的HEC毒素苗分别免疫鲫鱼,以不同嗜水气单胞菌菌株攻毒,测定免疫保护率。结果显示:BSK-10HEC毒素苗对同型菌株攻击保护率达90%-100%,对异型菌株攻击的保护无效,为0-20%;TPS-30HEC毒素菌对同源菌株攻击的保护率达100%,对同型菌株的保护率为75.5%-100%,对异型菌株的保护率为44.4%-100%,经统计检验,TPS-30毒素苗对10株攻毒株的保护除1株无效外,其余均效果极显著或显著,对血清型不同的菌株的免疫保护率没有区别。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 HEC毒素苗 免疫保护率 细菌性败血症 菌苗免疫 鲫鱼
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包裹破伤风类毒素蛋白的聚乳酸及聚乳酸/聚乙醇酸共聚微球的制备和体外释放特性 被引量:10
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作者 王继麟 苏焱 +1 位作者 朱家鸿 曾令冰 《中国药学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第5期318-322,共5页
目的 探索包裹破伤风类毒素蛋白 (TT)的聚乳酸 (PLA)及聚乳酸 /聚乙醇酸 (PLG)共聚微球的制备及其体外释放特性。方法 采用溶剂蒸发技术 ,先以一种小分子量生物染料 伊文思蓝为包裹物模型 ,通过显微镜观察和比色分析探索微球的制备... 目的 探索包裹破伤风类毒素蛋白 (TT)的聚乳酸 (PLA)及聚乳酸 /聚乙醇酸 (PLG)共聚微球的制备及其体外释放特性。方法 采用溶剂蒸发技术 ,先以一种小分子量生物染料 伊文思蓝为包裹物模型 ,通过显微镜观察和比色分析探索微球的制备特性和最佳条件。在此基础上制备包裹TT的PLA和PLG微球。结果 微球的制备过程中存在着内水相蛋白朝外水相的流失 ,当聚合物浓度加大到 2 5 %~ 30 %时可使蛋白流失大大减少。包裹蛋白在微球中的分布与微球粒径的重量分布成正相关关系 ;随着微球粒径的增大 ,微球所载蛋白的体外释放高峰期延迟。结论 通过本模型条件可制备外观高质量的微球 。 展开更多
关键词 聚合物微球 破伤风类毒素蛋白 聚乳酸/聚乙烯酸 体外释放特性
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嗜水气单胞菌溶血素基因的克隆表达及其类毒素的免疫原性分析 被引量:7
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作者 张翠娟 于宙亮 +1 位作者 田莉瑛 赵宝华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期251-256,共6页
根据嗜水气单胞菌溶血素保护性抗原基因序列(GenBank Accession No.AF539467)设计一对引物,以嗜水气单胞菌河北分离株基因组为模板,经PCR扩增得到hly基因。序列分析表明,该基因产物大小为1485 bp,经测序与GenBank报道的多个嗜水气单胞菌... 根据嗜水气单胞菌溶血素保护性抗原基因序列(GenBank Accession No.AF539467)设计一对引物,以嗜水气单胞菌河北分离株基因组为模板,经PCR扩增得到hly基因。序列分析表明,该基因产物大小为1485 bp,经测序与GenBank报道的多个嗜水气单胞菌hly基因序列一致性高于99%。将得到的hly基因定向克隆到原核表达载体pET-28a中构建原核重组质粒pET-28a-hly,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,得到重组菌株BL21(DE3)(pET-28a-hly),经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析可见一条56 kD的特异条带。Western blotting分析结果显示表达的Hly蛋白能与抗体发生特异性结合,说明其具有较好的免疫原性。将表达的溶血素蛋白制成类毒素疫苗免疫小鼠后,具有较高的保护效力,表明该类毒素疫苗有望作为预防由嗜水气单胞菌引起疾病的基因工程类毒素疫苗。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 溶血素 类毒素 免疫原性
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不同蛋白载体制备A、C、Y、W_(135)群四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗的免疫原性 被引量:7
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作者 佟巍 孙晓东 +2 位作者 刘建斌 尹珊珊 刘建凯 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第2期121-124,128,共5页
目的探讨以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)及白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)为载体的A、C、Y、W_(135)群四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗的免疫原性。方法将A、C、Y、W_(135)群流脑多糖经溴化氰(CNBr)活化后,以1,6己二酰肼(1,6-adipic ... 目的探讨以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)及白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)为载体的A、C、Y、W_(135)群四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗的免疫原性。方法将A、C、Y、W_(135)群流脑多糖经溴化氰(CNBr)活化后,以1,6己二酰肼(1,6-adipic acid dihydrazide,ADH)作为衍生剂制备相应的衍生物,分别与TT及DT在碳二亚胺[N-(3-Dimethylami-nopropyl)-N’-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]作用下结合,经Sepharose 4FF凝胶层析纯化后,加入冻干保护剂进行冻干,制备成A、C、Y、W_(135)群四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗。用两种蛋白载体疫苗分别按1及2.5μg两个剂量(各型多糖的含量为1和2.5μg)免疫小鼠,经腹部皮下注射,于0及14 d各免疫1次,于首次免疫后第28天经静脉采血,分离血清,ELISA法检测血清各型抗体水平。结果 1及2.5μg两个剂量组的阳转率均高于80%,2.5μg免疫组的阳转率优于1μg免疫组;总体上来说,以TT为蛋白载体结合疫苗的阳转率高于以DT为载体的结合疫苗,对A和W_(135)群脑膜炎球菌多糖结合疫苗较明显。结论以TT及DT为载体制备的A、C、Y、W_(135)群四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗均具有良好的免疫原性,TT略优于DT。 展开更多
关键词 脑膜炎球菌多糖结合疫苗 蛋白载体 破伤风类毒素 白喉类毒素 免疫原性
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D型产气荚膜梭菌ε毒素基因表达及其免疫保护作用的初步研究 被引量:10
9
作者 王光华 蔺国珍 +4 位作者 郑福英 曹小安 宫晓炜 周继章 邱昌庆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期36-41,共6页
利用PCR技术,从D型产气荚膜梭菌标准株(C60-2)染色体DNA中扩增出ε毒素基因。该基因产物大小为906bp,序列分析结果表明,与GenBank报道的产气荚膜梭菌参考菌株ε毒素基因序列同源性大于99%。将扩增的ε毒素基因定向克隆到原核表达载体pET... 利用PCR技术,从D型产气荚膜梭菌标准株(C60-2)染色体DNA中扩增出ε毒素基因。该基因产物大小为906bp,序列分析结果表明,与GenBank报道的产气荚膜梭菌参考菌株ε毒素基因序列同源性大于99%。将扩增的ε毒素基因定向克隆到原核表达载体pET32a中,得到重组质粒pET32a-ETX,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plys中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析可见大小为54ku的特异条带;经Western blotting和ELISA检测结果表明,表达的ε毒素能与抗天然ε毒素抗体发生特异性反应,说明ε毒素蛋白具有较好的反应原性。将表达的ε毒素蛋白用0.4%的甲醛溶液制成类毒素疫苗,免疫小鼠后,具有一定的保护力,这表明该重组菌株有望成为产气荚膜梭菌基因工程类毒素疫苗的候选菌株。 展开更多
关键词 D型产气荚膜梭菌 ε毒素 类毒素 免疫保护
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脉冲式破伤风类毒素聚乳酸微球动物免疫效果研究 被引量:8
10
作者 何应 陈志华 魏树礼 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期695-698,共4页
目的 研究破伤风类毒素聚乳酸微球在动物体内的免疫效果及影响因素。方法 观察破伤风类毒素聚乳酸微球免疫动物后 1年中 ,动物血清抗体反应及免疫记忆反应的规律。结果 微球中抗原释放为脉冲式 ,释放时间与聚乳酸分子量、微球载药量... 目的 研究破伤风类毒素聚乳酸微球在动物体内的免疫效果及影响因素。方法 观察破伤风类毒素聚乳酸微球免疫动物后 1年中 ,动物血清抗体反应及免疫记忆反应的规律。结果 微球中抗原释放为脉冲式 ,释放时间与聚乳酸分子量、微球载药量及粒径有关 ,微球引起的抗体反应显著高于破伤风类毒素溶液一次免疫 ,与溶液 3次免疫效果相似。结论 创制了一种新型脉冲式释药系统 ,一次注射完成全程免疫 。 展开更多
关键词 脉冲式破伤风类毒素 聚乳酸微球 动物免疫效果
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腐败梭菌类毒素抗原含量与免疫效果之间的关系试验 被引量:11
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作者 彭小兵 李旭妮 +7 位作者 蒋玉文 张爱民 余洪磊 罗显绎 陈宏 郑明举 沈方 赵海源 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第4期6-8,12,共4页
为了确定腐败梭菌类毒素抗原含量与免疫效果之间的关系,将不同剂量的类毒素分别接种家兔和绵羊,免疫17日后测定血清中和效价,并用1MLD的毒素进行攻毒。测毒结果表明,1个家兔MLD的毒素含量为小鼠MLD的30倍,1个绵羊MLD的毒素含量为小鼠MLD... 为了确定腐败梭菌类毒素抗原含量与免疫效果之间的关系,将不同剂量的类毒素分别接种家兔和绵羊,免疫17日后测定血清中和效价,并用1MLD的毒素进行攻毒。测毒结果表明,1个家兔MLD的毒素含量为小鼠MLD的30倍,1个绵羊MLD的毒素含量为小鼠MLD的600倍。血清中和试验和免疫攻毒保护结果表明,类毒素含量与免疫效果在一定的范围内呈正相关,在家兔和绵羊上能提供保护的最小免疫剂量分别为100个小鼠MLD和300个小鼠MLD的类毒素。本试验结果为腐败梭菌疫苗的研制提供了重要的参考数据。 展开更多
关键词 腐败梭菌 类毒素 免疫效果 含量
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无针粉末注射破伤风类毒素对小鼠血清IgG抗体的影响 被引量:4
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作者 王伽伯 周旭 +2 位作者 王喆桅 金城 肖小河 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1406-1409,共4页
本文以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)为研究对象,对比自制的无针粉末注射系统与普通皮下注射方式给药对小鼠的免疫效果。考察氢氧化铝吸附破伤风类毒素(Al(OH)3-TT)粉末的制备工艺,并采用光学显微镜和激光粒度分析仪等考察其微粉学... 本文以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)为研究对象,对比自制的无针粉末注射系统与普通皮下注射方式给药对小鼠的免疫效果。考察氢氧化铝吸附破伤风类毒素(Al(OH)3-TT)粉末的制备工艺,并采用光学显微镜和激光粒度分析仪等考察其微粉学性质。结果表明,增加盐浓度、延长吸附时间均可提高吸附药量。NaCl浓度为0.4mol·L-1吸附效果较好,大于0.8mol·L-1,蛋白会发生盐析;反应10min后吸附量趋于稳定。体系pH值及温度在考察的范围内对吸附药量影响不大。根据优化后工艺制备的Al(OH)3-TT平均粒径为(60.6±4.4)μm。将自制的Al(OH)3-TT无针粉末注射剂与普通皮下注射剂对比,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测破伤风抗毒素IgG抗体浓度。结果表明,Al(OH)3-TT(含TT30μg)无针粉末注射小鼠,4周后破伤风抗毒素IgG抗体浓度为(6.19±0.52)U·L-1,8周后为(10.70±0.78)U·L-1,而普通皮下注射组(含TT20μg)分别为(4.25±0.58)、(7.48±0.57)U·L-1,提示自制的Al(OH)3-TT无针粉末注射剂免疫原性较好,为进一步开发破伤风类毒素无针粉末注射剂提供了技术参考。 展开更多
关键词 无针粉末注射 破伤风类毒素 抗体 酶联免疫吸附法
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嗜水气单胞菌疫苗的研制 被引量:29
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作者 孙建和 陈怀青 陆承平 《畜牧与兽医》 北大核心 1995年第5期202-205,共4页
取致病性嗜水气单胞菌(Ah)J-1株接种改良肉汤,摇床培养180rpm28℃24h,用福尔马林灭活制得全菌苗。另将上述培养物离心,取上清经福尔马林灭活制得毒素苗。用全菌苗和毒素苗分别免疫小鼠,2周后强化免疫,而后用J... 取致病性嗜水气单胞菌(Ah)J-1株接种改良肉汤,摇床培养180rpm28℃24h,用福尔马林灭活制得全菌苗。另将上述培养物离心,取上清经福尔马林灭活制得毒素苗。用全菌苗和毒素苗分别免疫小鼠,2周后强化免疫,而后用J-1株50LD_(50)腹腔注射攻击,免疫组均保护,对照组全部死亡。在鲫鱼的免疫保护试验中,分别采用全菌苗及毒素亩作腹腔注射或浸泡免疫,4周后强化免疫。用AhJ-1株50LD_(50)腹腔注射攻击。结果全菌苗注射组保护87%(13/15);毒素苗注射组保护40%(8、20);全菌苗浸泡组保护40%(6/15);毒素苗浸泡组保护67%(10/15);对照组全部死亡。免疫持续期试验表明,在两次免疫6个月后攻击,全菌苗或毒素苗均仍显示一定的保护力。在平均水温27℃±2℃下,鲫鱼的抗体动态为:全菌苗注射免疫组在强化免疫后1周全菌凝集抗体达2 ̄6,此时可检测到鲫鱼体表粘液中有低滴度凝集抗体存在,较高滴度的血清凝集抗体至少可维持6个月。全菌苗浸泡组在强化免疫后约10天血清中才出现凝集抗体,滴度较低。毒素苗注射免疫用的毒素溶血抑制抗体在初次免疫第28天达2 ̄7,强化免疫后高滴度抗体可维持17天;毒素苗浸泡组的? 展开更多
关键词 疫苗 嗜水气单胞菌 全菌苗 注射免疫 抗体动态
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D型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的研制及保护效果的评价 被引量:5
14
作者 刘雪慧 王方山 +7 位作者 樊金 郭梦娇 艾文豪 秦贵平 吴洁 刘萌萌 王海荣 柴同杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期310-314,共5页
为研制更有效的预防家畜D型产气荚膜梭菌肠毒血症的疫苗,本研究采用D型产气荚膜梭菌标准菌株增菌培养,经自制产毒培养基高效产毒,制备成D型产气荚膜梭菌氢氧化铝类毒素疫苗和白油类毒素疫苗。通过不同剂量疫苗免疫绵羊的攻毒保护试验和... 为研制更有效的预防家畜D型产气荚膜梭菌肠毒血症的疫苗,本研究采用D型产气荚膜梭菌标准菌株增菌培养,经自制产毒培养基高效产毒,制备成D型产气荚膜梭菌氢氧化铝类毒素疫苗和白油类毒素疫苗。通过不同剂量疫苗免疫绵羊的攻毒保护试验和免疫绵羊的抗体水平监测,评估疫苗的免疫保护效果。结果表明:D型产气荚膜梭菌类毒素疫苗安全性良好,氢氧化铝苗和白油苗对绵羊有效免疫剂量均为4 m L(外毒素对小鼠半数致死量为2-6.4/m L),绵羊接种一个有效免疫剂量后,氢氧化铝疫苗免疫保护周期为6周以上;白油疫苗免疫保护周期为21周以上。本研究结果表明两种疫苗均具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 类毒素疫苗 氢氧化铝佐剂 白油佐剂 抗体消长规律
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腐败梭菌α毒素基因的克隆表达及其类毒素的免疫原性研究 被引量:8
15
作者 张燕 边艳青 赵宝华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期67-72,共6页
根据GenBank公布的腐败梭菌α毒素基因序列,设计了一对引物,并以腐败梭菌基因组为模板,经PCR特异性扩增出腐败梭菌菌株HeB01的α毒素基因。序列分析表明,该基因产物大小为1323bp,与GenBank报道的4个腐败梭菌参考菌株α毒素基因序列同源... 根据GenBank公布的腐败梭菌α毒素基因序列,设计了一对引物,并以腐败梭菌基因组为模板,经PCR特异性扩增出腐败梭菌菌株HeB01的α毒素基因。序列分析表明,该基因产物大小为1323bp,与GenBank报道的4个腐败梭菌参考菌株α毒素基因序列同源性高于99·5%。将扩增的α毒素基因定向克隆到原核表达载体pQE30中,得到重组质粒pQE30-α,将重组质粒转化大肠杆菌M15中,得到重组菌株M15(pQE30-α),经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析可见表达的48kD特异条带;Westernblot和ELISA检测实验表明:表达的α毒素与抗天然α毒素抗体发生特异性反应,说明α毒素蛋白具有较好的免疫原性。将表达的α毒素蛋白制成类毒素疫苗,免疫小鼠后,具有一定的保护能力,表明该重组菌株有望作为腐败梭菌基因工程类毒素疫苗的候选生产菌株。 展开更多
关键词 Α毒素 类毒素 免疫原性
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A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物的制备及其工艺稳定性 被引量:3
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作者 刘方蕾 吴兵 +4 位作者 王晶 袁菲 赵志强 杨明 谢贵林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第12期1338-1342,共5页
目的按初步确定的工艺,制备A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A Neisseria meningococcus capsular polysac charide,GAMP)与破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)的结合物,通过监测关键工艺参数,分析该工艺的稳定性。方法制备8批GAMP-TT结... 目的按初步确定的工艺,制备A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A Neisseria meningococcus capsular polysac charide,GAMP)与破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)的结合物,通过监测关键工艺参数,分析该工艺的稳定性。方法制备8批GAMP-TT结合物,经Sepharose4FF柱层析纯化后,进行各项生化鉴定,采用双向免疫扩散试验检测其抗原性,以结合物皮下免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清中抗GAMP及抗TT IgG抗体水平。结果制备的8批结合物工艺关键参数较稳定,均保持GAMP抗原特异性;免疫小鼠后,均可诱生较高水平的血清抗GAMP IgG抗体,并可诱生免疫加强应答。结论该制备工艺稳定,为GAMP-TT结合疫苗的研制提供了参考。 展开更多
关键词 A群脑膜炎球菌 荚膜多糖 破伤风类毒素 结合疫苗 工艺稳定性
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魏氏梭菌毒素疫苗研制及其免疫家兔抗体消长规律 被引量:6
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作者 柴同杰 刘文波 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期259-262,共4页
从山东省莱芜、泰安、潍坊等3个养兔场发生疑似梭菌性下痢的病兔体内分离到3株魏氏梭菌,鉴定为A型。利用该分离菌株和A型魏氏梭菌标准株(CVCC37)所产外毒素经甲醛灭活并加入氢氧化铝胶佐剂吸附浓缩后制备了A型魏氏梭菌类毒素疫苗。对该... 从山东省莱芜、泰安、潍坊等3个养兔场发生疑似梭菌性下痢的病兔体内分离到3株魏氏梭菌,鉴定为A型。利用该分离菌株和A型魏氏梭菌标准株(CVCC37)所产外毒素经甲醛灭活并加入氢氧化铝胶佐剂吸附浓缩后制备了A型魏氏梭菌类毒素疫苗。对该疫苗分别进行了安全性检验、有效免疫剂量试验和接种家兔1~23周血清中抗毒素(Ab)消长规律研究。结果表明,魏氏梭菌外毒素用0.3%甲醛32h能够彻底灭活,并最大可能地保持其抗原性;制备的魏氏梭菌类毒素疫苗无毒副作用,安全可靠;用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗对家兔的有效免疫剂量为2mL/只,免疫保护效果可靠;采用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗免疫接种家兔后第2周血清抗毒素效价迅速升高,到第4周达最高峰,分别为6.6log2和7.125log2,较高抗体滴度维持约17周后缓慢下降,至23周时血清平均抗毒素滴度仍维持在4.0log2和3.4log2以上,所以,该类毒素疫苗的免疫保护期可以设定为6个月。 展开更多
关键词 抗体消长规律 魏氏梭菌毒素 家兔 疫苗研制 A型魏氏梭菌 免疫保护效果 疫苗免疫接种 免疫剂量 梭菌性下痢 类毒素 氢氧化铝胶 安全性检验 标准株 抗毒素 吸附浓缩 分离菌株 规律研究 毒副作用 安全可靠 抗体滴度 外毒素
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魏氏梭菌类毒素疫苗研制及其免疫家兔抗体消长规律 被引量:15
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作者 柴同杰 刘文波 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期101-104,共4页
本研究分别从山东省的莱芜、泰安、潍坊的三个养兔场发生疑似梭菌性下痢的病兔体分离到三株魏氏梭菌,鉴定为A型。利用该分离菌株和A型魏氏梭菌标准株(CVCC37)所产外毒素经甲醛灭活并加入氢氧化铝胶佐剂吸附浓缩后制备了A型魏氏梭菌类毒... 本研究分别从山东省的莱芜、泰安、潍坊的三个养兔场发生疑似梭菌性下痢的病兔体分离到三株魏氏梭菌,鉴定为A型。利用该分离菌株和A型魏氏梭菌标准株(CVCC37)所产外毒素经甲醛灭活并加入氢氧化铝胶佐剂吸附浓缩后制备了A型魏氏梭菌类毒素疫苗。对该疫苗分别进行了安全性检验、有效免疫剂量试验和接种家兔1~23周血清中抗毒(素Ab)消长规律研究。结果表明,魏氏梭菌外毒素用0.3%甲醛32 h能够彻底灭活,并最大可能地保持其抗原性;制备的魏氏梭菌类毒素疫苗无毒副作用,安全可靠;用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗对家兔的有效免疫剂量为2 mL/只,免疫保护效果可靠;采用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗接种家兔后第二周血清抗毒素效价迅速升高,到第四周达最高峰,分别为6.6-和7.125 log2,较高抗体滴度维持约17周后缓慢下降,至23周时血清平均抗毒素滴度仍维持在4.0-和3.4 log2以上,所以,该类毒素疫苗的免疫保护期可以设定为6个月。 展开更多
关键词 A型魏氏梭菌 类毒素疫苗 抗毒素 抗体消长规律 家兔
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载体蛋白质破伤风类毒素两种精制方法的研究 被引量:2
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作者 吴兵 范锋锋 +8 位作者 刘方蕾 于旭博 王欣茹 罗树权 方红春 李燕婷 陈作江 谢贵林 赵志强 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第12期1588-1594,共7页
目的比较两种柱层析方法纯化破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT或TTd)化学特性和免疫原性。方法以硫酸铵盐析一步纯化TT原液,再分别以Superdex 200和Sephacryl S-300 HR柱层析进一步纯化,并对纯化TT进行各项化学特性及小鼠免疫原性检测。... 目的比较两种柱层析方法纯化破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT或TTd)化学特性和免疫原性。方法以硫酸铵盐析一步纯化TT原液,再分别以Superdex 200和Sephacryl S-300 HR柱层析进一步纯化,并对纯化TT进行各项化学特性及小鼠免疫原性检测。结果经硫酸铵盐析纯化,TT纯度可达85%左右,再经柱层析纯化后,两种方法测定(SDS-PAGE和HPLC)TT单体含量(纯度)均可达95%以上,盐析和柱层析两步纯化后,蛋白质回收率均在45%以上,各项检定指标均符合《中国药典》三部(2005年版)中《吸附破伤风疫苗制造及检定规程》的要求;纯化TT在小鼠体内产生了较好的免疫原性。结论经一步或多步纯化可显著提高TT的纯度,并最大限度地减少TT二聚体和多聚体含量;采用两种柱层析方法制备的纯化TT具有更好的化学特性和良好的免疫原性。本实验为多糖-蛋白质结合疫苗及其他以TT为联合疫苗组分的疫苗提供了更加安全有效的蛋白质。 展开更多
关键词 破伤风类毒素 载体蛋白质 柱层析 特性 免疫原性
原文传递
缓释破伤风类毒素微球的制备及其免疫原性 被引量:2
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作者 郝国荣 李群英 +4 位作者 杨丽华 刘伟丰 刘志强 赵立萍 白新卿 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第6期346-349,共4页
目的 用可生物降解缓释微球,单剂投递破伤风类毒毒。方法 用溶剂挥发法,将破伤风类毒素(TT)包入两种丙交酯-乙交酯共聚物制备成微球,用电镜观察微球的粒经与表面形态,用Bradford法及SDS-PAGE检测微球内蛋白含量及抗原结构的变化。TT微... 目的 用可生物降解缓释微球,单剂投递破伤风类毒毒。方法 用溶剂挥发法,将破伤风类毒素(TT)包入两种丙交酯-乙交酯共聚物制备成微球,用电镜观察微球的粒经与表面形态,用Bradford法及SDS-PAGE检测微球内蛋白含量及抗原结构的变化。TT微球免疫豚鼠后,观察抗体应答。结果 微球表面光滑,成球规律,两种微球平均粒径为8.4μm及9.7μm,包裹率为48%及56%,包裹后的TT结构未改变。TT微球免疫豚鼠后,1针诱导的抗TT-IgG及中和抗体滴度与3针铝吸附TT相似;TT微球免疫血清及铝吸附TT免疫血清与游离破伤风毒素有相似的结合特性。加强免疫后,TT微球的回忆应答优于铝佐剂疫苗。结论 可生物降解缓释微球单剂投递破伤风类毒素,可产生持续高的免疫应答。 展开更多
关键词 缓释破伤风类毒素微球 制备 免疫原性 缓释微球 免疫应答
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