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抗人转录因子TFDP3和TFDP1多肽抗体的制备
1
作者 田婵 李云燕 +2 位作者 乔欢 张毓 陈慰峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期875-877,共3页
目的:制备兔抗人转录因子TFDP3、TFDP1的多克隆抗体,并鉴定其反应性及特异性。方法:选择TFDP3和TFDP1差异较大肽段,利用人工合成多肽免疫家兔,采用真核表达载体瞬时转染HEK293细胞表达TFDP3和TFDP1真核蛋白,通过Western blot分析抗体的... 目的:制备兔抗人转录因子TFDP3、TFDP1的多克隆抗体,并鉴定其反应性及特异性。方法:选择TFDP3和TFDP1差异较大肽段,利用人工合成多肽免疫家兔,采用真核表达载体瞬时转染HEK293细胞表达TFDP3和TFDP1真核蛋白,通过Western blot分析抗体的反应性和特异性。结果:通过氨基酸序列比对选择TFDP3 17-26,TFDP1 17-32氨基酸残基合成多肽,制备了兔抗人TFDP3、TFDP1多肽抗体,Western blot检测显示,抗TFDP3抗体可以特异性识别TFDP3,而抗TFDP1抗体既可识别TFDP1又可与TFDP3结合。结论:制备了兔抗人TFD31和TFDP1的多肽抗体,且TFDP3抗体与TFDP1无交叉反应。 展开更多
关键词 tfdp3 TFDP1 多肽抗体
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TFDP3对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡调控作用的初步研究 被引量：2
2
作者 任丽芬 马越云 +2 位作者 岳乔红 苏明权 郝晓柯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期347-349,353,共4页
目的:研究TFDP3对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡作用的影响,以及探讨TFDP3与E2F1相互作用后对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡的调控作用。方法:采用重组质粒pcDNA3.1-TFDP3,pCMV-E2F1-HA分别转染LNCaP细胞,并设空载体对照组。转染24 h后提... 目的:研究TFDP3对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡作用的影响,以及探讨TFDP3与E2F1相互作用后对前列腺癌LNCaP细胞自噬及凋亡的调控作用。方法:采用重组质粒pcDNA3.1-TFDP3,pCMV-E2F1-HA分别转染LNCaP细胞,并设空载体对照组。转染24 h后提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR检测TFDP3、E2F1、以及LC3B基因表达的变化,Western blot方法检测自噬相关基因(LC3B)蛋白表达水平的变化。并采用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果:TFDP3可以诱导LNCaP细胞中自噬基因LC3B的表达,并且这种作用可以受到E2F1的抑制;TFDP3可以抑制E2F1诱导的细胞凋亡。结论:TFDP3可以诱导LNCaP细胞中自噬基因LC3B的表达,可以抑制E2F1诱导的细胞凋亡,提示TFDP3在前列腺癌细胞中发挥着重要的调控作用。 展开更多
关键词 tfdp3 E2F1 自噬 凋亡
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癌睾丸抗原TFDP3与乳腺癌上皮间质化(EMT)的相关性研究 被引量：1
3
作者 肖鹏 初明 +9 位作者 孙泽文 杜毅聪 张明波 徐兰 初正云 陈雪 何嘉勰 丁玲昱 焦运燊 王月丹 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第1期1-3,8,共4页
目的:本研究探讨了癌睾丸抗原TFDP3与乳腺癌细胞上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法:本研究中选取了乳腺癌细胞系(MCF-10A,MCF-7,SK-BR-3和MDA-MB-231)作为研究对象,通过Western Blot的方法筛选获得了TFDP... 目的:本研究探讨了癌睾丸抗原TFDP3与乳腺癌细胞上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系。方法:本研究中选取了乳腺癌细胞系(MCF-10A,MCF-7,SK-BR-3和MDA-MB-231)作为研究对象,通过Western Blot的方法筛选获得了TFDP3低水平表达的乳腺癌细胞株。进一步通过质粒转染的方式构建TFDP3过表达的细胞系模型,观察TFDP3在EMT中的作用。结果:TFDP3在MCF-10A及SK-BR-3中不表达,在间质化程度较高的MDA-MB-231中高水平表达,而在上皮化程度较高的MCF-7中的低水平表达。MCF-7中过表达TFDP3后,上皮细胞标记分子E-cadherin表达下调,而间质细胞标记分子N-cadherin、Snail、Twist及细胞骨架蛋白Vimentin表达上调。结论:TFDP3可以促进乳腺癌细胞发生EMT。 展开更多
关键词 癌-睾丸抗原 tfdp3 乳腺癌 上皮间质化
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E2F1对TFDP3表达的调控及其对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响 被引量：1
4
作者 李蕊 马越云 +4 位作者 辛艺娟 刁艳君 杨静 岳乔红 郝晓柯 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期125-129,共5页
目的:构建含TFDP3基因启动子和荧光素酶报告基因的重组载体pGL3-TFDP3-promoter,观察E2F1对TFDP3转录及表达的调控作用以及TFDP3对E2F1诱导肿瘤细胞凋亡的影响。方法:以人前列腺癌PC3细胞系基因组DNA为模板,PCR扩增TFDP3启动子序列并克... 目的:构建含TFDP3基因启动子和荧光素酶报告基因的重组载体pGL3-TFDP3-promoter,观察E2F1对TFDP3转录及表达的调控作用以及TFDP3对E2F1诱导肿瘤细胞凋亡的影响。方法:以人前列腺癌PC3细胞系基因组DNA为模板,PCR扩增TFDP3启动子序列并克隆入荧光素酶报告基因载体,与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA瞬时单独或共同转染PC3细胞,测定荧光素酶活性以观察E2F1对TFDP3启动子的调控作用,Western blotting检测pCMV-E2F1-HA转染对PC3细胞内TFDP3表达的影响,流式细胞术检测TFDP3与E2F1相互作用对前列腺癌细胞凋亡的影响。结果:成功构建TFDP3基因启动子重组质粒pGL3-TFDP3-promoter,与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA共转染PC3细胞后,TFDP3启动子诱导的荧光素酶活性较单独转染pGL3-TFDP3-promoter显著升高[(1.14±0.06)vs(0.61±0.05),P<0.05]。转染pCMV-E2F1-HA的PC3细胞的TFDP3蛋白表达是未转染细胞的2.7倍[(0.24±0.03)vs(0.09±0.02),P<0.05]。pCMV-E2F1-HA转染后PC3细胞凋亡率较未转染组显著上升[(7.10±0.003)%vs(2.66±0.001)%,P<0.05],而pCMV-E2F1-HA与pcDNA3.1-TFDP3共转染后细胞凋亡率较pCMV-E2F1-HA组显著下降[(4.92±0.002)%vs(7.10±0.003)%,P<0.05]。结论:E2F1可增强TFDP3启动子的活性,增加TFDP3蛋白的表达,其可能通过此机制抑制E2F1诱导的前列腺癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 E2F1 转录因子二聚化配体3 双荧光素酶报告基因 启动子 前列腺癌 PC3细胞
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转录因子二聚化配体3(TFDP3)在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌分子分型的相关性研究 被引量：1
5
作者 陈雪 初明 +8 位作者 杨珂 阴凯麟 何嘉勰 徐兰 焦运燊 丁羚昱 刘彦辰 初正云 王月丹 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第1期1-6,共6页
目的:本研究旨在分析总结癌-睾丸抗原TFDP3在乳腺癌中的表达规律,探究TFDP3表达与乳腺癌分型及发病进程关系。方法:通过对不同分型及分期的乳腺癌组织切片进行免疫组化检测,分析TFDP3在其中的表达情况,并结合样本来源患者的临床信息,对T... 目的:本研究旨在分析总结癌-睾丸抗原TFDP3在乳腺癌中的表达规律,探究TFDP3表达与乳腺癌分型及发病进程关系。方法:通过对不同分型及分期的乳腺癌组织切片进行免疫组化检测,分析TFDP3在其中的表达情况,并结合样本来源患者的临床信息,对TFDP3的表达与乳腺癌分子分型、分期及预后的相关性进行统计分析。同时,通过Western Blot检测了5种乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MCF-7、SK-BR-3、T47D及MCF-10A)中TFDP3的表达情况,并通过细胞免疫荧光实验,检测TFDP3在细胞中的定位。结果:TFDP3在已检测的乳腺癌样本中的表达率为49%。乳腺癌临床分子分型标记物HER2的表达与TFDP3的表达呈正相关,但乳腺癌的分期、临床病理分型以及临床分子分型标记物ER、PR的表达均与肿瘤组织中TFDP3的表达无相关性。结论:TFDP3在各在乳腺癌组织中高表达,其表达量与HER2的表达量呈正性相关。这为研究已TFDP3为靶点的乳腺癌免疫治疗,提供了新的依据。 展开更多
关键词 乳腺癌 转录因子二聚化配体3 癌睾丸抗原 HER-2 分子分型
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通过CRISPR/Cas9技术抑制TFDP3基因对前列腺癌PC3细胞生物学功能的影响 被引量：2
6
作者 李蕊 杨柳 +4 位作者 李金洁 刁艳君 苏明权 郝晓柯 刘家云 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期443-450,共8页
目的:通过CRISPR/Cas9技术构建前列腺癌PC3细胞TFDP3基因敲除的稳转株,探讨抑制TFDP3表达对PC3细胞周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法:通过生物信息学筛选sgRNA,通过CRISPR/Cas9技术、构建抑制TFDP3基因表达的sgRNA-Cas9共转染慢... 目的:通过CRISPR/Cas9技术构建前列腺癌PC3细胞TFDP3基因敲除的稳转株,探讨抑制TFDP3表达对PC3细胞周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法:通过生物信息学筛选sgRNA,通过CRISPR/Cas9技术、构建抑制TFDP3基因表达的sgRNA-Cas9共转染慢病毒,感染PC3细胞后筛选获取稳转细胞株。通过流式细胞术对TFDP3基因敲除的实验组与空白对照组进行细胞周期和凋亡检测,并进一步通过划痕实验和Transwell实验进行细胞迁移和侵袭能力检测。结果:通过生物信息学筛选获得3条sgRNA,其中sgRNA2有明显的抑制前列腺癌细胞基因表达的功能;通过CRISPR/Cas9技术成功构建了基于CRISPR/Cas9介导的TFDP3低表达的PC3细胞稳转株。抑制TFDP3基因表达后,相比于对照组,KO组中G0/G1期细胞百分比增加、G2/M期细胞百分比下降(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),细胞迁移率明显下降[24 h迁移率:(44.00±1.60)%vs(65.00±4.40)%,P<0.01],穿过聚碳酸酯膜的侵袭细胞数明显下降[(185.89±11.71)vs(248.33±11.95)个,P<0.01]。结论:通过CRISPR/Cas9技术抑制TFDP3基因表达后,PC3细胞发生周期阻滞、凋亡率也有所增加、迁移和侵袭能力显著减弱,提示TFDP3是一个前列腺癌促癌基因。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 tfdp3基因 前列腺癌 PC3细胞 细胞周期 凋亡 迁移 侵袭
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