目的探究溶质载体家族7成员5(solute carrier family 7 member 5,SLC7A5)促进转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肺成纤维细胞活化增殖的作用。方法人肺成纤维细胞用TGF-β1孵育24h,使用PCR-Array方法...目的探究溶质载体家族7成员5(solute carrier family 7 member 5,SLC7A5)促进转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肺成纤维细胞活化增殖的作用。方法人肺成纤维细胞用TGF-β1孵育24h,使用PCR-Array方法筛选靶基因。使用沉默慢病毒sh-SLC和重表达慢病毒r-SLC转染成纤维细胞,利用Western Blot实验和qRT-PCR实验观察目标基因SLC7A5和成纤维细胞活化指标α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白(fibroblast specific protein,FSP)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,COL-1)合成。qRT-PCR实验检测mTOR信号通路分子。CCK-8方法检测各组成纤维细胞增殖速度。流式细胞术检测各组细胞周期变化情况。结果与对照组PBS的细胞相比,TGF-β1实验组的HLFs中SLC7A5高表达,沉默SLC7A5基因降低SLC7A5、α-SMA、FSP和COL-1表达量以及mTOR和4EBP1的转录水平,抑制成纤维细胞增殖速度,G1期比例增加,S期降低,而回复实验表明重新表达SLC7A5基因的r-SLC能够逆转以上现象。结论SLC7A5可能通过mTOR信号通路促进TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化增殖,SLC7A5有望成为肺纤维化疾病中抑制成纤维细胞活化增殖的靶点。展开更多
文摘目的探究溶质载体家族7成员5(solute carrier family 7 member 5,SLC7A5)促进转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肺成纤维细胞活化增殖的作用。方法人肺成纤维细胞用TGF-β1孵育24h,使用PCR-Array方法筛选靶基因。使用沉默慢病毒sh-SLC和重表达慢病毒r-SLC转染成纤维细胞,利用Western Blot实验和qRT-PCR实验观察目标基因SLC7A5和成纤维细胞活化指标α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白(fibroblast specific protein,FSP)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,COL-1)合成。qRT-PCR实验检测mTOR信号通路分子。CCK-8方法检测各组成纤维细胞增殖速度。流式细胞术检测各组细胞周期变化情况。结果与对照组PBS的细胞相比,TGF-β1实验组的HLFs中SLC7A5高表达,沉默SLC7A5基因降低SLC7A5、α-SMA、FSP和COL-1表达量以及mTOR和4EBP1的转录水平,抑制成纤维细胞增殖速度,G1期比例增加,S期降低,而回复实验表明重新表达SLC7A5基因的r-SLC能够逆转以上现象。结论SLC7A5可能通过mTOR信号通路促进TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化增殖,SLC7A5有望成为肺纤维化疾病中抑制成纤维细胞活化增殖的靶点。