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基于四重iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法分析雌二醇和它莫西芬对MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质含量影响的研究 被引量:5
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作者 倪国新 郭立海 +5 位作者 朱镭 郭妍 徐学敏 林标扬 刘建华 李伟 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1283-1287,共5页
应用体外iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法对雌二醇刺激、雌二醇与它莫西芬共同处理,将它莫西芬处理与正常培养的MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质表达的差异进行了比较分析。结果表明:各实验组与对照组之间存在数种上调或下调1倍以上的差异... 应用体外iTRAQ标记结合LC-MALDI-TOF-TOF方法对雌二醇刺激、雌二醇与它莫西芬共同处理,将它莫西芬处理与正常培养的MCF-7乳腺癌细胞内蛋白质表达的差异进行了比较分析。结果表明:各实验组与对照组之间存在数种上调或下调1倍以上的差异表达蛋白质,雌二醇可显著改变74种蛋白质的含量,雌二醇与它莫西芬共同处理引起26种蛋白质水平的显著变化,它莫西芬引起18种蛋白质表达的明显改变。各组之间既有变化趋势相同的蛋白质,也有变化趋势相反的蛋白质。 展开更多
关键词 iTRAQ标记 LC-MALDI-tof-tof 雌二醇 它莫西芬
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应用IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF鉴定蛋白质泛素化修饰 被引量:2
2
作者 毛建华 张群业 +3 位作者 黄秋花 陈竺 陈俭 陈赛娟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第7期839-847,共9页
近年来,在蛋白质研究中,特别是在蛋白质翻译后修饰(PTM)的研究中,生物质谱技术的应用越来越广泛,与纳升级HPLC的联合应用,使这一技术手段更加有效.针对泛素化在细胞功能调控中发挥关键作用的PTM的特点,将免疫沉淀、2Dnano-HPLC和基质辅... 近年来,在蛋白质研究中,特别是在蛋白质翻译后修饰(PTM)的研究中,生物质谱技术的应用越来越广泛,与纳升级HPLC的联合应用,使这一技术手段更加有效.针对泛素化在细胞功能调控中发挥关键作用的PTM的特点,将免疫沉淀、2Dnano-HPLC和基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱(IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF)有机整合,建立了天然状态下蛋白质泛素化位点的鉴定方法,并应用这一方法确定出K562细胞内具有酪氨酸激酶活性的蛋白c-ABL的泛素化位点.为定性鉴定生理和病理状态下内源性蛋白的泛素化修饰提供了借鉴. 展开更多
关键词 泛素化 蛋白质翻译后修饰 IP-2D nano-HPLC-MALDI-tof-tof
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MALDI-TOF-TOF鉴定IPG IEF分离的蛋白质 被引量:1
3
作者 蒙根 李卫华 +4 位作者 王鸿丽 谷苗 刘锋 王杰 魏开华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期74-75,共2页
  K562细胞是一株分化差、恶性程度高的人白血病细胞.研究表明,在一些分化诱导剂的作用下,细胞可以向红细胞系、粒细胞系和巨K562核细胞系方向分化成熟,并表现出相应血细胞类型的成熟标志.用一维固相pH梯度等电聚焦电泳(LPG IEF)分离K...   K562细胞是一株分化差、恶性程度高的人白血病细胞.研究表明,在一些分化诱导剂的作用下,细胞可以向红细胞系、粒细胞系和巨K562核细胞系方向分化成熟,并表现出相应血细胞类型的成熟标志.用一维固相pH梯度等电聚焦电泳(LPG IEF)分离K562细胞总蛋白质,其每一条带常包含多个蛋白质,难以用肽指纹谱技术来鉴定.…… 展开更多
关键词 tof-tof Protein identification Tandem MS PROTEOMICS Human erythroleukemia
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MALDI-TOF-TOF-MS对完整蛋白质C端序列的直接测定
4
作者 刘炳玉 薛燕 +4 位作者 刘锋 李萍 王红霞 王鸿丽 魏开华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第S1期13-14,共2页
C-terminal sequencing is important for characterized the primary structure of protein and polypeptides and it must do for quality control of recombination protein drugs.A method of MALDI-TOF-TOF-MS with in source deca... C-terminal sequencing is important for characterized the primary structure of protein and polypeptides and it must do for quality control of recombination protein drugs.A method of MALDI-TOF-TOF-MS with in source decay(ISD) to measure C-terminal sequence of protein was established.This method was applied successfully to measure C-terminal sequence of Neuregulin,TP-Ⅱ,ubiquitin,and myoglobin,respectively and 10,24,24 and 36 amino acid residue of C-terminal were measured. 展开更多
关键词 C-TERMINAL SEQUENCING MALDI-tof-tof-MS ISD
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GC/LC-Q/TOF MS测定当归中农药残留及膳食风险评估 被引量:9
5
作者 常巧英 杨志敏 +6 位作者 白若镔 邱国玉 李坚 朱仁愿 张虹艳 闫君 吴福祥 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期292-300,共9页
采用气相色谱/液相色谱-四极杆飞行时间质谱(GC/LC-Q/TOF MS)对100例市售当归样品进行了989种农药残留分析,按照风险排序法对检出农药的风险等级进行归类,采用点评估法评估了检出农药的慢性、急性膳食摄入风险,危害指数法(HI)计算了累... 采用气相色谱/液相色谱-四极杆飞行时间质谱(GC/LC-Q/TOF MS)对100例市售当归样品进行了989种农药残留分析,按照风险排序法对检出农药的风险等级进行归类,采用点评估法评估了检出农药的慢性、急性膳食摄入风险,危害指数法(HI)计算了累积风险值。100例当归的总检出率为95%,共检出27种农药,其中甲拌磷和毒死蜱的检出率较高,农药残留量为0.0010~1.4077 mg/kg。依据《中国药典(2020年版)》和GB 2763-2021,检出农药中只有甲拌磷、甲基异柳磷、特丁硫磷有最大残留限量(MRL)值,其中甲拌磷的超标率最高。风险排序结果表明,高风险农药为甲拌磷、特丁硫磷、甲基异柳磷。膳食摄入风险和累积风险结果显示,检出农药的慢性膳食摄入风险(%ADI)和急性膳食摄入风险(%ARfD)平均值分别为0.2908%和0.0978%,均远低于100%;慢性累积暴露危害指数(HIc)和急性累积暴露危害指数(HIa)分别为0.06689和0.01173,均远小于1,慢性和急性膳食摄入风险及累积风险均处于可接受水平。当归中检出农药的膳食摄入和累积暴露的风险均较低,但仍需加强对农药使用的监管,建议制定当归中检出的中等风险农药的MRL值。 展开更多
关键词 当归 GC-Q/TOF MS LC-Q/TOF MS 农药残留 风险排序 危害指数法 风险评估
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超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法测定壬苯醇醚分子量分布及n值
6
作者 张伟 张慧 +2 位作者 韩治国 孙明辉 梁成罡 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1807-1815,共9页
目的:研究并建立超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法测定壬苯醇醚低聚物的分子量分布及n值,并用国内外多批次壬苯醇醚样品进行考察。方法:采用Techmate STV SUNSHELL Peptide C_(18)(100 mm×2.1 mm,2.6μm,300A)色谱柱,以0.1... 目的:研究并建立超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法测定壬苯醇醚低聚物的分子量分布及n值,并用国内外多批次壬苯醇醚样品进行考察。方法:采用Techmate STV SUNSHELL Peptide C_(18)(100 mm×2.1 mm,2.6μm,300A)色谱柱,以0.1%三氟乙酸水溶液(A)-0.1%三氟乙酸乙腈溶液(B)为流动相,线性梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温60℃,进样量5μL。采用串联四极杆飞行时间质谱检测器,离子源为Dual ESI,氩气为碰撞气,以正离子模式,采集范围m/z 50~3000进行检测。采用ChemDraw19.0软件绘制相关结构,通过MassHunter PCDL Manager软件建立数据库,并编辑计算公式。结果:用新建立的方法对国内外生产的6批壬苯醇醚原料药的重均分子量及数均分子量进行了测定,并计算得到结构中n值的范围,结果发现国内外产品之间以及同一企业不同批次产品之间的重均分子量及数均分子量均有一定差异;产品结构中的n值也各不相同。数均分子量范围在664.6~686.8(n值约为10);重均分子量范围在677.1~715.5(n值约为11)。结论:此类低聚物药物的分子量分布及n值亟需在生产过程及质量标准中增加控制;新建立的方法灵敏度高,精密度和重现性好,可以满足测定壬苯醇醚原料药的分子量分布及n值的需要,为此类低聚物分子量分布的测定提供了解决方案,同时为《中华人民共和国药典》标准提高及修订提供了依据。 展开更多
关键词 超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法 基质辅助激光解析串联飞行时间质谱技术 壬苯醇醚 低聚物 数据库 分子量分布 n值
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家蚕孤雌生殖相关蛋白ERp57基因的克隆和分析 被引量:5
7
作者 于威 聂作明 +2 位作者 王丹 陈健 张耀洲 《丝绸》 CAS 北大核心 2007年第8期23-27,共5页
ERp57蛋白是一种二硫化物异构酶,它是目前发现的最为突出的多功能蛋白之一,除了二硫键的异构酶的基本功能外,还具有其他多种生物学功能。应用二维凝胶电泳(2DE)技术研究家蚕孤雌生殖的总蛋白质,通过和正常家蚕卵总蛋白进行比较分析得到... ERp57蛋白是一种二硫化物异构酶,它是目前发现的最为突出的多功能蛋白之一,除了二硫键的异构酶的基本功能外,还具有其他多种生物学功能。应用二维凝胶电泳(2DE)技术研究家蚕孤雌生殖的总蛋白质,通过和正常家蚕卵总蛋白进行比较分析得到家蚕卵中可能与孤雌生殖相关的差异蛋白点,得到了一个与家蚕蛋白折叠相关的钙结合蛋白——ERp57。根据已有的cDNA文库,从家蚕蛹中克隆得到的ERp57基因的cDNA。利用各种生物信息学的方法和工具,对这个基因的核酸水平和蛋白质水平进行了详细的分析,为进一步研究其结构与功能的关系提供参考。 展开更多
关键词 家蚕蛹 孤雌生殖 ERp57 tof-tof
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冠心病血小板功能蛋白与证侯相关性研究 被引量:12
8
作者 李雪峰 蒋跃绒 +2 位作者 吴彩凤 陈可冀 殷惠军 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2009年第6期326-331,共6页
目的研究冠心病血瘀证、非血瘀证与血小板功能蛋白相关性。方法纳入冠心病血瘀证组22例、冠心病非血瘀证组22例,采集血浆分离血小板,提取血小板蛋白,用荧光差异显示二维凝胶电泳筛选差异功能蛋白,基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱对... 目的研究冠心病血瘀证、非血瘀证与血小板功能蛋白相关性。方法纳入冠心病血瘀证组22例、冠心病非血瘀证组22例,采集血浆分离血小板,提取血小板蛋白,用荧光差异显示二维凝胶电泳筛选差异功能蛋白,基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱对血小板差异功能蛋白进行鉴定。对鉴定成功差异蛋白,Western-Blotting进一步验证。结果筛选,并质谱成功鉴定10个差异蛋白点。冠心病血瘀证组比对照组,血小板功能蛋白有2个:cDNA FLJ53327、cDNA FLJ43573fis表达增多;有8个:Isoform 2 of Integrin alpha-IIb、FGG50kDa protein、A26C1B ANKRD26-like、Actin-cyto-plasmic1、Actin-cytoplasmic 2、cDNA FLJ52842、Fibrinogen beta chain、Keratin type I表达减少。Fibrino-genβ成功验证。结论冠心病不同证侯与血小板功能蛋白表达水平明显相关,部分血小板功能蛋白可能是冠心病不同证侯的物质基础之一。 展开更多
关键词 冠心病血瘀证 冠心病非血瘀证 血小板差异功能蛋白 2-DDIGE MALDI-tof-tof
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家蚕核糖体蛋白L7基因cDNA序列的克隆和分析 被引量:2
9
作者 贺平安 聂作明 +4 位作者 吕正兵 龙晓辉 王丹 陈健 张耀洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期719-726,共8页
为了研究家蚕孤雌生殖的调节机制,应用二维凝胶电泳(2DE)技术分离正常生殖的家蚕卵与孤雌生殖家蚕卵的差异蛋白质,在蛋白质水平上筛选与家蚕孤雌生殖过程相关的重要蛋白质.利用MALDI-TOF-TOFMS分析这些差异蛋白,获得了大量小肽的序列特... 为了研究家蚕孤雌生殖的调节机制,应用二维凝胶电泳(2DE)技术分离正常生殖的家蚕卵与孤雌生殖家蚕卵的差异蛋白质,在蛋白质水平上筛选与家蚕孤雌生殖过程相关的重要蛋白质.利用MALDI-TOF-TOFMS分析这些差异蛋白,获得了大量小肽的序列特征.BLAST搜索本实验室构建的cDNA文库,获得了1个与家蚕孤雌生殖相关的核糖体蛋白L7基因.根据已有的cDNA文库,采用RACE方法克隆得到该核糖体蛋白基因的全长cDNA.利用生物信息学的方法和工具,对这个基因在核酸水平和蛋白质水平分别作了详细的分析和讨论并进行蛋白结构预测.结果表明,核糖体L7基因的cDNA全长为858bp,编码区包含6个外显子,共编码268个氨基酸残基,蛋白的疏水性平均值为-0.586,分子量大小为30kD,极性的最大值为39.616,最小值为0.451,等电点为10.52.分子系统分析显示,该蛋白与Apis,Lysiphlebus和Meladema中的核糖体蛋白L7具有较高的同源性. 展开更多
关键词 家蚕 孤雌生殖 tof-tof 核糖体蛋白L7基因 生物信息学
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冠心病患者血小板蛋白质组学研究 被引量:5
10
作者 区文超 冯俊灵 +1 位作者 靳丽君 李爱群 《内科》 2016年第3期350-354,共5页
目的初步建立冠心病患者与健康对照的血小板蛋白质表达图谱,并鉴定其差异表达的蛋白质。方法选取冠心病患者9例和健康志愿者11名作为研究对象,抽取外周血,分离血小板并提取蛋白质。采用二维凝胶电泳技术分离并建立血小板蛋白质表达图谱,... 目的初步建立冠心病患者与健康对照的血小板蛋白质表达图谱,并鉴定其差异表达的蛋白质。方法选取冠心病患者9例和健康志愿者11名作为研究对象,抽取外周血,分离血小板并提取蛋白质。采用二维凝胶电泳技术分离并建立血小板蛋白质表达图谱,以Image Master 2D platinum 5.0软件进行图谱分析,选取差异点进行基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-TOF)分析,再采用Mascot软件搜索数据库鉴定差异表达蛋白质。结果 (1)初步建立了两组对象的血小板蛋白质表达图谱;(2)筛选出17个差异蛋白点,质谱成功鉴定7个:Plastin-2、Coronin-1A、Clusterin、Annexin A1、Chloride intracellular channel protein 1、Peroxiredoxin-6、Peroxiredoxin-2。结论血小板蛋白Plastin-2、Coronin-1A、Clusterin、Annexin A1、Peroxiredoxin-6、Peroxiredoxin-2在冠心病的发生发展中可能起到关键作用。 展开更多
关键词 冠心病 血小板蛋白质组学 二维凝胶电泳 MALDI-tof-tof质谱
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鸟结核分枝杆菌感染巨噬细胞后的外泌体刺激巨噬细胞产生的细胞因子及其蛋白质表达改变 被引量:10
11
作者 王建军 陈偲 +3 位作者 谢萍芳 潘艺 谭云洪 汤立军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期123-126,131,共5页
目的探讨鸟结核分枝杆菌(M.avium)感染巨噬细胞后分泌的外泌体[(+)外泌体]刺激巨噬细胞后产生的分子免疫机制及其差异蛋白质成分研究。方法冷冻高速离心法收集经鸟分枝结核杆菌感染及未感染的巨噬细胞上清中的外泌体,然后利用外泌体刺... 目的探讨鸟结核分枝杆菌(M.avium)感染巨噬细胞后分泌的外泌体[(+)外泌体]刺激巨噬细胞后产生的分子免疫机制及其差异蛋白质成分研究。方法冷冻高速离心法收集经鸟分枝结核杆菌感染及未感染的巨噬细胞上清中的外泌体,然后利用外泌体刺激巨噬细胞;ELISA方法检测经外泌体刺激巨噬细胞后细胞上清中IFN-γ、TNF-α的含量;流式细胞术从蛋白水平检测巨噬细胞受外泌体刺激后CD80、CD86蛋白表达情况;2-DE MALDI-TOF/TOF MS技术分析鉴定巨噬细胞受M.avium感染后分泌的外泌体中的差异蛋白。结果 IFN-γ、TNF-α在(+)外泌体刺激巨噬细胞后培养上清中含量增加;CD80、CD86蛋白在巨噬细胞受(+)外泌体刺激后表达上调。外泌体经2-DE MALDI TOF/TOF MS分析获得18个差异蛋白,且质谱成功鉴定12个。结论 (+)外泌体促进巨噬细胞TNF-α、IFN-γ的分泌从而增强巨噬细胞的炎症反应,并且可促进巨噬细胞CD80、CD86蛋白表达增强;筛选出差异蛋白的功能与细胞骨架结构、蛋白质合成与加工,炎症反应密切相关。 展开更多
关键词 巨噬细胞 外泌体 M AVIUM 2-DE MALDI-TOF TOFMS
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家蚕抗BmNPV品系与感性品系血淋巴液蛋白质组的差异分析 被引量:15
12
作者 蔡克亚 陈克平 +2 位作者 刘晓勇 姚勤 李军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期285-290,共6页
利用遗传学的原理,通过杂交和回交的方法,建立家蚕抗BmNPV、感BmNPV以及近等基因系模型,利用2-D电泳和MALDI TOF/TOF MS质谱技术,从蛋白质组水平上研究家蚕对BmNPV抵抗性。其结果是获得家蚕高抗NB,高感306,近等基因系BC_8五龄起蚕血淋... 利用遗传学的原理,通过杂交和回交的方法,建立家蚕抗BmNPV、感BmNPV以及近等基因系模型,利用2-D电泳和MALDI TOF/TOF MS质谱技术,从蛋白质组水平上研究家蚕对BmNPV抵抗性。其结果是获得家蚕高抗NB,高感306,近等基因系BC_8五龄起蚕血淋巴液蛋白质差异表达谱,分别获得180、190、187个蛋白点,其中80%的蛋白点集中在等电点5~9范围之内。从三块凝胶上共获得明显差异蛋白点12个,由质谱鉴定出5种蛋白,其中氨基酰化酶(Aminoacylase)仅出现在抗性品系NB、近等基因系图谱中,感性品系没有出现,初步推测是家蚕抗BmNPV特有蛋白,这是首次报道结果。 展开更多
关键词 2-D电泳 MALDI TOF/TOF MS 蛋白质组 抗核型多角体病毒 家蚕
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HPLC法对胸腺法新及其制剂中杂质检查 被引量:8
13
作者 程磊 唐洋明 +3 位作者 殷果 毕开顺 陈晓辉 王铁杰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1942-1947,共6页
目的:测定胸腺法新及其制剂中的杂质并对含量超过0.1%的杂质进行结构鉴定。方法:建立一种高效液相色谱法测定胸腺法新及其制剂中的杂质。含量超过ICH规定质控限度(0.1%)的杂质分别接取流分,脱盐富集之后使用MALDITOF/TOF质谱仪分析,推... 目的:测定胸腺法新及其制剂中的杂质并对含量超过0.1%的杂质进行结构鉴定。方法:建立一种高效液相色谱法测定胸腺法新及其制剂中的杂质。含量超过ICH规定质控限度(0.1%)的杂质分别接取流分,脱盐富集之后使用MALDITOF/TOF质谱仪分析,推测其结构。合成杂质对照品后确证其结构,并进行杂质测定的方法学研究,测得各杂质相对于胸腺法新的校正因子。结果:通过对上市的多批胸腺法新及其制剂的分析可知,含量高于0.1%的杂质主要有4种。杂质1为胸腺法新肽序脱除第3个丙氨酸的多肽;杂质2为第1个丝氨酸右消旋化的多肽;杂质3为最后1个天冬酰胺右消旋化的多肽;杂质4为最后1个天冬酰胺水解为天冬氨酸的多肽。本法精密度、重复性、稳定性、耐用性好。杂质1、2、3、4在各自的线性范围内线性关系均良好(r≥0.9997),相对于胸腺法新的校正因子分别为0.98、1.06、1.24、1.30。杂质1、2、3、4的检测限分别为0.083、0.077、0.080、0.080μg·mL-1;定量限分别为0.25、0.23、0.24、0.24μg·mL-1;平均回收率分别为99.2%、100.0%、100.1%、98.8%,RSD分别为1.3%、1.2%、1.0%、0.90%(n=9)。结论:该方法可用于检查胸腺法新及其制剂中的杂质。 展开更多
关键词 胸腺法新 高效液相色谱法 杂质 结构鉴定 多肽序列 MALDI—TOF TOF 校正因子
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高表达PGA的枯草芽孢杆菌蛋白质组学研究 被引量:1
14
作者 张虹 蒋红亮 +1 位作者 赵辅昆 丁明 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2011年第1期116-121,共6页
为了解外源蛋白高表达时枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)表达系统胞内蛋白质组的变化,实验建立了青霉素G酰化酶(Penicillin G Acylase,PGA)高表达B.subtilis系统,可达到1.6 g/L的表达量以及10 U/mL的酶活;通过双向电泳技术(2-DE)分离PG... 为了解外源蛋白高表达时枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)表达系统胞内蛋白质组的变化,实验建立了青霉素G酰化酶(Penicillin G Acylase,PGA)高表达B.subtilis系统,可达到1.6 g/L的表达量以及10 U/mL的酶活;通过双向电泳技术(2-DE)分离PGA高表达以及低表达重组菌中胞内蛋白,软件分析结果显示,两者胞内蛋白表达差异极大;通过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定出其中6个差异蛋白,其中4个与PGA高表达抑制菌体生长相关,而PhoR和YxiE则与PGA高表达分泌胁迫机制有关。 展开更多
关键词 PGA MALDI-tof-tof 双向电泳 蛋白质组
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快速分离与鉴定天山堇菜中的天然环肽 被引量:8
15
作者 项斌 杜国华 +6 位作者 王煦辰 张书香 秦咸蕴 孔建强 程克棣 李永吉 王伟 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1402-1409,共8页
为快速准确地分离鉴定天山堇菜的天然环肽分子,采用50%乙醇浸提、不同极性溶剂萃取,利用Sephadex LH-20对含有环肽的正丁醇部分进行色谱分离,然后直接利用DTT还原分离的组分,结合反相高效液相色谱(RP-HPLC)和质谱跟踪确定含有环肽的组... 为快速准确地分离鉴定天山堇菜的天然环肽分子,采用50%乙醇浸提、不同极性溶剂萃取,利用Sephadex LH-20对含有环肽的正丁醇部分进行色谱分离,然后直接利用DTT还原分离的组分,结合反相高效液相色谱(RP-HPLC)和质谱跟踪确定含有环肽的组分差异洗脱峰,进而分离纯化获得单体分子;利用DTT还原二硫键、碘乙酰胺烷基化保护被还原产生的巯基、蛋白酶Endo-Glu-C、Endo-Lys-C和胰蛋白酶酶解、结合RP-HPLC分离获得肽段;用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI TOF/TOF MS)进行质谱分析,鉴定了2个环肽分子,其中一个新的环肽分子命名为cycloviolacin T1,另一个为已知结构的varv E。通过此研究建立了一套直接利用DTT还原色谱分离组分、结合MALDI TOF/TOF MS检测进而鉴定天然环肽分子的解析方法。 展开更多
关键词 天山堇菜 植物环肽 MALDITOF/TOF质谱鉴定
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双孢蘑菇子实体发育后期差异表达蛋白质分析 被引量:6
16
作者 陈美元 廖剑华 +3 位作者 李洪荣 蔡志欣 郭仲杰 王泽生 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期855-861,共7页
为探讨双孢蘑菇子实体发育后期的蛋白质表达变化,对双孢蘑菇As2796子实体采收期、成熟期和开伞期的蛋白质组进行了双向电泳(2-DE)分析,发现了16个表达差异明显的蛋白质。通过质谱分析(MALDI-TOF/TOF MS)和数据库检索,有14个差异蛋白质... 为探讨双孢蘑菇子实体发育后期的蛋白质表达变化,对双孢蘑菇As2796子实体采收期、成熟期和开伞期的蛋白质组进行了双向电泳(2-DE)分析,发现了16个表达差异明显的蛋白质。通过质谱分析(MALDI-TOF/TOF MS)和数据库检索,有14个差异蛋白质获得鉴定。其中磷酸烯醇式丙酮酸水合酶与能量代谢相关,T-蛋白复合体1、蛋白酶体、5-甲基四氢三谷氨酸-同型半胱氨酸甲基转移酶、1-吡咯琳-5-羧酸脱氢酶、精氨酸酶与氨基酸或蛋白质代谢直接相关,而GTP结合蛋白则参与细胞的多种生命活动,在细胞的生长发育过程中起着重要的作用。另外7个为功能未知的蛋白质。 展开更多
关键词 食用菌 蛋白质组 双向电泳 质谱分析 蛋白质鉴定
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绍兴黄酒混浊蛋白的分离鉴定及其氨基酸组成、二级结构分析 被引量:10
17
作者 孙军勇 樊世英 +1 位作者 谢广发 陆健 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期1-6,共6页
采用双向电泳及基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱法分析了绍兴黄酒混浊蛋白的主要组成及来源,结果表明:绍兴黄酒混浊中的蛋白质主要包括来源于小麦类燕麦蛋白b1、类燕麦蛋白、二聚-α淀粉酶抑制剂、病程相关蛋白、病程相关蛋白-4... 采用双向电泳及基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱法分析了绍兴黄酒混浊蛋白的主要组成及来源,结果表明:绍兴黄酒混浊中的蛋白质主要包括来源于小麦类燕麦蛋白b1、类燕麦蛋白、二聚-α淀粉酶抑制剂、病程相关蛋白、病程相关蛋白-4、几丁质酶II,以及来源于水稻的类燕麦蛋白和β-淀粉酶。高效液相色谱与傅里叶变换红外线光谱分析法分析绍兴黄酒上清蛋白质和混浊蛋白质的氨基酸组成与二级结构发现,绍兴黄酒混浊蛋白中谷氨酸含量最高,占总氨基酸含量的20.48%,疏水性的氨基酸含量比酒体蛋白高24.2%。高α-螺旋含量、低β-折叠和无规则卷曲是黄酒混浊中蛋白质的主要结构特征。 展开更多
关键词 黄酒 混浊蛋白 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS) 氨基酸组成 二级结构
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家蚕孤雌生殖差异脂蛋白30K lipoprotein precursor基因的克隆与生物信息学分析 被引量:4
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作者 王丹 聂作明 +6 位作者 龙晓辉 刘立丽 陈健 吕正兵 陈芳 吴祥甫 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期205-210,共6页
应用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离家蚕孤雌生殖蚁蚕总蛋白,并和正常蚁蚕总蛋白进行比较,得到46个可能与家蚕孤雌生殖相关的差异蛋白点。对这些差异蛋白点进行胶内酶解后基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOFMS)分... 应用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离家蚕孤雌生殖蚁蚕总蛋白,并和正常蚁蚕总蛋白进行比较,得到46个可能与家蚕孤雌生殖相关的差异蛋白点。对这些差异蛋白点进行胶内酶解后基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOFMS)分析,经数据库搜索鉴定,确定其中一个差异蛋白点为脂蛋白30Klipoprotein precursor(30KLPP)。通过5′-RACE技术克隆到30KLPP脂蛋白的全长cDNA序列。生物信息学分析显示该差异蛋白基因全长917bp。编码261个氨基酸,理论分子质量为30.013kD,等电点为7.193;结构域和三级结构预测显示该蛋白包含1个Lipoprotein_11结构域和12个β-折叠。预测其信号肽概率为1.000,定位在1~20aa区域,即可能存在信号肽。细胞定位预测显示该蛋白可能分泌到胞外(SP值为0.934)。分析结果有助于进一步研究30KLPP脂蛋白结构与功能的关系。 展开更多
关键词 家蚕 孤雌生殖 脂蛋白30K LPP 基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱
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家蚕孤雌生殖差异蛋白——热休克相关蛋白的生物信息学分析 被引量:5
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作者 夏佳音 龙晓辉 +6 位作者 陈健 聂作明 王丹 吕正兵 徐杰 贺平安 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期568-573,共6页
应用双向凝胶电泳(2-DE)技术研究家蚕孤雌生殖蚁蚕和正常蚁蚕的总蛋白质的差异,得到与孤雌生殖相关的差异蛋白点,并对这些蛋白点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析,获得了相关差异蛋白的序列特征。将这... 应用双向凝胶电泳(2-DE)技术研究家蚕孤雌生殖蚁蚕和正常蚁蚕的总蛋白质的差异,得到与孤雌生殖相关的差异蛋白点,并对这些蛋白点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析,获得了相关差异蛋白的序列特征。将这些序列与已构建的家蚕cDNA文库及蛋白质数据库进行比对,得到3个差异蛋白为热休克相关蛋白。通过5-′RACE的方法克隆到3个差异蛋白的全基因序列,并对它们进行结构和特征分析,有助于进一步研究其与孤雌生殖的关系。 展开更多
关键词 家蚕 孤雌生殖 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱 差异蛋白 热休克蛋白 结构分析
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棉花种子活力劣变的差异蛋白质组学研究 被引量:4
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作者 王志军 叶春秀 +3 位作者 李有忠 赵曾强 孙国清 谢宗铭 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2204-2213,共10页
该研究以新疆本地审定且大面积推广应用的陆地棉品种‘新陆早33’、‘新陆早36’、‘新陆早50’种子为研究材料,采用高温高湿(40℃,RH100%)人工老化方法获得不同活力种子,双向电泳分离‘新陆早50’活力劣变种子总蛋白并对差异蛋白点进... 该研究以新疆本地审定且大面积推广应用的陆地棉品种‘新陆早33’、‘新陆早36’、‘新陆早50’种子为研究材料,采用高温高湿(40℃,RH100%)人工老化方法获得不同活力种子,双向电泳分离‘新陆早50’活力劣变种子总蛋白并对差异蛋白点进行二级质谱(MALDI-TOF/TOF)鉴定分析,以明确棉花种子活力劣变过程中蛋白质组表达的变化,探讨棉花种子老化的分子机制。结果显示:(1)经人工老化获得不同活力水平的种子,经生活力检测发现‘新陆早50’的种子活力随老化时间的延长呈线性下降,可作为蛋白质组研究材料。(2)TCA-丙酮法分别提取‘新陆早50’对照和劣变种子的总蛋白,经2-DE分离,获得了分辨率和重复性较好的蛋白质组差异表达图谱,在等电点4~7、分子量14.4~97.4kD之间发现约350个肉眼可辨的蛋白点,其中上调2倍以上且达到99%统计学显著水平的差异表达蛋白点30个。(3)二级质谱分析发现,有29个蛋白点被成功鉴定,生物信息学分析和功能分类结果表明,与贮藏相关的蛋白有13个,免疫相关蛋白2个,脂代谢相关蛋白1个,能量代谢相关蛋白1个,肌动蛋白2个,功能未知蛋白5个,调控相关蛋白2个,次级代谢物1个,细胞修复防御相关蛋白1个,分泌性蛋白1个。研究认为,分离鉴定的29个差异蛋白的变化可能与棉花种子活力劣变有关。 展开更多
关键词 棉花 种子老化 差异表达蛋白 双向电泳 二级质谱
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