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环境因素对Bacillus amyloliquefaciens TF28在土壤中定殖的影响 被引量:4
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作者 姜威 孟利强 +4 位作者 陈靖宇 曹旭 胡基华 李晶 张淑梅 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1479-1484,共6页
为了明确生防菌株 Bacillus amyloliquefaciens TF28在土壤中的定殖动态,采用活菌计数及菌株特异PCR验证相结合的方法,研究温度、含水量、pH、接种量、土壤类型和病原菌对其在离体土壤中定殖的影响。结果表明,适于菌株TF28定殖的温度、p... 为了明确生防菌株 Bacillus amyloliquefaciens TF28在土壤中的定殖动态,采用活菌计数及菌株特异PCR验证相结合的方法,研究温度、含水量、pH、接种量、土壤类型和病原菌对其在离体土壤中定殖的影响。结果表明,适于菌株TF28定殖的温度、pH、含水量范围较广,在20~35 ℃,pH 4.5~8.6,含水量 5%~35%范围内均能有效定殖;25 ℃、弱酸性和中性、15%含水量更利于其定殖;接种量和病原菌显著影响其定殖,接种量越大,定殖能力越强;病原菌在接种后14 d内显著促进其定殖;另外,土壤有机质质量分数高更利于其定殖。该研究为菌株TF28的推广应用提供了理论依据。 展开更多
关键词 生防菌株 BACILLUS amyloliquefaciens tf28 土壤 定殖
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解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白AP1的表达、纯化与抑菌活性 被引量:3
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作者 姜威 李晶 +4 位作者 孟利强 胡基华 刘宇帅 陈静宇 张淑梅 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期3083-3087,共5页
本研究采用人工合成方法合成抗菌蛋白基因AP1,连接到p ET32a(+)表达载体,导入E.coli BL21菌株进行原核表达,表达产物经HIS柱纯化和肠激酶切割后测定抑菌活性。人工合成了分子量为321 bp的抗菌蛋白基因AP1,获得了p ET32a(+)-AP1-BL21基... 本研究采用人工合成方法合成抗菌蛋白基因AP1,连接到p ET32a(+)表达载体,导入E.coli BL21菌株进行原核表达,表达产物经HIS柱纯化和肠激酶切割后测定抑菌活性。人工合成了分子量为321 bp的抗菌蛋白基因AP1,获得了p ET32a(+)-AP1-BL21基因工程菌株,该菌株在0.1 mmol/L IPTG,25℃诱导2 h,蛋白表达率为43.2%,HIS柱纯化后获得SDS-PAGE电泳一条带分子量为27 k D的融合蛋白,其含量为124.82 mg/L,收率为92%,肠激酶切割后的蛋白能抑制大豆根腐病菌和水稻恶苗病菌的生长。获得高效表达抗菌蛋白AP1的工程菌株,该菌株表达的抗菌蛋白纯化后具有抑菌活性,在植病生防方面具有应用潜力。 展开更多
关键词 BACILLUS amyloliquefaciens tf28 抗菌蛋白AP1 表达纯化 抑菌活性
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解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因TasA克隆与表达 被引量:2
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作者 张淑梅 姜威 +5 位作者 孟利强 刘宇帅 曹旭 胡基华 李晶 高娃 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期130-135,共6页
[目的]克隆解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因Tas A并进行原核表达和抑菌活性研究。[方法]采用PCR方法扩增抗菌蛋白基因Tas A,连接p ET22b载体,导入E.coli BL21(DE3)菌株,进行IPTG低温诱导表达,用His柱纯化表达产物,采用纸片方法测定其抑... [目的]克隆解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因Tas A并进行原核表达和抑菌活性研究。[方法]采用PCR方法扩增抗菌蛋白基因Tas A,连接p ET22b载体,导入E.coli BL21(DE3)菌株,进行IPTG低温诱导表达,用His柱纯化表达产物,采用纸片方法测定其抑菌活性。[结果]从解淀粉芽孢杆菌TF28中克隆了抗菌蛋白基因Tas A,以p ET22b为表达载体构建高效表达抗菌蛋白Tas A的基因工程菌株,该菌株在0.05 mmol/L IPTG 15℃诱导4 h,Tas A蛋白表达率为34.2%,经His柱纯化后获得SDS-PAGE电泳一条带的纯化Tas A蛋白,其含量为67.8 mg/L,收率为90.8%。该蛋白抑制番茄灰霉病和叶霉病、玉米茎基腐病和水稻稻曲病菌生长。[结论]实现抗菌蛋白基因Tas A的原核表达,表达率34.2%,表达蛋白具有广谱抑菌活性,在植病生防方面具有应用潜力。 展开更多
关键词 BACILLUS amyloliquefaciens tf28 抗菌蛋白基因TasA 表达纯化 抑菌活性
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解淀粉芽孢杆菌TF28活菌定量PMA-qPCR技术
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作者 张淑梅 姜威 +3 位作者 胡基华 孟利强 李晶 夏海华 《生物技术》 CAS 2020年第4期346-351,共6页
[目的]建立解淀粉芽孢杆菌TF28特异性活菌分子定量技术。[方法]基于TF28特有基因设计qPCR引物,建立菌株特异性qPCR技术;优化PMA处理条件,建立PMA-qPCR定量TF28活菌技术,对其特异性、灵敏性与可靠性进行检测。[结果]建立的qPCR技术对菌株... [目的]建立解淀粉芽孢杆菌TF28特异性活菌分子定量技术。[方法]基于TF28特有基因设计qPCR引物,建立菌株特异性qPCR技术;优化PMA处理条件,建立PMA-qPCR定量TF28活菌技术,对其特异性、灵敏性与可靠性进行检测。[结果]建立的qPCR技术对菌株TF28具有特异性。优化的PMA处理条件为:PMA终浓度150μmol/L、暗培养10 min、光照20 min,在此条件下,可封闭10^(6)cfu/mL以下死菌基因组DNA;建立的PMA-qPCR技术特异性强,灵敏度高,最低检测限10^(2)cfu/mL;线性关系好,R^(2)=0. 997;在菌浓度10^(3)cfu/mL~10^(7)cfu/mL范围内重复性好,CT值变异系数小于2%,与平板活菌计数比较,差异不显著。[结论]建立的PMA-qPCR技术对TF28具有特异性,能够对菌浓度10^(3)cfu/mL~10^(7)cfu/mL活菌进行定量。 展开更多
关键词 Bacillus amyloliquefaciens tf28 PMA-qPCR 活菌定量 特异性
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基于转录组挖掘不同碳源条件下解淀粉芽孢杆菌TF28脂肽合成相关基因 被引量:1
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作者 闫更轩 王向向 +3 位作者 田缘 刘治廷 张淑梅 夏海华 《湖北农业科学》 2023年第5期172-178,共7页
以解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)TF28为供试菌株,设置葡萄糖组(对照)、果糖组、木糖组3个实验组,通过转录组测序鉴定差异基因,分别对差异基因进行功能分析,挖掘脂肽合成调控基因。果糖组共鉴定到差异基因688个,上调基因52... 以解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)TF28为供试菌株,设置葡萄糖组(对照)、果糖组、木糖组3个实验组,通过转录组测序鉴定差异基因,分别对差异基因进行功能分析,挖掘脂肽合成调控基因。果糖组共鉴定到差异基因688个,上调基因522个,下调基因166个;木糖组共鉴定到差异基因855个,上调基因691个,下调基因164个。不同碳源改变了解淀粉芽孢杆菌TF28脂肽合成群体感应系统、双组分系统全局调控因子的表达水平,并影响脂肽必需氨基酸及脂肪酸的合成代谢,为进一步研究脂肽合成的生物学调控机制提供参考。 展开更多
关键词 脂肽 解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) tf28 转录组 差异基因
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