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题名莱茵衣藻TLP2多克隆抗体制备及其突变体鉴定
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作者
刘雁霞
陶冶
张媛媛
鲍冬雪
樊振川
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机构
天津科技大学食品科学与工程学院
天津科技大学大健康生物技术国家国际科技合作基地
天津科技大学食品营养与安全国家重点实验室
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出处
《食品与生物技术学报》
北大核心
2025年第1期99-106,共8页
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基金
国家自然科学基金面上项目(32070698)
国家自然科学基金青年基金项目(32200558)。
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文摘
【目的】制备兔抗莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii,C.reinhardtii)类Tubby家族蛋白2(TLP2)多克隆抗体来鉴定莱茵衣藻tlp2突变体,研究莱茵衣藻TLP2的生物学功能。【方法】通过聚合酶链式反应(PCR)获得tlp2目的基因片段,构建原核表达载体pET-28a(+)-tlp2、pMAL-c2x-tlp2。将2种重组质粒通过化学转化的方法转至大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-Dthiogalactoside,IPTG)诱导表达融合蛋白6×His-TLP2及MBP-TLP2。将纯化后的6×His-TLP2融合蛋白免疫新西兰大白兔来获得抗血清。【结果】通过间接ELISA法测定抗血清效价达1∶51200,对抗血清进行protein A和抗原抗体纯化,在1∶500的稀释条件下,蛋白质免疫印迹表明TLP2抗体能够特异性识别莱茵衣藻TLP2。【结论】作者制备出了高特异性、高灵敏度的兔抗莱茵衣藻TLP2多克隆抗体,并鉴定出一株tlp2突变体,可用于后续莱茵衣藻TLP2在纤毛生成和纤毛信号转导中的功能研究。
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关键词
莱茵衣藻
tlp2
多克隆抗体
蛋白质纯化
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Keywords
Chlamydomonas reinhardtii
tlp2
polyclonal antibodies
protein purification
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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