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TMEM182基因调控猪骨骼肌卫星细胞成肌分化的研究 被引量：1
1
作者 龚宇轩 黑伟 +4 位作者 鲍武 陈佳仪 李萌 郭晓红 李步高 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1676-1688,共13页
旨在探究TMEM182对猪骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控作用。本研究选取饲养在相同条件下马身猪和大白猪各3头(180日龄,健康去势公猪),采集各组织;选取1周龄仔猪分离猪骨骼肌卫星细胞;通过qRT-PCR检测TMEM182在猪不同组织的表达谱、... 旨在探究TMEM182对猪骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控作用。本研究选取饲养在相同条件下马身猪和大白猪各3头(180日龄,健康去势公猪),采集各组织;选取1周龄仔猪分离猪骨骼肌卫星细胞;通过qRT-PCR检测TMEM182在猪不同组织的表达谱、在不同猪种肌肉组织中的表达差异以及在骨骼肌卫星细胞不同分化天数的时序表达模式;通过在卫星细胞过表达TMEM182(OE-TMEM182)和干扰TMEM182 (si-TMEM182),采用qRT-PCR检测增殖标志基因的表达变化,采用EdU试验检测EdU阳性细胞数量变化;诱导猪骨骼肌卫星细胞成肌分化后,通过qRT-PCR、 Wstern blot、免疫荧光染色等技术检测成肌分化关键基因mRNA和蛋白的表达水平以及对肌管融合的影响。结果显示,TMEM182在猪肌肉组织中均高表达,在其他组织中几乎不表达;与马身猪相比,TMEM182在大白猪肌肉组织中表达量更高(P<0.05);随着卫星细胞分化天数的增加,TMEM182的表达量在分化第4天和5天时上升,分化第6天时下降,在分化第0天时表达量最低,第7天时表达量最高(P<0.05);互作蛋白结果显示,OE-TMEM182组CDH15、TMEM25、HS3ST1、SEC11A的表达量极显著降低(P<0.01),VWC2L的表达量显著降低(P<0.05);在细胞增殖过程中,过表达TMEM182后极显著下调CDK1、PCNA、Ki67的表达(P<0.01),且EdU阳性细胞数极显著减少(P<0.01)。干扰TMEM182后极显著上调CDK4、CDK1(P<0.01),显著上调Ki67的表达(P<0.05),且EdU阳性细胞数极显著增加(P<0.01)。在成肌分化过程中,过表达TMEM182后,MyoG、MyHC表达量极显著降低(P<0.01),MyoD表达量显著降低(P<0.05);干扰TMEM182后,MyoD、MyoG、MyHC的表达量极显著上升(P<0.01),Myf5的表达量显著上升(P<0.05);同时,TMEM182可能通过抑制PI3K-Akt信号通路调控猪卫星细胞的增殖和分化。本研究结果表明,TMEM182为猪骨骼肌卫星细胞增殖及分化过程中的一个负调控因子,推测其为猪骨骼肌生长发育的一个关键候选基因。 展开更多
关键词 tmem182 肌肉特异性 骨骼肌卫星细胞 增殖 成肌分化
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牦牛TMEM182基因克隆及组织表达
2
作者 张明昊 王佟 +5 位作者 包鹏甲 黄纯 于沁冉 邓婧瑛 褚敏 阎萍 《中国草食动物科学》 北大核心 2025年第2期72-79,共8页
为研究家牦牛TMEM182基因的生物学结构和功能,及其在不同组织中的表达规律,试验以家牦牛肌肉组织cDNA为模板,克隆TMEM182基因的CDS区序列,并进行生物信息学分析,最后测定了该基因在牦牛心、肝、脾、肺、肾、脂肪、肌肉以及睾丸中的表达... 为研究家牦牛TMEM182基因的生物学结构和功能,及其在不同组织中的表达规律,试验以家牦牛肌肉组织cDNA为模板,克隆TMEM182基因的CDS区序列,并进行生物信息学分析,最后测定了该基因在牦牛心、肝、脾、肺、肾、脂肪、肌肉以及睾丸中的表达情况。结果显示:家牦牛TMEM182基因CDS区序列长690 bp,编码299个氨基酸;核苷酸相似性比对发现,家牦牛与野牦牛的同源性最高,为99.7%,与猕猴的同源性最低,为85.9%;生物信息学分析表明,家牦牛TMEM182蛋白的理论等电点为6.48,为轻微酸性跨膜的疏水蛋白,主要分布于内质网中;同时,该蛋白存在12个潜在磷酸化位点和4个糖基化位点;其二级结构主要为无规则卷曲,与TM6SF1、MCTP2、TSPAN33和CDH15等蛋白存在主要相互作用。实时荧光定量结果显示,TMEM182基因在家牦牛被测组织中均有表达,其中在睾丸、肌肉和脂肪中的表达量明显高于其他组织(P<0.01)。 展开更多
关键词 家牦牛 tmem182基因 克隆 组织表达
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PGC介导的TMEM182基因敲除性腺嵌合体鸡的制备 被引量：1
3
作者 温华强 陈家辉 +7 位作者 黄振文 钟菁 陈庚华 聂庆华 张细权 张德祥 陆阳清 罗文 《中国家禽》 北大核心 2024年第9期18-25,共8页
为深入研究TMEM182基因在鸡体内的功能和表现,试验采用原始生殖细胞介导法,利用CRISPR/Cas9介导的HMEJ基因编辑技术,对体外培养的原始生殖细胞TMEM182基因进行敲除,以期产生TMEM182基因缺陷性腺嵌合体鸡。选择3个sgRNA靶向TMEM182基因... 为深入研究TMEM182基因在鸡体内的功能和表现,试验采用原始生殖细胞介导法,利用CRISPR/Cas9介导的HMEJ基因编辑技术,对体外培养的原始生殖细胞TMEM182基因进行敲除,以期产生TMEM182基因缺陷性腺嵌合体鸡。选择3个sgRNA靶向TMEM182基因的第二外显子,利用T7E1进行基因打靶效率检测。对体外培养的PGCs进行外源基因mCherry定点插入,引起TMEM182基因插入突变,通过流式分选获得mCherry+PGCs。将mCherry+PGCs注射到发育至2.5 d的受体鸡胚,观察外源PGCs的性腺整合情况。结果显示:TMEM182-sgRNA1的打靶效率最高;通过将sgRNA1与模板质粒共转染PGCs,得到能稳定表达红色荧光的mCherry+PGCs;孵化第6天,在受体鸡胚性腺能明显观察到发出红色荧光的PGCs,最终孵化出10只小鸡。研究表明:利用CRISPR/Cas9技术对鸡PGCs进行基因编辑,制备性腺嵌合体鸡是一种高效、稳定的制备基因编辑鸡的方法。 展开更多
关键词 鸡 CRISPR/Cas9 PGCS tmem182基因 基因编辑
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绵羊TMEM182基因克隆、生物信息学及组织表达谱分析 被引量：1
4
作者 刘璇 李婧平 +4 位作者 马海叶 张倩雯 王嘉俊 李忠慧 李文蓉 《草食家畜》 2024年第4期1-11,共11页
【目的】本试验旨在克隆绵羊TMEM182基因编码区(CDS)全长序列,并通过在线软件分析TMEM182基因结构和表达蛋白序列,以探究其在绵羊各部位组织中表达水平的变化。【方法】从绵羊尾部脂肪组织中克隆获得TMEM182基因,利用在线生物学信息软件... 【目的】本试验旨在克隆绵羊TMEM182基因编码区(CDS)全长序列,并通过在线软件分析TMEM182基因结构和表达蛋白序列,以探究其在绵羊各部位组织中表达水平的变化。【方法】从绵羊尾部脂肪组织中克隆获得TMEM182基因,利用在线生物学信息软件对TMEM182蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区、糖基化位点、信号肽、二级结构、三级结构和蛋白互作等进行预测分析。同时,采用实时荧光定量PCR方法检测TMEM182基因在绵羊13个组织中的相对表达量,这些组织包括大脑、小脑、心、肾、脾、肝、肺、皮肤、卵巢、尾部脂肪、皮下脂肪、肾周脂肪和肌肉。【结果】绵羊TMEM182基因CDS区全长序列为690bp,编码229个氨基酸,TMEM182基因序列在不同物种间具有较高的保守性。生物信息学预测分析显示,TMEM182属于稳定的疏水性蛋白,具有跨膜结构,无信号肽,具有3个N-糖基化位点,其蛋白二级结构主要由无规则卷曲(38.43%)和2α螺旋(30.57%)组成,而延伸链(24.89%)和β转角(6.11%)的占比相对较少,三级结构预测结果与二级结构预测结果相符。实时荧光定量PCR结果显示,TMEM182基因在肌肉、心和脂肪中表达量显著高于肝、肾、大脑、小脑、皮肤等其它部位组织(P<0.05)。【结论】成功克隆了绵羊TMEM182基因的CDS区片段,分析了该基因在绵羊肌肉组织和脂肪组织中特异性表达。这些研究结果为进一步探究TMEM182基因在绵羊肌肉生长发育和脂肪沉积过程中的分子作用机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 tmem182基因 基因克隆 组织表达分析 生物信息学分析
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