基金supported by the National Natural Science Foundation of China(No.82271914)Postgraduate Research&Practice Innovation Program of Jiangsu Province,China(No.KYCX22_3382)Nantong Special Fund for Basic Research,China(No.JC12022021)。
文摘本文旨在研究TFEB activator 1(TA1)改善小胶质细胞自噬降解β淀粉样蛋白寡聚体(oligomeric amyloid-β,oAβ)的机制,探讨TA1对于阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)体外小胶质细胞模型的治疗效果。在体外培养的原代小胶质细胞中,分别给予oAβ(1μmol/L)处理0、3、12、24 h,或以oAβ(1μmol/L)和TA1(1μmol/L)联合处理细胞12 h后,巴弗洛霉素A1(100 nmol/L)继续处理细胞1 h。采用荧光示踪法检测小胶质细胞内吞或降解oAβ1-42的水平;采用mCherry-EGFP-LC3的慢病毒转染原代小胶质细胞,检测自噬通量的变化;利用免疫荧光法检测oAβ1-42与溶酶体相关膜蛋白1(lysosome-associated membrane protein 1,LAMP1)或微管相关蛋白轻链3(microtuble-associated protein light chain 3,LC3)的共定位、TFEB核表达及自噬小体数量的变化;采用qRT-PCR法检测自噬基因Lamp1、Atg5、Map1lc3b的表达变化。结果显示:长时程oAβ暴露后,小胶质细胞内吞与降解oAβ的能力明显下降,细胞内自噬小体数量及自噬通量降低,自噬调节因子TFEB的核表达降低,自噬基因表达降低,引发oAβ的自噬降解受损;给予上述细胞TA1治疗后,可观察到TFEB的核表达明显上调,细胞内自噬基因表达上调,自噬通量恢复,小胶质细胞内吞与降解oAβ的能力得到明显恢复。因此,TA1可以通过上调小胶质细胞TFEB介导的自噬,改善AD小胶质细胞清除oAβ的能力,提示TA1可作为治疗AD的潜在药物。
